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Determinación Cualitativa de Clorfenamina...

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1Producto Integrador de Aprendizaje. Determinación de Clorfenamina

Nombre de los integrantes: Lizbeth Monserrat Rangel González 1754617 José Fernando Castillo García 1844954 Nombre de la asignatura: Analítica. Nombre del facilitador: Dra. Minerva Villanueva Rodríguez San Nicolás de los Garza a 31 de mayo del 2019

Contenido

ii

INTRODUCCIÓN:.........................................................................................................................iv Clorfenamina (Maleato de clorfenamina)........................................................................................v PROPIEDADES TERAPÉUTICAS DE LA CLORFENIRAMINA...........................................v EFECTOS SECUNDARIOS DE LA CLORFENIRAMINA SOBRE EL SISTEMA NERVIOSO CENTRAL.............................................................................................................vi Aplicaciones:..............................................................................................................................vi Propiedades fisicoquímicas...........................................................................................................vii Forma Comercial.......................................................................................................................vii Pruebas de identidad:....................................................................................................................viii Determinación:................................................................................................................................1 MATERIALES Y MÉTODOS.....................................................................................................1 Reactivos y disoluciones:............................................................................................................1 Equipos y accesorios:..................................................................................................................2 Método Cromatográfico:.............................................................................................................2 Espectrofotométrico:....................................................................................................................2 Validación:...................................................................................................................................2 RESULTADOS Y DISCUSIÓN..................................................................................................3 Desarrollo del método de cromatografía para la cuantificación de MC......................................3 Selección de la composición de la FM, la longitud de onda y columna de trabajo.....................3 Influencia de los productos de degradación.................................................................................5 .........................................................................................................................................................6 Estudios de validación.................................................................................................................7 Lista de referencias..........................................................................................................................9 Apéndice........................................................................................................................................10 Vita.................................................................................................................................................11

INTRODUCCIÓN:

iii

La Clorfenamina Maleato es un antagonista de los receptores H1 de histamina; además actúa como inhibidor de la recaptura de serotonina y norepinefrina. Este mismo es un medicamento que es utilizado solo o en combinación con otros fármacos; se usa para aliviar los síntomas producidos por la rinitis, resfriado y para otras variables de alergias. En el presente producto integrador de aprendizaje se mostrara la determinación de dicho fármaco mediante la cromatografía líquida de alta resolución en una formulación farmacéuticas en tabletas llamada kogrip®, que es la marca comercial de una formulación farmacéutica que contiene paracetamol 325 mg (PA) y maleato de clorfeniramina 2 mg (MC) como ingredientes farmacéuticos activos (IFAs) y se presenta en forma de tabletas. Posee una acción analgésica - antipirética y antihistamínica. Está indicada para la prevención y el tratamiento de estados gripales y de rinitis. Sus acciones analgésicas y antipiréticas son semejantes a las del ácido acetilsalicílico y, aunque no posee la potencia antiinflamatoria de los salicilatos, se ha utilizado de manera satisfactoria en aquellos pacientes que presentan alergia o intolerancia a la aspirina. Bloquea de forma periférica los impulsos del dolor mediante la inhibición reversible de la ciclooxigenasa, enzima que interviene en la síntesis de prostaglandinas. Su acción antipirética sucede al deprimir los centros termorreguladores del hipotálamo, por lo que se produce un aumento en la disipación del calor corporal por vasodilatación y aumento de la sudación.

Clorfenamina (Maleato de clorfenamina).

iv

La Clorfenamina o Clorfeniramina es un antialérgico, del grupo de los antihistamínicos que bloquea los efectos de la histamina responsable de los síntomas en casos de alergia. Fármaco antihistamínico sintético perteneciente al grupo de las alquilaminas. Es un bloqueador de los receptores H1 de histamina. Compite con la histamina en los receptores H1 del tracto digestivo, útero, grandes vasos y músculos lisos de los bronquios. El bloqueo de estos receptores suprime la formación de edema, constricción y prurito que resultan de la acción de la histamina, los efectos anticolinérgicos son moderados. Los efectos sedantes se deben a una acción sobre los receptores histamínicos del SNC. Se puede administrar por vía oral, ya sea en forma de jarabe, de elixir o de comprimidos, o por vía parenteral. La acción antihistamínica de la clorfeniramina reside en el isómero óptico dextro (+) o Dclorfeniramina. En la composición de medicamentos, la clorfeniramina se utiliza principalmente en la forma racémica (maleato de clorfeniramina), aunque también hay medicamentos que contienen D-clorfeniramina. El uso con finalidades terapéuticas de la clorfeniramina data de 1951 y, desde entonces, se utiliza en el tratamiento de diversos trastornos, especialmente reacciones alérgicas. PROPIEDADES TERAPÉUTICAS DE LA CLORFENIRAMINA Los resultados de los estudios realizados han puesto de relieve que, tanto sola como en combinación con la cimetidina, antagonista de los receptores H2 , es útil para aliviar los síntomas del resfriado ,así como para tratar la urticaria idiopática crónica. La clorfeniramina mejora la broncoconstricción de los asmáticos, y aumenta el flujo espiratorio forzado. En la actualidad, la clorfeniramina se usa en el tratamiento sintomático de los resfriados, catarros, procesos gripales y diversas reacciones alérgicas.

