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Citocromo(P450(y(actuación(sobre(los(Xenobióticos( !

El! citocromo! P450! es! una! hemoproteína! presente! en! la! membrana! de! las! mitocondrias! y! del! retículo! endoplasmático! que! se! encuentra! ampliamente! distribuido! en! animales,! plantas! y! protistas.! Los! diferentes! tipos! de! P450! forman! una! superfamilia! de! proteínas! con! diferentes! secuencias! y! una! amplia! versatilidad!funcional.!Cuando!este!citocromo!se!encuentra!reducido!por!NADPH,!se!une!al!monóxido!de! carbono! y! muestra! una! absorbancia! máxima! de! 450! nm! de! longitud! de! onda,! y! de! aquí! le! viene! su! denominación.! La mayor parte del citocromo P450 se encuentra en el hígado, pero también hay cantidades significativas en el intestino delgado.! Participa!activamente!en!el!metabolismo!de!xenobióticos,!sustancias!de!las!que!hablaremos!después,!y!en! la! síntesis! de! sustancias! endógenas! como! el! colesterol,! ácidos! grasos,! hormonas! esteroideas,! vitaminas! liposolubles!y!ácidos!biliares.!!

Estructura(del(citocromo(P450( !El!citocromo!P450!libre!presenta!una!estructura!cristalina!con!un!hierro!unido!al!grupo!hemo!en!el!plano! ecuatorial,!a!un!grupo!tiol!(JSH)!de!una!cisteína!y!también!a!una!molécula!de!agua.!Esta!región!del!hemo,! que! es! altamente! conservativa! y! se! encuentra! en! un! ambiente! hidrofóbico,! corresponde! al! centro! catalítico.! Hay! diversas! enzimas! que! dependen! del! citocromo! P450,! sin! embargo! éste! no! presenta! variaciones!significativas!en!la!estructura!de!su!sitio!activo.!! Alrededor!del! grupo!hemo!encontramos!una!combinación!de!regiones!αJhélices,!de!entre!las!cuales!hay! una! hélice! I!implicada! en! el! suministro! de!protones! a! los! intermediarios!hidroperoxo! y!peroxo! del! ciclo! catalítico! de! funcionamiento! del! citocromo.! La! región! hemo! presenta! un! mecanismo! común! de! transferencia!de!protones!y!electrones!y!de!activación!de!oxígeno.!En!el!núcleo!también!encontramos!αJ hélices,! dos! láminas! β! y! una! espiral! denominada! meander' loop' (serpentina),! importante! para! la! estabilización!de!la!estructura!terciaria!de!la!proteína!y!la!unión!del!grupo!hemo.!En!los!sitios!de!unión!y! reconocimiento!de!sustratos!del!citocromo!encontramos!unas!regiones!más!variables!que!corresponden!a! seis!regiones! denominadas!SRSs,! substrate'recognition' sites,!las! cuales!determinan!la! especificidad!Jque! es! bajaJ! de! los! sustratos.! ! El! enzima! se! encuentra! anclado! a! la! membrana! a! través! de! su! extremo! NJ terminal.!

(Mecanismo(enzimático(del(CYP( El! PJ450! interviene! fundamentalmente! en! reacciones! de! monooxigenación! en! las! que! la! inserción! de! un!átomo!de!oxígeno!molecular!(O2)!en!un!sustrato!orgánico!(RH)!a!la!vez!que!el!otro!átomo!de!oxígeno! es!reducido!a!agua:! !

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!

!

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RH!+!O2!+!2H+!+!2e–!→!ROH!+!H2O!

A!los!enzimas!que!catalizan!este!tipo!de!oxidaciones!se!les!conoce!como!monooxigenasas.!! ! La!característica!principal!de! la!reacción! catalizada!por! el!P450!es!la! capacidad!del!átomo! de!Fe! (que!se! encuentra!en!el!centro!catalítico)!de!realizar!reacciones!cíclicas!de!oxidaciónJreducción!en!la!interrelación! sustratoJoxígeno.! Los! dos! electrones! requeridos! por! la! reacción! de! la! monooxigenasa! son! proporcionados! por! el! NADPH! pero!surge!un!problema:!el!NADPH!es!un!donador!de!dos!electrones,!pero!el!citocromo!P450,!con!solo!un! grupo!prostético,!sólo!puede!aceptar!un!electrón!a!la!vez.!La!Flavoproteina!nos!soluciona!este!problema!

