Podłoża PDF

Preview

Summary

Przydatna notatka...

Description

POYWKI I PODŁOA Poywkami lub podłoami nazywa si mieszaniny rnych zwizkw chemicznych, ktre stwarzaj optymalne warunki dla rozwoju drobnoustroj w in vitro. Poywka powinna odpowiada nastpujcym wymogom: ■ Odpowiednia warto odywcza ■ Odpowiednia izotoniczno podłoa ■ Odpowiedni odczyn pH ■ Klarowno ■ Sterylno

Odpowiednia warto odywcza Podłoa powinny zawiera wszystkie konieczne składniki zapewniajce wzrost: rdło energii, wgla i azotu, jony, a take pierwiastki ladowe. ■ rdło wgla - cukry (glukoza, maltoza, laktoza, celuloza, skrobia), ■ pierwiastki biogenne – wgiel, tlen, wodr, azot, fosfor, siarka (C, O, H, N, P, S), ■mikroelementy ■ rdło azotu ◻zwizki nieorganiczne (NaNO3, NH4, NO3) ◻ zwizki organiczne (enzymatyczny hydrolizat kazeiny, pepton - produkt trawienia białka pepsyn, aminokwasy) Zawarto cukru i substancji białkowych w poywce wynosi 0,5 - 2 %.

Odpowiednia izotoniczno podłoa Cinienie osmotyczne musi by takie samo jak w komrkach drobnoustrojw. Uzyskuje si je przez dodanie do podło NaCl do uzyskania stenia 0,5 %. Podłoe hipotoniczne (o niszym cinieniu osmotycznym ni komrkowe), powoduje pcznienie, a nawet pkanie komrek. Podłoe hipertoniczne ( o wyszym cinieniu osmotycznym ni komrkowe) nastpuje kurczenie si plazmy i oddzielenie od ciany komrkowej.

Odpowiedni odczyn pH; Musi odpowiada danej grupie drobnoustroj w, dla ktrej przygotowane jest podłoe. Dla bakterii optymalny jest odczyn słabo alkaliczny pH = 7 (7,2 - 7,4), dla grzybw pH = 5,5 - 6,5.

Klarowno; Konieczna do wizualnego stwierdzenia wzrostu kultury (okre lenie stopnia zmtnienia). Nie dotyczy to podł zawierajcych składniki nierozpuszczalne np. CaCO3.

Sterylno; Warunkuje prawidłow prac w laboratorium, umoliwia poprawne okrelenie cech morfologicznych, fizjologicznych i biochemicznych.

PODZIAŁ PODŁOY MIKROBIOLOGICZNYCH I. Wg właciwoci fizycznych (konsystencja): 1. Płynne 2. Płpłynne 3. Stałe

II. Ze wzgldu na charakter składnikw: 1. Naturalne 2. Płsyntetyczne 3. Syntetyczne

III. Ze wzgldu na warto  uytkow: 1. Proste 2. Wzbogacone 3. Wybirczo-namnaajce 4. Rnicujce 5. Kombinowane 6. Specjalne

I. Podział poywek ze wzgldu na właciwoci fizyczne (konsystencj): ■ płynne – słu głwnie do namnaania drobnoustrojw ◻ bulion, ◻ mleko, ◻ brzeczka (płprodukt stosowany przy produkcji piwa przygotowywany ze słodu jczmiennego, chmielu i innych dodatkw). ■ płpłynne – zawieraj 0,15-0,5% agar i słu do hodowli mikroorganizmw o mniejszym zapotrzebowaniu na tlen; na podłoach tych bada si rwnie ruch bakterii; ◻ bulion z dodatkiem 0,15 - 0,5% agaru ■ stałe – zawieraj 1,5-2% agar i słu obok namnaania bakterii do ich rnicowania; ◻ podłoa elatynowe (bulion + 10 - 15% elatyny) ◻ agarowe (bulion + 1,5 - 2% agaru) ◻ cita surowica ◻ cite podłoe jajowe

II. Podział poywek ze wzgldu na charakter składnikw 1. Naturalne – podłoe o nie w pełni zdefiniowanym składzie chemicznym zawierajce wycigi z tkanek rolinnych lub zwierzcych, hydrolizaty białkowe, itp. ◻ mleko odtłuszczone lub pełne, serwatka, bulion odywczy, brzeczka, wycigi z gleby, ziemniakw, drody, jaja, krew. 2. Płsyntetyczne – s czciowo poznane pod wzgldem składu substancji odywczych, np. podłoe M9 wg Adamsa wzbogacone dodatkiem glukozy i autolizatu drody (do hodowli drobnoustrojw Proteus sp. i Escherichia sp.); (syntetyczne zwizki chemiczne + składniki naturalne) ◻ mleko z lakmusem, ◻ agar ziemniaczany z tiamin. 3. Syntetyczne – złoone ze zwizkw chemicznych o cile okrelonym i znanym składzie chemicznym (jakociowym i ilociowym); Zazwyczaj stosowane w postaci płynnej, konsystencj stał nadnkowym lub bardzo dokładnie oczyszczonym agarem ◻ poywka Kozera, ◻ poywka Sołtysa

III. Podział poywek ze wzgldu na warto uytkow 1. Podłoa proste ■ pozwalaj na rozwj wikszoci bakterii ■ najszersze zastosowanie ■ podstawa do przygotowania innych typw poywek zaliczamy: ◻ bulion odywczy, ◻ agar odywczy, ◻ elatyn odywcz

2. Podłoa wzbogacone ■ słu do hodowli drobnoustrojw o znacznych wymaganiach odywczych, ktre słabo lub w ogle nie rosn na poywkach podstawowych, a do swojego rozwoju potrzebuj  specyficznych zwizkw ■substancje wzbogacajce: ◻ krew 5-10%, ◻ surowica, ◻ wycig drodowy, ◻ glukoza, ◻ łtko jaja.