v EFECTOS SECUNDARIOS DE LA CLORFENIRAMINA SOBRE EL SISTEMA NERVIOSO CENTRAL. Provoca somnolencia diurna, comprobada a partir de medidas tanto subjetivas [69-74] como objetivas. Se ha comprobado asimismo que la toma de clorfeniramina causa un aumento en el número de errores en tareas de coordinación visuomotora y en la detección de estímulos visuales relevantes (designados) y auditivos. A la atención auditiva humana, se ha constatado que la toma de clorfeniramina la altera, como se desprende de diversos estudios. En primer lugar, su toma produce un aumento de la latencia del potencial evocado ERP. Aplicaciones: En la área farmaceutica: Tratamiento sintomático de: • Urticaria. • Prurito grave y resistente al tratamiento.

Propiedades fisicoquímicas.

vi

Nombre IUPAC: 2-[(p -cloro)- -[2-dimetilaminoetil] ben-cil]piridina. Estado físico: polvo Apariencia: blanco, cristalino Olor: inodoro pH: 4 - 5 (de una solución al 1%) pKa: 9.1 Ka: -0.959041 Punto de fusión: 130-135 oC Solubilidad: 0.25g/mL (agua), 0.1g/mL (alcohol), 0.1g/mL (cloroformo); ligeramente soluble en éter o benceno. Fórmula molecular: C16H19ClN2.C4H4O4 Peso molecular: 390.87 g/moL (5) Estabilidad: Debe conservarse en recipientes herméticos y protegidos de la luz. Incompatibilidades: Cloruro cálcico, sulfato de kanamicina, tartrato ácido noradrenalina, pentobarbitona sódica, meglumina iodipamida. Forma Comercial. Presentación farmacéutica: Jarabe, tabletas, cápsulas. Vía de administración: Grupo Terapéutico:

Oral

Bloqueador.

Pruebas de identidad:

vii

Reacciones cromáticas y de otro tipo 1. Agítese 1 porción de la sustancia problema 2 con 5 ml de cloroformo R, fíltrese y evapórese el filtrado en baño María. Disuélvase el residuo en 2,0 ml de agua, añádanse 3 gotas de cloruro férrico (25 g/l) SR y caliéntese hasta la ebullición; aparece un color naranja amarillento. 2. En sendos tubos de ensayo divídase la solución problema 1 en dos partes iguales. A uno de los tubos agréguese 1,0 ml de ácido sulfanílico SR. Caliéntense ambos tubos hasta ebullición; la solución problema tratada presenta un color amarillo definido, mientras que el de la otra sigue siendo amarillo pálido tenue. 3. Añádase 1 gota de permanganato potásico (10 g/l) SR a la solución problema 2; el color morado desaparece. 4. Agréguense aproximadamente 20 ml de agua a la sustancia problema 3, caliéntese para disolver y fíltrese. Añádanse al filtrado 10 ml de solución saturada de trinitrofenol R en agua y caliéntese en baño María durante 5 minutos; se forma un precipitado. Fíltrese, lávese el precipitado con agua, recójase el precipitado y póngase a secar a 105°C durante 1 hora; comportamiento de fusión, aproximadamente 196°C con descomposición.

Determinación: MATERIALES Y MÉTODOS 3 lotes de la formulación Kogrip elaborados en los Laboratorios Solmed La Habana, Cuba. Los ingredientes farmacéuticos no activos (exipientes) utilizados son los correspondientes a las tabletas de Kogrip, compuestos por: Celulosa Microcristalina, Polivinil Pirrolidona, Carboximetil Almidón Sódico, Magnesio Estearato y otros. Reactivos y disoluciones: I.

MC y PA, estándares de referencia certificado del Centro Investigaciones y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM).

II.

Cuba.

III.

MC, PA, ácido maleico, materia prima calidad farmacéutica.

IV.

Disolución de (MA) 6,0 y 0,06 µg/mL.

V. VI. VII.

VIII. IX. X.

Disolución de PA 1,0 y 10,0 µg/mL. Disolución al 1,0 % de ácido maleico. Disoluciones de 1,0 % y 0,01 µg/mL de 4-aminofenol.

