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Universidad Autónoma de Baja California Facultad de Medicina y Psicología

Código L1-ML-002 Revisión 7

ML – Manual de Laboratorio de Bioquímica básica

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Manual de Laboratorio de Bioquímica Básica Clave de la materia: 11274 Plan de estudios 2010-1 Laboratorio 1 Autor o autores: M.C. Raquel Cortés Talabera. M.C. María Ruth Vásquez Herrera M.C. Mayra Lilly Martínez Cruz Q.F.B. Claudia Cota Duarte Dra. Martha Rosales Aguilar

Actualizó M.C. Mayra Lilly Martínez Cruz Dra. Martha Rosales Aguilar Dra. Aracely Serrano Medina

Revisó

Autorizó

Cuerpo Colegiado de Bioquímica FMyP

Academia de Ciencias Moleculares FMyP

GC-FR-012

Rev. 4

Universidad Autónoma de Baja California

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ÍNDICE

Sesión No. 1: Encuadre, clasificación y Separación de Residuos Peligrosos Biológico-Infecciosos (RPBI) generados en el Laboratorio y bioseguridad en la práctica médica. 7 Sesión No. 2: Introducción al laboratorio de bioquímica

16

Sesión No.3: Toma y manejo de muestras por el laboratorio I 23 Sesión No.4: Toma y manejo de muestra por el laboratorio II 27

Sesión No.5: Determinación de proteínas

30

Sesión No.6: Determinación de albúmina

33

Sesión No.7: Cinética enzimática

36

Sesión No. 8: Determinación de creatinina sérica

40

Sesión No. 9: Determinación de nitrógeno ureico

42

Sesión No.10: Determinación de glucosa

44

Sesión No.11: Glucosa postprandial e índice glucémico

47

Sesión No. 12: Determinación de Colesterol total

51

Sesión No. 13: Determinación de Triacilglicéridos

53

Sesión No. 14: Determinación de cuerpos cetónicos en orina

55

Sesión No. 15: Determinación de ácido úrico

59

Sesión No. 16: Diagnóstico clínico de laboratorio

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V. Anexos

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PRÒLOGO Los autores de este manual de bioquímica muestran una serie de procedimientos sobre actividades que se realizarán durante el transcurso del semestre, contiene una series de prácticas que se evalúan a través de normas y procedimientos de cada una relacionadas con la materia. El manual sigue el nuevo método de enseñanza basado en competencias, con el fin de orientar a los alumnos sobre las actividades programadas. Es importante tener un manual impreso a fin que el estudiante tenga una orientación sobre las tareas a realizar en el laboratorio de bioquímica. El contenido de este manual muestra las actividades del laboratorio y se evalúan a través de normas de bioseguridad y los procedimientos con base a los Reglamentos Generales de la UABC.

I. Introducción La Bioquímica es la ciencia que estudia los procesos químicos de los seres vivos desde dos puntos de vista: estructural y funcional. Mediante el primero conocemos la distribución espacial de la materia viva; con el segundo, su devenir en el tiempo. La aproximación morfológica conduce al estudio de las formas propias del ser vivo; la aproximación funcional estudia funciones, es decir, variaciones temporales que se dan en el mismo con el fin de mantener su organismo en un estado estacionario y de reproducir en otro ser vivo su material genético. De todas las funciones, ninguna hay más generalizada que la que llamamos “Metabolismo”, es decir, el conjunto de reacciones químicas que un organismo es capaz de llevar a cabo. Para comprender la influencia de la Bioquímica sobre la Biología, es preciso conocer los elementos químicos de la materia viva y las estructuras completas de muchos compuestos biológicos (proteínas, azúcares, lípidos, nucleótidos, vitaminas y hormonas) y su comportamiento durante las reacciones metabólicas. Será preciso conocer la estequiometría y los mecanismos de un gran número de reacciones. Además el conocimiento de los principios básicos de la termodinámica es esencial para entender de qué manera obtienen los seres vivos la energía de los alimentos. El propósito de este manual es proporcionar al alumno los recursos necesarios para un buen desarrollo de las prácticas, así como brindarle información básica que utilizará durante el proceso de las mismas. Este manual consta, de dieciséis prácticas de laboratorio, se enfocan a temas que están íntimamente relacionados con procesos metabólicos que realiza la célula dentro del organismo, lo cual le permite al alumno conocer y comprender de una mejor manera el funcionamiento del cuerpo humano.

