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UNIVERSIDAD NORBERT WIENER FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

Biología Celular y Molecular

Práctica N°5 Extracción de ADN del plátano

ALUMNA: Pacheco Silupú Ana Fiorella

CICLO: I

SECCIÓN: MD1T4

DOCENTE: Robles Román Margarita

FECHA DE REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA: 27 de Junio de 2020

FECHA DE ENTREGA DE INFORME: 29 de Junio de 2020

I.

INTRODUCCIÓN:

El ácido desoxirribonucleico o ADN es el material genético de los seres vivos. La extracción de ADN se realiza con la finalidad de hacer estudios genéticos, de forense y biología molecular. Para los estudios genéticos más profesionales, se requieren protocolos especiales con diversos pasos y materiales que pueden ser contaminantes. Sabemos que los organismos vivos provienen de una única célula ancestral llamada LUCA. Este hecho nos indica que entre organismos vivos compartimos mucho más de lo que a veces nos podríamos llegar a imaginar. Por ejemplo, los humanos compartimos el 50% del DNA con el plátano. Para poder estudiar esta molécula con detalle se precisa generalmente su aislamiento de la célula, y para ello es necesario un conjunto de material e instrumentos de laboratorio complejos. Lo que este experimento pretende es un acercamiento simple y sencillo a la técnica de extracción de DNA que se puede realizar en cualquier hogar con materiales de la vida cotidiana.

II.

OBJETIVOS:

 Aislar y observar el DNA de un plátano con reactivos caseros. III. MATERIAL Y MÉTODOS: MATERIALES: • Plátano y piña • Termómetro • Lavavajillas líquido • Colador • Agua hervida o mineral • Embudo • Sal • Tubos de ensayo o vaso muy delgado • Etanol 95º (2 horas en el congelador)

METODOLOGÍA

• Gotero • Mortero • Licuadora • Gasa • Un recipiente con cubos de hielo • Tijeras • Un recipiente con agua caliente • 3 vasos • 1 cuchara, 1 tenedor, y 1 cucharita

1. Para iniciar se cortó el plátano en trozos muy pequeños y luego se trituraron con un mortero formando una pasta más o menos homogénea. Seguidamente se depositó esta pasta en un vaso de vidrio pírex. (Esto representa el rompimiento de la materia vegetal y para ello se incrementó el área superficial del plátano, para de esta manera la superficie de la membrana sea más fácil de disolver, además para que permita una absorción más efectiva del calor y de las soluciones que se le añadirán)

2. Se continuó con la preparación de la solución de extracción, con un recipiente se midió 100 ml de agua hervida y 10 ml de detergente líquido, seguidamente mezclamos procurando no formar burbujas y se agregó una pisca de sal. (Esto ayudó en el rompimiento de la membrana celular de las células vegetales del plátano, ya que, la membrana celular está formada por una bicapa lipídica, es decir grasas. Lo que realiza el detergente líquido disuelve estas grasas, además los iones de sodio positivos de la sal van a neutralizar la carga negativa del ADN y a ayudar a que el ADN se agrupe).

3. Luego de ello se vertió el detergente líquido en el recipiente que contenía el plátano y se mezcló tratando de no hacer burbujas.

4. Se procedió a la incubación en baño caliente de la mezcla, para ello se calentó a gua a 60° y se introdujo la mezcla en baño maría y se removió durante 15 minutos, sin hacer muchas burbujas. (Este proceso se hizo para liberar el ADN de sus barreras protectoras. El calor favorece el rompimiento de las membranas y además para el rompimiento de la bicapa lipídica mediante la desnaturalización de las proteínas)

5. Se preparó un recipiente con cubos de hielo y agua, seguidamente se introdujo el recipiente caliente y se dejó enfriar por cinco minutos. (Lo que sucedió, fue que el agua fría previno la desnaturalización del ADN, porque si este está mucho tiempo en calor la desnaturalización podría dañarlo. El enfriamiento de la solución vuelve más lentas las reacciones enzimáticas)

6. Mientras enfriaba el recipiente con la mezcla, se trituró y licuó el zumo de corazón de piña, paso seguido, se filtró con un colador y se realizó un segundo filtrado con una gasa y un embudo.