Disolución de buffer fosfato de pH 6,22. Fosfato de potasio monobásico (KH2PO4) (99,5 %), Rietilamina, (98 %)

XI.

acetonitrilo (CH3CN),

XII.

(Chromasolv, 99,8 %),

XIII.

Metanol (CH3OH).

XIV.

(Chromasolv, 99,8 %), 2- propanol (99 %) todos p.a y de procedencia Riedel-de Haën Alemania.

XV. XVI. XVII. XVIII.

Papel de filtro de cuantificación rápida. Agua bidestilada, (Bidestilador GFL-2104, Alemania). Filtro de jeringuillas 0,45 µm. Cristalería de laboratorio certificada.

Equipos y accesorios: I. Cromatógrafo líquido KNAÜER (Bomba Smartline K-1000, II.

detector Smartline 2600 (Con arreglo de diodos),

III.

inyector RHEOYNE 7725i,

IV.

Loop 20 mL

V. VI. VII.

Zaranda Horizontal HS 501 D IKA pHmetro Radiometer PHM-82 Espectrofotómetro Jasco V-530 con celdas de cuarzo de 1 cm de paso óptico, (España).

VIII. IX.

Columnas KNAÜER, Lichrosorb CN 10 µm 100A (150 x 4,6); (250 x 4,6) mm LiChrosorb Diol 10 µm 100A, (250 x 4,6) mm, (Alemania).

Método Cromatográfico: Se utilizó una columna Lichrosorb-100 Diol, 10 µm de (250 x 4,6) mm DI, con flujo de 1,2 mL/min. y el loop de 20 µL. La FM se preparó con disolución de buffer de fosfato de pH 6,22 –acetonitrilo –isopropanol. Patrón y muestra se prepararon a concentración de 6,0 µg/mL y disueltas en FM. Se determinó a longitud de onda de 262 nm. Espectrofotométrico: A partir de un procesamiento único de la muestra, del filtrado con concentración de MC 6,0 µg/mL se preparó una disolución de concentración 10,0 µg/mL de PA, se utilizó cubetas de cuarzo de 1 cm de paso óptico y se midió la absorbancia a 243 nm. Validación: Para el ensayo de especificidad se registraron los cromatogramas del placebo cargado con el analito a concentraciones de 25, 50, 75,100 y 125 % y fueron comparados los factores de respuesta de las regresiones lineales con y sin placebo; se identificaron en los cromatogramas los valores de tiempo de retención (tr) de cada analito y de los productos de degradación, ácido maleíco y 4-aminofenol (1%). En el PA se evaluó la absorción en Ejemplo:

el ultravioleta

del MC y el 4-aminofenol. Para la linealidad se

determinó el ajuste al modelo lineal, la prueba de linealidad y proporcionalidad. En la exactitud del método se ensayaron tres niveles de concentraciones (80,100 y 120) %. Para el parámetro de precisión se realizaron los estudios, a dos niveles de concentración por sextuplicado y precisión intermedia con la participación de tres analistas en tres días a un nivel de concentración por sextuplicado. RESULTADOS Y DISCUSIÓN Desarrollo del método de cromatografía para la cuantificación de MC Selección de la composición de la FM, la longitud de onda y columna de trabajo Se realizó un diseño de experimentos 23 con el fin de establecer las proporciones adecuadas de los disolventes en estudio (Tabla 1). Se analizaron los siguientes parámetros: números de platos teóricos (N), tr, resolución (R) y asimetría (T), teniendo como límites que R debe ser mayor de 2; T debe ser menor de 2; N mayor de 1000 y tr inferior a 10 min. El experimento 6 (Tabla 2) tiene tr menores de 10 min., R mayor de 2 entre el PA y la Clorfeniramina. Con esta proporción de disolventes se realiza la comparación en dos columnas. La primera, Lichrosorb CN 100, (250 x 4,6) mm DI, 10 µm y la segunda una Lichrosorb Diol 100, (250 x 4,6) mm DI, 10 µm. Ambas columnas presentan buenos resultados pero la columna LiChrosorb-100 Diol muestra mayor número de platos teóricos.

Comparación de columnas y longitudes con las condiciones de FM del experimento 6.

