Flawonoidek PDF

Preview

Summary

Download Flawonoidek PDF

Description

09.05.2018r.

Ćwiczenie 3: Oznaczanie aktywności antyutleniających flawonoidów metodą CUPRAC. Flawonoidy stanowią liczną grupę metabolitów wtórnych powszechnie występujących u roślin zarodnikowych, naczyniowych jaki i glonów i mszaków. Pod względem chemicznym flawonoidy stanowią grupę związków o znacznie zróżnicowanych właściwościach biochemicznych oraz pod względem budowy. Zaliczane są one do polifenoli. Wspólną cechą flawonoidów jest ich charakterystyczny szkielet węglowy C6-C3-C6. Ze względu na ich budowę chemiczną wyróżnia się następujące grupy flawonoidów: 

flawonole



flawony



flawanony



flawanonole



izoflawony



katechiny



antocyjanidy

Metoda CUPRAC stanowi wariant metody FRAP, w której wykorszystuje się redukcję jonów Cu(II) do Cu(I) związanych w kompleks z batokuproiną lub neokuproiną do pomiaru zdolności antyutleniających próbki. Maksimum absorpcji dla pomarańczowo-żółtego kompleksu Cu(I)neokuproina przy 450 nm. Natomiast w przypadku pomarańczowego kompleksu Cu(I)-batokuproina maksimum to występuje przy długości fali 490 nm. Na poniższym rysunku przedstawiono schemat reakcji zachodzącej w metodzie CUPRAC. Rys. Schemat reakcji zachodzącej w metodzie CUPRAC

Wykonanie ćwiczenia Do 10 kolb miarowych o pojemności 10 cm 3 dodano po 2 cm3 roztworu CuCl2 o stężeniu 0,01 M, roztworu octanu amonu o stężeniu 1 M oraz roztworu neokuproiny o stężeniu 0,0075 M. Następnie pierwszą kolbę dopełniono wodą destylowaną do kreski i dokładnie wymieszano. Przygotowany roztwór został wykorzystany do ślepej próby. Do kolejnych sześciu kolb dodano kolejno 100, 200, 400, 500, 600 i 800 μl roztworu kwasu kawowego o stężeniu 50 μg/cm3. Do pozostałych trzech kolb dodano 400 μl roztworu flawonoidu o stężeniu 400 μg/cm3. Wszystkie kolby dopełniono wodą destylowaną do kreski, dokładnie wymieszano i umieszczono w ciemnym miejscu na 40 minut. Po upływie wyznaczonego czasu dokonano pomiaru absorbancji przygotowanych roztworów. Długość fali λ = 450 nm Lp. 1 2 3 4 5 6 7

Objętość [μl] kwasu kawowego o stężeniu 50 μg/cm3 0 100 200 400 500 600 800

Stężenie kwasu kawowego [μg/cm3] 0 5 10 20 25 30 40

Abosrbancja 0 0,068 0,115 0,234 0,310 0,379 0,484

Krzywa wzorcowa 0.6 0.5 f(x) = 0.01 x − 0 R² = 1

Absorbancja

0.4 0.3 0.2 0.1 0 0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

Stężenie kwasu kawowego [μg/cm3]

Lp.

Objętość [μl] flawonoidu o stężeniu 400 μg/cm3

Stężenie flawonoidu [μg/cm3]

Abosrbancja

1 2 3

400 400 400

160 160 160

0,058 0,053 0,050

Średnia

Stężenie wyliczone z krzywej wzorcowej [μg/cm3] 4,76 4,35 4,10 4,40

Stężenie przeliczone na 1g flawonoidu

2,975*10-6 2,719*10-6 2,562*10-6 2,752*10-6...