al! ser! capaz! de! aceptar! dos! electrones! y,! a! su! vez,! transferirlos! individualmente! bien! a! una! proteína! ferrosulfatada! intermedia! (en! la! mitocondria)! o! bien! directamente! al! citocromo! P450! (en! el! retículo! endoplasmático).!!! Por!lo!tanto,!la!transferencia!de!electrones!desde!el!NADPH!hasta!el!citocromo!P450!se!lleva!a!cabo!por! dos!sistemas!de! transporte!de! electrones!que! están!ubicados! casi!exclusivamente!en!las! mitocondrias!o! en!el!retículo!endoplasmático.! J

J

En! el! retículo! endoplasmatico:! se! compone! del! complejo! citocromo! P450! reductasa,! que! contiene! flavoproteinas! FMN! y! FAD! que! aceptaran! los! electrones! del! NADPH! y! los! transferirán! al! citocromo! P450,! donde! se! llevara! a! cabo! la! reacción.! El! citocromo! P450! también! puede! aceptar! uno! de! los! electrones!a!través!!de!otro!citocromo!con!el!que!se!encuentra!relacionado,!el!b5.! En! la! mitocondria,! los! electrones! también! son! cedidos! por! el! NADPH,! pero! pasan! al! complejo! adrenodoxina!reductasa,!que!contiene!la!Flavoproteina!FAD.!Desde!aquí!pasaran!a!la!adrenodoxina,! que! contiene! una! proteína! ferrosulfatada! que! será! la! que! acepte! los! electrones! y! los! pase! al! citocromo!P450.!

Ciclo(catalítico( El!primer&paso!del!proceso!catalítico!consiste!en!la!unión!del!substrato!a!la!forma!Fe3+!del!enzima!P450.! En! el! segundo& paso& un! electrón! (eJ)! donado! por! el! NADPH! puede! entonces! ser! transferido! al! complejo! enzimaJsustrato! vía! la! NADPHJCitocromo! P450Jreductasa! (Flavoproteína! o! Fp1)! o! adrenodoxina.! Se! produce! la! reducción! del! complejo! hemoproteínaJsubstrato! al! estado! ferroso! (el! Fe3+! del! grupo! hemo! pasa!a!Fe2+)!gracias!al!aporte!del!electrón.!! El!tercer& paso&consiste!en!que& el! oxígeno!molecular! es!incorporado!al! complejo!enzimaJsustrato!formar! un!complejo!superóxido.! En!el!cuarto&paso!este!complejo!formado!acepta!un!segundo!eJ!que!puede!ser!donado!bien!por!el!NADH! vía! la! NADHJCitocromo! b5Jreductasa! (Fp2)! y! Citocromo! b5,! por! el! NADPH! vía! Fp1! ! o! bien! por! la! adrenodoxina.! En! este!paso,! el! oxígeno! molecular!forma! una! especie! altamente!reactiva! (Radical! Anión! Superóxido!O2^!ó!Hidroperóxido!O22J),!que!interactúa!con!el!sustrato!dando!lugar!la!liberación!de!uno!de! los! átomos! de! oxígeno! en! forma! de! una! molécula! de! agua! y! la! incorporación! del! otro! en! el! substrato! dando!lugar!a!la!formación!de!un!metabolito!hidroxilado,!el!cual!podrá!ser!excretado!o!utilizado!según!sea! su!función.!El!P450!con!Fe3+!!puede!volver!a!empezar!la!reacción.! El!resultado!de!la!actividad!enzimática!del!PJ450!no!siempre!es!la!inserción!de!oxígeno!en!la!molécula!del! substrato,! pudiendo! catalizar! también! reacciones! de! deshidratación,! deshidrogenación,! isomerización,! dimerización,! e! incluso! reducción.! Su! característica! principal! es! la! capacidad! del! Fe! para! realizar! reacciones!cíclicas!de!oxidaciónJreducción.!