Los tiempos de retención del ácido maleico y del PA fueron de 0,9 y 2,3 min. con la columna CN y con la columna Diol fueron de 1,8 y 2,4 respectivamente. Los resultados mostrados confirman que el máximo de absorción a 262 nm es donde se obtienen los mejores resultados. (Tabla 2) Sistema cromatográfico propuesto: Columna: Lichrosorb-

100 Diol, 10 µm (250x 4.6) mm. Flujo: 1,2 mL/min. Longitud de onda: 262 nm. Loop: 20 µL. FM buffer fosfato pH 6,22-acetonitrilo-isopropanol (10:10:35). Concentración Inyectada de MC 6,0 µg/mL, y PA 1 mg/mL. Estudio de especificidad en la determinación cromatográfica Influencia del Placebo. La matriz en estudio está compuesta por los analitos y el placebo. A partir de la disolución patrón de MC 300,0 μg/mL, se prepararon diferentes disoluciones de trabajo en el rango de 50 a 150 %.De los resultados de este estudio con y sin placebo y su comparación estadística se observa que no existen diferencias significativas entre las variabilidades de las dos poblaciones (estadígrafo F), ni entre sus medias (estadígrafo T) (p-valores superiores a 0,05), (Tabla 3) así como se tiene la certeza de que la presencia del placebo, no influyó al no existir componentes cuyos picos afecten la determinación de la clorfeniramina, o sea que dichos componentes no tuvieron efecto matriz que influyan en los resultados de la correcta cuantificación del analito en estudio.

Resultados estadísticos.

F = 0,674 p-valor = 0,462 T = -2,011 p-valor = 0,053

Influencia de los productos de degradación. El Ácido Maleico existe como producto de la síntesis del MC y el 4-aminofenol como producto de degradación para el PA. Se evaluó la interferencia de las especies en la determinación de la clorfeniramina; se prepararon muestras que contenían el 1,0% de 4aminofenol y ácido maleico.

Fig. 5. Cromatograma de 4-aminofenol

Los tr de estos analitos son diferentes al de la clorfeniramina (4,6 min.), 4-aminofenol, (2,5 min.) y el ácido maleico (1,1 min.).El cromatograma de una muestra real, donde

están presentes todas las posibles interferencias, (Fig. 7), se aprecia que todos mantienen tr diferentes al de la clorfeniramina. El ácido maleico eluyó a 1,9 min., el PA se obtuvo a 2,5 min., mientras que la Clorfeniramina se mantuvo a 4,6 min. Por lo que existió buena resolución y no existieron interfencias con los compuestos de la matriz y el analito de interés. Se comprobó la pureza de las señales por DAD Resultados que demostraron que el método es específico. Estudios de validación A partir de los resultados (Tabla 4) se observó para la validación del método cromatográfico y espectrofotométrico (Tabla 5), que en las pruebas de linealidad de ambos métodos los coeficientes de correlación fueron superiores a 99,0 %. Los valores de factores de respuesta fueron inferiores al 5 %, lo que evidenció fuertes relaciones entre las variables dependientes concentración y las independientes áreas del pico y absorbancia respectivamente para cada método.

Lista de referencias García F.. (2009). “VALIDACIÓN DE LA METODOLOGÍA ANALÍTICA DE CUANTIFICACIÓN DE CLORFENIRAMINA MALEATO, DEXTROMETORFANO BROMOHIDRATO, FENILEFRINA CLORHIDRATO Y GUAIFENESINA EN DOS JARABES COMERCIALES POR CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN” . Mayo 25, 2019, de UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y FARMACIA Sitio web: http://biblioteca.usac.edu.gt/tesis/06/06_2763.pdf Métodos de prueba. 25 mayo, 2019, de Un recurso de la Organización Mundial de la Salud Sitio web: http://apps.who.int/medicinedocs/es/d/Jh1797s/5.html https://apps.who.int/medicinedocs/es/d/Jh2920s/29.html González, O.. (2018). Clorfenamina: para qué sirve, efectos secundarios, peligros y usos. Mayo 31, 2019, de La Guía de las Vitaminas Sitio web: https://laguiadelasvitaminas.com/para-que-sirve-la-clorfenamina/ http://fnmedicamentos.sld.cu/index.php?P=FullRecord&ID=482 Serra J.M, Sánchez M. & Grau C.. (2002). Efectos secundarios del antihistamínico clorfeniramina sobre el sistema nervioso central. Mayo 31, 2019, de - Sitio web: Efectos secundarios del antihistamínico clorfeniramina sobre el sistema nervioso central Lavielle E., Valdés I., Suarez O., Guas M.. (2015). Determinación de maleato de clorfeniramina por cromatografía líquida de alta resolución y paracetamol por espectrofotometría ultravioleta en tabletas de Kogrip®./High resolution liquid chromatography determination of Chlorphenamine Maleate and ultraviolet. mayo 31,

2019, de Revista CENIC Sitio web: https://revista.cnic.edu.cu/revistaCQ/articulos/determinaci%C3%B3n-de-maleato-declorfeniramina-por-cromatograf%C3%ADa-l%C3%ADquida-de-alta-resoluci%C3%B3ny http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1810-634X2016000200010 http://apps.who.int/medicinedocs/es/d/Jh1789s/4.html http://www.facmed.unam.mx/bmnd/gi_2k8/prods/PRODS/Clorfenamina.htm...