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II. COMPETENCIA GENERAL DE LA ASIGNATURA. Adquirir la habilidad para la obtención de especímenes de calidad, con calidez y ética profesional. Aplicar las técnicas del laboratorio para la interpretación clínica de trastorno de la salud y relacionar los resultados de los distintos exámenes con posibles patologías, utilizando los avances tecnológicos y la bibliografía científica, con confidencialidad y actitud de servicio.

III. REGLAMENTO DE LABORATORIO. Para lograr las competencias de las prácticas de laboratorio es necesario que el usuario respete el reglamento general de los laboratorios, mismo que puede consultar en la página electrónica de la facultad. IV. PROGRAMACIÓN DE PRÁCTICAS

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Sesión No. 1: Encuadre, clasificación y Separación de Residuos Peligrosos BiológicoInfecciosos (RPBI) generados en el Laboratorio y bioseguridad en la práctica médica. 1. Competencia a desarrollar en la sesión. Manejar los RPBI, identificarlos, separarlos, disponerlos en los recipientes adecuados y anotar en la bitácora correspondiente, para mantener el sitio de trabajo lo más parecido a NOM-087-SEMARNATSSA1-2002 y la guía de cumplimiento de la Norma Oficial Mexicana para evitar la contaminación y accidentes, el estudiante debe de trabajar con responsabilidad, disciplina y honradez. 2. Mecanismos de evaluación y Evidencia de desempeño. a) Que el alumno identifique y disponga los residuos peligrosos biológico-infecciosos (RPBI) de acuerdo a la Norma de RPBI y siguiendo las instrucciones de sus profesor Instrumento de evaluación general: Reporte de prácticas de laboratorio.

Desarrollo en sesiones del laboratorio Reporte de prácticas Exposición de tema PPT Examen de toma de muestra sanguínea 30% Departamental

20 % 30 % 20 %

70 %

30%

Requiere 80% mínimo de asistencias para tener derecho a calificación de laboratorio. No existen prácticas de reposición ฀ Desarrollo en sesiones del laboratorio implica: (lista de cotejo) • Cumplir las normas establecidas para el buen funcionamiento del laboratorio. • Conducta, actitud y destreza en las prácticas. • Conocimiento y manejo del material y equipo del laboratorio. • Asistencia participativa en las sesiones de laboratorio. • Obtención y conservación de muestras. • Interpretación de los resultados de la(s) prueba(s) realizada(s). • Elaboración de un argumento que justifique los resultados obtenidos • Aplicación de los conocimientos adquiridos durante todas las prácticas del semestre. • Discusión de las sesiones de laboratorio, en un ambiente de cordialidad, respeto y compañerismo. ฀

Reporte de prácticas y exposición de tema.

Reporte

● ● ●

Portada ( Incluye integrantes del equipo y datos de cada alumno) Resultados de las pruebas (Datos del paciente) Observaciones GC-FR-012

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Exposición

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● ●

Conclusiones Tareas extras que les deje su facilitador

● ● ●

Calidad, contenido y conocimiento de la presentación. Inclusión de caso clínico Análisis, discusión y conclusiones

Examen de toma de muestra: • Presentación con el paciente 10% • Limpieza de la zona 10% • Colocación del torniquete 10% • Número de punciones 20% • Elección del tubo 10% • Rotulación del tubo 20% • Desecho de RPBI 20%

Nota: este examen se realizará en la sesión 16. 3. Fundamento teórico e información de apoyo. En la realización de las prácticas del Laboratorio de Biología Celular, se generan RPBI por lo que es importante conocer y aplicar las Normas Oficiales Mexicanas en especial la NOM-087-SEMARNAT-SSA12002 y la guía de cumplimiento de la Norma Oficial Mexicana. Los generadores de RPBI son los lugares públicos, sociales o privados, fijos o móviles cualquiera que sea su denominación, que estén relacionados con servicios de salud y que presten servicios de atención médica ya sea ambulatoria o para internamiento de seres humanos y utilización de animales de bioterio o zooterio. En las áreas de generación de los establecimientos generadores, se deberán separar y envasar todos los residuos peligrosos biológicoinfecciosos, de acuerdo con sus características físicas y biológicas infecciosas, conforme a la Norma Oficial Mexicana. Durante el envasado, los residuos peligrosos biológico-infecciosos no deberán mezclarse con ningún otro tipo de residuos municipales o peligrosos. Los generadores y prestadores de servicios, además de cumplir con las disposiciones legales aplicables deben: cumplir las siguientes fases de manejo, según caso: a) Identificación de los residuos. b) Envasado de los residuos generados. c) Almacenamiento temporal. d) Recolección y transporte externo. e) Tratamiento. f) Disposición final. El laboratorio debe contar con señalamientos y letreros alusivos a la peligrosidad de los mismos, en lugares y formas visibles, el acceso a esta área sólo se permitirá al personal responsable de estas actividades. Algo importante a considerar es minimizar la generación de RPBI, identificando y segregando los GC-FR-012