Familias(y(subfamilias(de(Citocromos(P450( Los! criterios!para!clasificar!un!CYP!dentro!de!una!familia!o!de!una!subfamilia! dependen!de!la!homología! en! la! secuencia! de! aminoácidos! que! los! formen.! Una! homología! superior! al! 40%! entre! dos! CYP! nos! permite! considerarlos! dentro! de! la! misma! familia.! Cuando! la! similitud! es! superior! al! 55%! se! clasifican! dentro! del! mismo! subgrupo.! La! denominación! de! las! familias! es! numérica,! mientras! que! la! de! las! subfamilias!se!hace!con!una!letra.!Por!último,!dentro!de!una!misma!subfamilia!se!consideran!distintos!CYP! cuando! difieren! en! más! del! 3%! de! su! secuencia,! y! también! recibirían! una! denominación! numérica.! Ejemplo:!CYP2E1!seria!de!la!familia!2,!subfamilia!E!y!citocromo!1.!

Hay! 13! familias! y! 22! subfamilias! de! CYP! P450.! Las! familias! 1! a! 4! son! responsables! de! la! oxidación! de! drogas!y!otros!xenobióticos,!mientras!que!otro!grupo!(familias!5,!7,!11,!17,!19,!21!y!27)!se!encargan!de!la! síntesis!de!esteroides!endógenos.!Mientras!que!los!miembros!del!primer!grupo!se!localizan!en!el!retículo! endoplasmático!liso,!los!del!segundo!se!hallan!predominantemente!en!las!mitocondrias.!Hasta!la!fecha!se! han!identificado!más!de!40!CYP!en!humanos.! Las!isoformas!más!importantes!del!citocromos!P450!desde!el!punto!de!vista!clínico!son!los!siguientes:! -

Citocromo&CYP2D6:!El!citocromo!CYP2D6!ha!sido!la!isoenzima!P450!más!extensamente!estudiada.!Este! citocromo! metaboliza! alrededor! de! 40! sustratos! incluyendo! antidepresivos,! antipsicóticos,! betabloqueantes,!antiarrítmicos!tipo!IC,!etcétera.!!

-

Citocromo& CYP1A2:! Esta! isoenzima! se! encarga! de! la! NJdesmetilación! de! distintos! fármacos.! No! se! ha! determinado!si!existe!polimorfismo!genético!de!este!citocromo,!comentan,!pero!algunos!datos!sugieren! que!esto!efectivamente!ocurre.!El!CYP1A2!es!inhibido!con!alta!potencia!por!la!fluvoxamina!y!la!furafilina.!

-

Subfamilia& de& citocromos& CYP2C:! Esta! subfamilia,! indican! los! autores,! contiene! por! lo! menos! siete! isoenzimas! diferentes,! incluyendo! las! 2C9,! 2C10! y! 2C19.! Además,! se! ha! observado! polimorfismo! genético! del! citocromo! CYP2C19! en! el! 18%! de! los! japoneses,! el! 19%! de! los! americanos! de! origen! africano! y! el! 8%! de! los! africanos.! Las! enzimas! de! esta! subfamilia! de! citocromos! desmetilan! fármacos,! como!el!diazepam,!y!son!inhibidas!por!fluvoxamina,!fluoxetina!y!sertralina.!

-

Citocromo&CYP2A4:!Esta!es!posiblemente!la!enzima!de!mayor!importancia!clínica,!opinan!los!autores,!ya! que! representa! más! del! 60%! del! total! de! enzimas! P450! hepáticas.! El! citocromo! CYP2A4! puede! ser! inducido! e! inhibido! por! etanol! y! la! fluoxetina,! lo! cual! lleva! a! alteraciones! cognitivas! y! psicomotoras! importantes!y!se!asocia!con!un!cuadro!de!latidos!irregulares!y!dificultad!respiratoria.!

Funciones(fisiológicas(de(los(citocromos(P450(y(síntesis(de(hormonas(esteroides(( Una! de! las! principales! funciones!de! los! CYP! es! la! síntesis! de! hormonas! esteroides!J! esteroides! sexuales! (andrógenos,! estrógenos! y! progestágenos),! mineralocortocoides! y! corticosteroidesJ! derivadas! del! colesterol.!Por!ejemplo,!el!CYP!11A1!actúa!en!la!ruptura!de!la!cadena!isoprenoide!del!colesterol!(actividad! 20J22! liasa! o! SCC)! para! dar! lugar! a! pregnegnolona.! Los! CYP! también! catalizan! las! reacciones! de! aromatización!(actividad!aromatasa! del!CYP! 19),!en! las!que! se!convierte! los!andrógenos,! testosterona!y! androstenediona,! a! estrógenos,! ! estradiol! y! estrona! respectivamente,! hormonas! esteroideas! sexuales! formadas!al!final!de!la!ruta!esteroidogénica.!! El! complejo! enzimático! P450! aromatasa! es! un! miembro! de! la! superfamilia! de! citocromos! P450! y! es! el! único! miembro! de! la! familia! 19! dentro! del! subgrupo! de! hidroxilasas! de! esteroides! con! una! mayor! especificidad! catalítica! por! el! metabolismo! de! esteroides.! El! complejo! activo! está! compuesto! por:! una! aromatasa! citocromo! P450! (P450arom)! que! se! une! al! sustrato! y! que! tiene! unida! una! Flavoproteína! (NADPHJcitocromo! P450! reductasa)! que! facilita! el! flujo! de! electrones! necesarios! para! la! oxidación! del! sustrato.!!