3. Podłoa wybirczo - namnaajce ■ uywane do wyosobniania tylko okrelonego gatunku drobnoustroju z materiału silnie zakaonego inn flor, ■ podłoe podstawowe + czynnik wzmagaj cy wzrost danych bakterii + odczynnik hamujcy wzrost niepodanych drobnoustrojw ■ Np. poywka Mller-Kauffmanna: ◻ ł wzmaga namnaanie pałeczek rodzaju Salmonella ◻ ziele malachitowa lub brylantowa hamuje wzrost E.coli ■ poywka SF wg Leifsona: dla Salmonella i Shigella - inhibitorem wzrostu dla innych bakterii jest kwany selenin sodowy.

4. Podłoa rnicujce (identyfikacyjne) ■ stosowane do odrniania poszczeglnych gatunkw bakterii na podstawie ich odmiennych właciwoci biochemicznych, ■ do stałych poywek rnicujcych zaliczamy: ◻ podłoe Krumwieda (Salmonella, Shigella, Escherichia, Klebsiella), ◻ podłoe Kliglera; ■zawieraj substancj , ktra musi by rozłoona enzymatycznie przez okrelone szczepy bakterii, a przez inne nie naruszona; takimi substancjami mog  by np. cukry, alkohole, glikozydy, ■do płynnych: barwny szereg poywek

5. Podłoa kombinowane (wybirczo – rnicujce) ■ stosowane w odrnianiu poszczeg lnych gatunkw bakterii na podstawie odmiennych właciwoci biochemicznych, ■ oglny skład: ◻ podłoe odywcze ◻ substancja diagnostyczna ◻ wskanik (indykator) ◻ inhibitor (barwniki, antybiotyki, sole kwasw organicznych)

6. Podłoa specjalne ■przeznaczone do hodowli drobnoustrojw o szczeglnych wymaganiach odywczych ■do tej grupy zalicza si: ◻ poywk Lfflera (maczugowce błonicy) - zawiera surowic cielc lub barani ◻ poywka Lewensteina-Jensena (prtki grulicy) - zawiera białka i łtka jaj ◻ poywka Tarozziego-Wrzoska (hodowla beztlenowcw) - zawiera zmielon wtrob, pokryta jest warstw płynnej parafiny ◻ agar czekoladowy (hodowla małych pałeczek)

Przygotowujc podłoa naley: ■ - uywa szkła odpowiednio umytego i wypłukanego; ■ - przestrzega cile przepisw przygotowywania poywek (odwaa dokładnie składniki, ■ uwaa na kolejno ich dodawania i na uwodnienie soli); ■ - uywa tylko wody destylowanej; ■ - ustali odpowiednie pH podłoa; ■ ■- do jałowienia rozla je do kolb o odpowiednich objtociach (nigdy nie wicej ni 3⁄4 objetoci naczynia) gdy mog kipie; ■ - kolby zakorkowa korkami lub nałoy kapturki z folii aluminiowej; ■ – zautoklawowa

Rozlewanie podł; A. Bulion odywczy (podłoe płynne w probwkach) ◻ Przygotowa w statywie sterylne probwek z korkami o pojemnoci 15 ml; ◻ Odkorkowa kolbk z podłoem i opali jej wylot w płomieniu palnika; ◻ Rozlewa bulion po 3 ml ◻ Opali wylot probwki i zamkn j; ◻ Opali wylot kolby i zamkn korkiem; B. Podłoe agarowe płpłynne (w probwkach) C. Podłoe agarowe stałe na płytkach Petriego ◻ Odkorkowa kolbk z poywk i opali jej wylot w płomieniu palnika; ◻ Uchyli lekko wieczko szalki Petriego i wla do niej poywk tak, aby utworzyła na dnie kilkumilimetrow warstw (około 10-12ml podłoa); ◻ Zamkn płytk ; ◻ Ponownie opali w płomieniu wylot kolby z podłoem i zamkn j korkiem; ◻ Płytk pozostawi na stole do czasu zestalenia podłoa; ◻ Po zabezpieczeniu schowa płytk z podłoem do lodwki; D. Podłoe agarowe stałe -skos, płskos, słupek (w probwkach) ■ Do kolby o pojemnoci 250 ml odway 1.5 g sproszkowanego agaru i wla 100 ml poywki LB. ■ Kolb zamkn foli aluminiow. Zautoklawowa przy nadcinieniu 1 atm. przez 30 minut. ■ Po ostygniciu (ok. 50-60°C) rozla agar odywczy na płytki....