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materiales que NO se consideran RPBI, por ejemplo: papel de envoltura de gasa estéril, envoltura de la jeringa, protector de las agujas, etc. En el desarrollo de las actividades se deberá separar adecuadamente los materiales que son reciclables, depositándolos en los recipientes destinados para su posterior tratamiento y recuperación (Ejemplo: tubos de ensayo, matraces, etc.). En el manejo de RPBI se deberán utilizar los implementos de protección personal para su manejo e identificar los sitios designados en el laboratorio para depositarlos. En esta práctica se envasan los residuos biológicos peligrosos usando la clasificación de estos, por sus características de acuerdo NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002 según corresponda al tipo de contenedor y color. Los RPBI que se generan en el desarrollo de una práctica en el laboratorio de Análisis Clínicos (Microbiología, Parasitología, Biología Celular, Patología, Histología) pueden ser los siguientes: generan tubos con sangre, jeringas, algodones, agujas. Los tubos con las muestras de sangre en recipientes herméticos Rojo, si los tubos son de plástico se pueden envasar en una bolsa Roja. Cultivos y cepas en sus respectivas cajas; que se generan en las prácticas se envasan en bolsa de plástico roja, cumpliendo las especificaciones que marca la NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002. Patológicos en este laboratorio se pueden generar líquidos patológicos, se envasan en recipientes rígidos amarillos y cuando fuesen sólidos patológicos se envasan en bolsa amarilla, para depositarlo en el almacén temporal del laboratorio. Los punzocortantes van directamente en contenedor rígido rojo: como los portaobjetos, cubreobjetos, agujas, lancetas. En caso de tener algún incidente respecto a los RPBI se debe de seguir el manual de contingencia donde se cuenta con las instrucciones dependiendo del incidente que se trate y se soluciona con el material para esta contingencia que se encuentra en el laboratorio. Residuos no anatómicos se generan guantes gasas, abate lenguas, cubre bocas, etc., los cuales se envasan en bolsa roja solamente si usted los considera RPBI. TABLA No. 1: ENVASADO DE RPBI Denominación Estado físico

Sangre

Envasado

Descripción

Envase Rojo Hermético

La sangre y sus componentes, sólo en su forma líquida, así como sus derivados no comerciales, incluyendo las células progenitoras, hematopoyéticas y las fracciones celulares o acelulares de la sangre resultante (hemoderivados), Suero y plasma tubo de vidrio.

Líquido

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Sólido y líquidos en recipientes con tapa

Bols a roja

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Coágulo, suero y plasma en tubo de plástico con tapadera.

Cultivos en caja y placas de Microscan

Sólido Bolsa roja

Cultivos en Tubos de vidrio

Sólido Cultivos y cepas de agentes infecciosos

Recipiente hermético

Guantes contaminados, medios de transporte, asas de plástico.

Sólido Bolsa roja

Colorantes y líquido de enjuague de tinciones. Líquido Recipiente hermético

Patológicos

Sólido/líquido

Biopsias, órganos, animales, tejidos. Bolsa Amarilla / Envase amarillo Bolsa Roja

Residuos no anatómicos

Sólido

Gasas, hisopos, papel, guantes, algodón que esté empapado de sangre u otro contaminante, Tiras reactivas, asas de plástico, placas de reacción, cubetas de plástico para el espectro, jeringas, pipetas transfer de plástico, abatelenguas GC-FR-012

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Residuos punzocortantes

Sólido Envase rojo hermético para punzocortantes

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Lancetas, agujas, agujas de bolsa de sangría, capilares de hematocrito, aplicadores, tubos rotos, portaobjetos y cubreobjetos, puntillas, jeringas de insulina.