XENOBIOTICOS Los!xenobióticos! son!sustancias!extraños!para!el!organismo!que!están!compuestos!por!cadenas!alquílicas! tanto! saturadas! como! insaturadas,! anillos! aromáticos! y! halógenos.! Son! lipofílicos! por! lo! que! atraviesan!

con! facilidad! las! membranas! biológicas.! Son! excretados! a! baja! velocidad! y! se! acumulan! en! compartimentos!hidrofóbicos!aumentando!la!toxicidad.! Hay!diferentes!tipos!de!xenobióticos,!los!más!destacados!son!los!fármacos,!colorantes!(alimenticios!o!de! la! piel),! aditivos,! pesticidas,! insecticidas,! contaminantes! ambientales! y! en! general! cualquier! sustancia! química!derivada!de!la!industria!química.!! Pueden! producir! una! gran! variedad! de! efectos! biológicos! incluyendo! respuestas! farmacológicas,! toxicidad,!reacciones!inmunológicas!y!cáncer.!Se!metabolizan!para!conseguir:! J!!Hacerlos!más!solubles!para!excretarlos!mejor.& J!!Inactivarlos!en!la!mayoría!de!los!casos.!Pero!también!los!podemos!activar.& J!!Disminuir!su!toxicidad.!Aunque!en!algunos!casos!puede!aumentar.& !

Metabolismo(de(fármacos( La!mayoría!de!los!fármacos!se!metabolizan!en!el!hígado.!!Entre!otros!efectos,!este!metabolismo!hepático! suele!tener!como!objetivo!el!incremento!de!la!solubilidad!en!agua!(polaridad)!de!los!diversos!xenobióticos! para!así!facilitar!su!excreción!del!organismo!mediante!la!orina!o!bilis.!Generalmente,!los!metabolitos!que! se! producen!son! menos! activos! farmacológicamente!que! el! fármaco! sustrato,!aunque! en! algunos! casos! las! reacciones! de! la! fase! I! o! las! de! conjugación! convierten! los! xenobióticos! inactivos! conocidos! como! "profármacos"!o!"procarcinógenos"!en!compuestos!biológicamente!activos.!! Es!necesario!que!los!sistemas!hepáticos!metabolizadores!de!fármacos!actúen!sobre!una!gama!infinita!de! moléculas;!esto! se!consigue!porque! las!enzimas! implicadas!tienen!una! baja!especificidad! de!sustrato.! El! metabolismo!de!los!xenobióticos!tiene!lugar!en!dos!fases:! >Fase& I:! la! polaridad! del! fármaco! aumenta! por! oxidación! o! hidroxilación! catalizada! por! una! familia! de! citocromo!oxidasas!P450!microsomales.! >Fase&II:&las!enzimas!citoplasmáticas!conjugan!los!grupos!funcionales!introducidos!en!las!reacciones!de!la! primera! fase! volviéndolos! aún! más! solubles! para! que!posteriormente! sean! excretados! por! la! orina! o! la! bilis.! Algunos!Tipos!de!Reacciones!de!la!Fase!II:! A)&Glucuronidación:& El! UDPJácido! glucurónico! es! el! donador! de! flucuronilo,! en! tanto! que! una! gran! variedad! de! glucuronil! transferasas! presentes!en! el! retículo!endoplasmático! y! citosol,!constituyen! las! enzimas!catalizadoras! de! esta! reacción.! Las! moléculas! como! 2Jacetilaminofluoreno! (un! carcinógeno),! anilina,! ácido! benzoico,! meprobamato! (un! tranquilizante),! fenol! y! muchos! esteroides! se! excretan! como! glucurónidos.! La! glucuronidación!constituye!probablemente!la!reacción!de!conjugación!más!frecuente.!! B)&Sulfatación:! El! donador! de! sulfato! es! el! compuesto! adenosinaJ3'JfosfatoJ5'Jfosfosulfato! (PAPS),! este! compuesto! se! conoce! como! "sulfato! activo",! cuya! enzima! catalizadora! es! la! sulfotransferasa.! Algunos! alcoholes,! arilaminas!y!fenoles!son!sulfatados.!! C)&Conjugación&con&glutatión:! Un! gran! número! de! xenobióticos! electrofílicos! potencialmente! tóxicos! (como! algunos! carcinógenos)! se!