7. Se filtró con un colador en un vaso la mezcla de plátano, luego se volvió a hacer una filtración con una gasa sobre el embudo. Todo se realizó pacientemente. (El líquido filtrado que se consiguió fue el que contenía el ADN libre de la membrana nuclear)

8. Se mezcló 20 gotitas de zumo de piña en la mezcla de plátano en un tubo de ensayo y se dejó reposar por 2 minutos. (Las moléculas de ADN están rodeadas de proteínas del tipo histonas, y para obtener un extracto más puro de este era necesario eliminarlas. Para ello se utilizó enzimas. El zumo de piña contiene bromelaína, una enzima capaz de hidrolizar las proteínas y por tanto capaz de separar el ADN de las histonas. Este proceso ayudó a que el ADN se desempaquete y es fuera fácil su extracción.)

9. Para poder apreciar el ADN, se le echó a la solución una cantidad de alcohol del mismo volumen de la mezcla. (El ADN es una molécula polar, pero la reacción con el etanol a muy baja temperatura hace que se vuelva apolar e insoluble en el etanol formándose un precipitado justo entre la capa con etanol líquido y la capa con el extracto. El ADN es el único componente de la solución que no es soluble en el etanol, y se hace visible porque las diferentes cadenas se van aglutinando entre sí al precipitar debido a la acción de fuerzas físicas. El alcohol es menos denso que el agua del extracto y por eso flota sobre la capa del extracto).

IV.

RESULTADOS:

Se observó tres fases bien diferenciadas. En la fase superior se ve el alcohol; en la fase inferior se encontrará los restos celulares (membranas, orgánulos, etc.) del plátano y los otros componentes de la solución; y, en la interfase se pudo observar los hilos rodeados de burbujas (ADN).

V.

CONCLUSIONES:

Se realizó exitosamente la extracción de ADN del plátano con sustancias que se pueden encontrar en casa, siguiendo cuidadosamente los pasos del experimento.

VI. CUESTIONARIO: 1. ¿Qué función cumple el lavavajillas en el proceso de extracción de ADN? El detergente líquido cumple la función de rompimiento de la bicapa lipídica de las células vegetales del plátano y de las membranas endoplásmicas; ya que estas están compuestas por lípidos. El lavavajillas rompe estos fosfolípidos de las membranas permitiendo llegar hasta el ADN.

2. ¿Para qué utilizamos el zumo de piña en la extracción de ADN? Las moléculas de ADN están rodeadas de proteínas del tipo histonas, y para obtener un extracto más puro de este era necesario eliminarlas. Para ello se utilizó enzimas. El zumo de piña contiene bromelaína, una enzima capaz de hidrolizar las proteínas y por tanto capaz de separar el ADN de las histonas. Este proceso ayudó a que el ADN se desempaquete y es fuera fácil su extracción.

3. ¿Qué función cumple el etanol en el proceso de extracción de ADN? El ADN es una molécula polar, pero la reacción con el etanol a muy baja temperatura hace que se vuelva apolar e insoluble en el etanol formándose un precipitado justo entre la capa con etanol líquido y la capa con el extracto. El ADN es el único componente de la solución que no es soluble en el etanol, y se hace visible porque las diferentes cadenas se van aglutinando entre sí al precipitar debido a la acción de fuerzas físicas. El alcohol es menos denso que el agua del extracto y por eso flota sobre la capa del extracto

4. ¿Para qué utilizamos sal en el proceso de extracción de ADN? El cloruro de sodio ayudar a separar algunas de las proteínas que están unidas al ADN. También mantiene las proteínas disueltas en la capa acuosa de forma a impedir que estas precipiten también con el alcohol, junto con el ADN. Los iones sodio y cloruro neutralizan las cargas negativas del ADN. Adicionalmente, los cationes sodio (Na+) contrarrestan las cargas negativas de los fosfatos del ADN.

5. ¿El ADN es más a fin al agua o alcohol? ¿Por qué? El ADN es más a fin al alcohol ya que son sustancias no polares, pero también es soluble en agua

VII. REFERENCIAS: 

Diana G. Extracción del ADN a un plátano [video]. México: Universidad de Durango; 2017. Disponible en: https://www.youtube.com/watch?v=JX4EfDMTfEI...