El área de residuos peligrosos en tránsito se encuentra previamente señalada en el Laboratorio con el símbolo universal que lo identifica, todos los recipientes que contienen RPBI deben ser colocados en estos sitios. Ejemplos de áreas temporales (RPBI) previamente señaladas en el laboratorio como se muestra en las siguientes imágenes:

De acuerdo con la NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002 el personal responsable del manejo de los RPBI(sangre, cultivos y cepas de agentes infecciosos, patológicos, residuos no anatómicos y objetos punzocortantes ), realiza otras actividades como es: recolección y transporte al almacén general (por el personal de mantenimiento), almacenamiento y entrega a la empresa tratadora (Técnicas medioambientales WINCO), elaboración de registros, bitácoras, reportes, capacitación, monitoreo, disposición y tratamiento interno y externo. ¿Cuáles son las recomendaciones para llevar a cabo la recolección y el transporte interno de los RPBI? 1.- Recolección y Transporte Interno: Consiste en la recolección y el traslado de los desechos desde los sitios de generación hasta el almacenamiento temporal y final.

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2. ¿Cuáles son los requisitos para el almacenamiento temporal? Una vez realizada la recolección interna por el personal encargado, se deberán transportar los residuos al área específica denominada almacén temporal, (menos los generadores de RPBI clasificados en el nivel I de acuerdo con la NOM-087-SEMARNATSSA1-2002). Esta área sirve para el acopio y almacenamiento de los residuos, mismos que serán almacenados dentro de los carros de recolección y deberán estar rotulados con el símbolo universal de riesgo biológico, con la leyenda “RESIDUOS PELIGROSOS BIOLÓGICOINFECCIOSOS”. 3. ¿Cuál es el periodo de almacenamiento temporal máximo de acuerdo al nivel del establecimiento generador? Existen tres niveles de generación de residuos según la Norma Oficial Mexicana NOM-087-SEMARNATSSA1-2002 y los periodos de almacenamiento temporal están sujetos al nivel de generación de los R.P.B.I. como se muestra a continuación. TABLA No. 2: NIVELES DE GENERACIÓN DE RESIDUOS

NIVEL I Unidades hospitalarias de 1 a 5 camas e instituciones de investigación con excepción de los señalados en el Nivel III.

NIVEL II Unidades hospitalarias de 6 hasta 60 camas;

Laboratorios clínicos y bancos Laboratorios clínicos y bancos de sangre que realicen análisis de sangre que realicen análisis de 51 a 200 muestras al día; de 1 a 50 muestras al día.

NIVEL III Unidades hospitalarias de más de 60 camas;

Centros de producción e investigación experimental en enfermedades infecciosas;

Unidades hospitalarias psiquiátricas.

Bioterios que se dediquen a la Laboratorios clínicos y investigación con agentes bancos de sangre que biológico-infecciosos, o realicen análisis a más de 200 muestras al día, o

Centros de toma de muestras para análisis clínicos.

Establecimientos que generen Establecimientos que de 25 a 100 kilogramos al mes generen más de 100 de RPBI. kilogramos al mes de RPBI.

4. ¿Qué se debe hacer para realizar la recolección y transporte externo de los RPBI? GC-FR-012

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La recolección y el transporte externo de los RPBI, deberá realizarse conforme a lo dispuesto en los ordenamientos jurídicos aplicables y además cumplir con lo siguiente: 1. Sólo podrán recolectarse los residuos que cumplan con el envasado, embalado y etiquetado o rotulado como se establece en la Norma. 2. Los residuos peligrosos biológico-infecciosos no deberán ser compactados durante su recolección y transporte. 3. Los contenedores deben ser desinfectados y lavados después de cada ciclo de recolección. 4. Los vehículos recolectores deben ser de caja cerrada y hermética, contar con sistemas de captación de escurrimientos, y deberán contar con sistemas de refrigeración para mantener los residuos a una temperatura máxima de 4° C. 5. Además los vehículos con capacidad de carga útil de 1,000 kg o más deberán operar con sistemas mecanizados de carga y descarga. 6. Durante su transporte, los RPBI sin tratamiento no deberán mezclarse con ningún otro tipo de residuos. 5. ¿En qué consiste el tratamiento de RPBI? Los RPBI serán tratados por...