conjugan!con!el!GSH!nucleófilo!en!las!reacciones!que!pueden!representarse!de!la!siguiente!manera:! !

R'+'GSH'777>'R7S7G'

*R='un'xenobiótico'electrófilo.' ' Las!enzimas!que!catalizan!estas!reacciones!se!llaman!glutatión!SJtransferasas!y!se!encuentran!en!grandes! cantidades!en!el!citosol!hepático!y!en!menor!cantidad!en!otros!tejidos.!Si!los!xenobióticos!potencialmente! tóxicos!no!se!conjugaran!con!el!GSH,!estarían!libres!para!combinarse!de!forma!covalente!con!DNA,!RNA!o! proteínas!celulares,!lo!que!causaría!un!daño!celular!grave.!Los!conjugados!de!glutatión!son!metabolizados! antes!de!ser!excretados.!Los!grupos!glutamilo!y!glicinilo!que!pertenecen!al!glutatión!son!movilizados!por! enzimas! específicas,! y! un! grupo! de! acetilo! (donado! por! acetilJCoA)! es! adicionado! al! grupo! amino! de! la! porción! cisteinilo! restante.! El! compuesto! resultante! es! un! ácido! mercaptúrico,! un! conjugado! de! la! lJ acetilcisteína,!que!se!excreta!con!la!orina.!! D)&Otras&reacciones:! 1.>&&Acetilación:&que!se!representa!de!la!siguiente!forma:! !

!

X'+'Acetil7CoA'77>'Acetil7X'+'CoA'

'

'

*X='un'xenobiótico.'

La! AcetilJCoA! es! el! donador! del! acetilo.! Estas! reacciones! son! catalizadas! por! las! acetiltransferasas! presentes! en! el! citosol! de! muchos! tejidos,! particularmente! en! el! hígado.! El! medicamento! isoniacida,! utilizado!en!el!tratamiento!de!la!tuberculosis,!debe!someterse!a!acetilación.! 2.>& Metilación:& Unos! cuantos! xenobióticos! sufren! metilación! por! la! acción! de! las! metiltransferasas,! las! cuales!emplean!SJadenosilmetionina!como!el!donador!de!grupos!metilo.! Algunos! ejemplos! de! xenobióticos! son! los! fármacos;! sustancias! que! suelen! ser! inocuas! es! las! dosis! indicadas!pero!que!se!vuelven!tóxicas!cuando!se!toman!en!cantidades!excesivas.! ! Entre!estos!fármacos!podemos!destacar!el!paracetamol,!el!diazepam!y!las!morfinas.! ! EL#PARACETAMOL# El! paracetamol,! o! (paraJacetilJaminofenol& o& NJacetilJparaJaminofenol),! es! un! analgésico! y! antipirético! ampliamente!utilizado!debido!a!su!baja!toxicidad!en!dosis!terapéuticas,!pero!que!puede!ser!fatal!tras!una! sobredosis.! ! El! metabolismo! de! este! fármaco! se! da! en! el! hígado! basa! fundamentalmente! en! su! conjugación! con! sulfato.! Cuando! la! dosis! aumenta! (más! de! 1! ó! 2! gramos),! debido! a! que! la! capacidad! del! organismo! de! conjugarlo! con! grupos! sulfato! es! limitada,! se! formarán! también! compuestos! glucurónicos.! En! cualquier! caso,! estas! reacciones,! mediadas! por! enzimas,! conducirán! a! la! formación! de! compuestos! (combinados)! que!se!excretarán!con!facilidad.! !Si!se!da!una!sobredosis!(más!de!6!gramos),!aproximadamente!el!5%!del!fármaco!se!oxida!por!la!acción! de! CYP2E1;! formándose! un! intermediario! reactivo,! el! NJacetilJpJbenzoquinonaimina! (NAPQI! o! acetaimidoquinona).!Si!la!dosis!no!sobrepasa!los!10!gramos,!este!compuesto!intermediario!se!conjugará! con! GSH! (glutatión! reducido)! para! ser! eliminado! del! organismo! en! forma! de! ácido! mercaptúrico.! Sin! embargo,!cuando!la!sobredosis!es!mayor,!y!la!ingesta!de!paracetamol!sobrepasa!los!10!gramos,!la!vía!de!

glucuronización!se!satura!(debido!a!que!la!capacidad!de!producción!y!conjugación!con!GSH!es!limitada);! de! esta! manera,! como! el! NJacetilJpJbenzoquinonaimina! no! se! transforma! en! ácido! mercaptúrico,! este! compuesto! intermediario! puede! reaccionar! con! los! grupos! sulfhidrilo! de! las! proteínas! del! hepatocito,! inactivándolas.! Este!proceso! conduce!necrosis! de!las! células!del! hígado,!lo! cual!se! manifiesta!como! una! insuficiencia!hepática!que!produce!la!muerte!del!organismo.! ! Individuos'con'altos'consumos'de'alcohol.! El!isoenzima!que!produce!el!NAPQI,!CYP2E1,!es!inducido!por!alcohol.!De!esta!manera,!los!individuos!con! un! abuso! crónico!de! alcohol! tienen! incrementada!la! sensibilidad! para! la!toxicidad! del! acetaminofén,! ya! que! un! alto! porcentaje! del! metabolismo! del! acetaminofén! se! destina! hacia! el! NAPQI! (comparado! con! individuos!con!bajos!niveles!de!CYP2E1).!En!estos!individuos,!incluso!las!dosis!terapéuticas!recomendadas! de!paracetamol!pueden!ser!toxicas.!! ! DIAZEPAM( El! diazepam! es! un! miembro! del! grupo! de! los! tranquilizantes! benzodiazepínicos! que! ejercen! efectos! ansiolíticos,!sedantes,!relajantes!musculares,!amnésicos!y!anticonvulsivos.!Se!sabe!que!esto!es!resultado! de!facilitar!la!acción!del!ácido!gJaminobutírico!(GABA),!el!neurotransmisor!de!inhibición!más!importante! del!cerebro.! El! diazepam! administrado! por! vía! oral! se! absorbe! completamente! y! de! manera! rápida! ! en! el! tracto! gastrointestinal,! alcanzando! concentraciones! plasmáticas! máximas! a! los! 30J90! minutos! después! de! su! ingestión.!! El!diazepam!y!sus!metabolitos!se!unen!en!gran!medida!a!las!proteínas!plasmáticas!y!pueden!atravesar!las! barreras! hematoencefálica! y! placentaria.! Además,! son! metabolitos!! farmacológicamente! activos,! como:! NJdesmetilJdiazepam!(nordiazepam),!temazepam!y!oxazepam.! El!metabolismo!oxidativo!del!diazepam!está!mediado!por!las!isoenzimas!CYP3A!y!CYP2C19!del!citocromo! P450.!Es!así!como,!directamente!del!diazepam!!se!obtienen!!nordiazepam!y!temazepam.!Y,!a!su!vez,!estos! últimos!pueden!dar!lugar!al!oxazepam.! La!disminución!en!el!perfil!concentraciónJtiempo!en!el!plasma!tras!la!administración!oral!es!bifásico,!con! una!fase!de!distribución!inicial!rápida!y!extensa!seguida!de!una!fase!de!eliminación!terminal!prolongada! (tiempo! de! vida! media! de! hasta! 48! horas).! Por! ejemplo,! la! vida! media! de! eliminación! terminal! del! metabolito!activo!NJdesmetilJdiazepam!es!hasta!100!horas.!El!proceso!de!excreción!se!da!principalmente! mediante!la!orina,!predominantemente!en!sus!formas!conjugadas.!(La!depuración!de!diazepam!es!de!20J 30!ml/min).! La! vida! media! de! eliminación! podría! prolongarse! en! recién! nacidos,! anciano...