Análisis de Semen PDF

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Análisis de semen...

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TOXICOLOGIA Y QUIMICA FORENSE INDICIOS BIOLOGICOS SEMEN OBJETIVO 

Identificar los espermatozoides en la muestra fresca y seca.

INTRODUCCION Es innegable que existen indicios biológicos, huellas que se producen e intervienen en la comisión de hechos o conductas presuntamente delictuosas, que pueden encontrarse en cualquier superficie donde estos hagan contacto, es importante identificar el origen y la evidencia de los indicios biológicos, a través de los procedimientos científicos y técnicas forenses que proporcionan la química, la física y la biología para el estudio y análisis de las evidencias. El espermatozoide se encuentra en las células más pequeñas del organismo, su longitud es de 0.04 a 0.06 mm, tiene forma de un filamento en la que se distinguen tres partes: cabeza, zona intermedia y cola. El camino que estos deben recorrer es extenso, salen de las células de sertoli, pasan a los túbulos seminíferos hasta llegar al conducto deferente y luego llegan a la uretra en la eyaculación, en cada eyaculación la cual está constituida por un medio viscoso proporcionado por las vesículas seminales y la próstata. Puede afirmarse que estas manchas son de suma importancia, ya que se encuentran en gran frecuencia en delitos sexuales de cualquier género, incluso tanto en el sujeto activo como en el pasivo, aparecen de modo constante en sabanas, camas, toallas, papel sanitario, productos desechables y de tela, ropa interior, braguetas de pantalón masculino, pisos, tazas sanitarias, asientos de automóviles, y de manera directa en la vagina. Para su estudio debe observarse lo siguiente: a) Es necesario conocer si existe alguna mancha de semen visible; en general estas manchas se aprecian por el color característico blanco semitransparente y de aspectos grumoso cuando sea frescas, y son de color amarillento y textura endurecida cuando no son muy recientes, con una sensación almidonada al tacto b) Una mancha fresca, seca o raspada que se observe sobre alguna superficie, puede corroborarse con la aplicación de luz ultravioleta, y presenta un color blanco azulado fluorescente, o sea que para identificar una mancha de semen es necesario contar con espermatozoides para su posterior identificación. c) Cuando la mancha es más vieja o ha sido raspada es muy posible que se destruyan los espermas, en tal caso se tendrá que recurrir a las pruebas químicas. MATERIAL Y REACTIVOS MATERIALES Porta objetos Hisopos Semen seco Semen fresco Microscopio Tubos de ensayo Gradilla Mechero Cronometro

REACTIVOS Solución fisiológica Tinción de Azul de metileno Colorante de cristal violeta Solución iodo inodurada (Lugol) Alcohol etílico absoluto 95% Colorante de safranina Agua destilada

PROCEDIMIENTO Muestra seca. Después de que las muestras se han extraído de la tela, los restos celulares se recogen por centrifugación, se realiza el extendido en una laminilla, se fija, se tiñe y se observa al microscopio.

Muestra fresca Poner una pequeña gota de la muestra y hacer un extendido en la porta objetos, fijar, teñir y observar al microscopio. Tinciones para la observación 

Tinción con Azul de Metileno 1 Fijar el frotis que contiene la muestra problema por medio del calor como en el caso anterior. 2 Cubrir la preparación con el colorante azul de metileno. Dejarlo actuar durante 1-2 minutos. 3 Retirar el colorante y lavar con agua. 4 Observar al microscopio con aceite de inmersión, e igual objetivo

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Tinción Gram 1. Previamente realizar un frotis o extendido de semen con una gota de muestra problema, anteriormente obtenida, según sea el caso. Dejar secar ligeramente al calor de un mechero para fijar o también se puede hacer con metanol. 2. Añadir el reactivo de Cristal violeta, hasta cubrir toda la muestra; dejarlo actuar durante 1 minuto y lavar con agua destilada. 3. Cubrir nuevamente el portaobjetos con lugol, dejar actuar durante 1 minuto. Decolorar con agitación utilizando alcohol etílico y dejar actuar durante 30 segundos, secar y agregar safranina. 4. Dejar actuar durante 30 segundos y lavar con agua destilada. 5. Observar al microscopio con aceite de inmersión.

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Tinción de Wright 1. Realizar un frotis o extendido de semen con una gota de muestra problema, anteriormente obtenida, según sea el caso. Dejar secar ligeramente al calor de un mechero para fijar o también se puede hacer con metanol 2. Se agrega el colorante de Wright de manera que el frotis quede completamente cubierto, se deja reposar por 5 minutos. 3. Se agrega, mediante una piseta, solución amortiguadora de manera que se forme una capa metálica. Se debe tener cuidado de no derramar el colorante fuera del frotis. Se deja reposar durante 10 minutos. 4. Se lava el frotis con agua corriente hasta el eliminar el exceso de colorante. 5. Se deja secar la preparación al aire. 6. Observar al microscopio con aceite de inmersión.

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Tinción con Azul de Metileno (Muestra de semen recuperado) 1. Tomar muestra en seco de semen en tela o gasa, con un hisopo realizar raspado sobre la muestra problema 2. Colocar en un tubo solución salina y sumergir hisopo con muestra de semen. 3. Centrifugar tubo durante 5 min. A 3500 rpm. 4. Colocar una gota de solución de la muestra problema sobre una porta objetos

5. 6. 7. 8.

Fijar el frotis que contiene la muestra problema por medio del calor como en el caso anterior. Cubrir la preparación con el colorante azul de metileno. Dejarlo actuar durante 1-2 minutos. Retirar el colorante y lavar con agua. Observar al microscopio con aceite de inmersión, e igual objetivo

RESULTADOS  Tinción con Azul de Metileno

IMAGEN 1. Tinción con Azul de Metileno

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Tinción Gram

IMAGEN 2. Tinción de Gram

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INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS Los espermatozoides se observan coloreados tanto la cabeza como el cuerpo de color azul.

Tinción de Wright

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS Las células espermáticas aparecen teñidas: la cabeza de color rosa y el resto del cuerpo y cola de color azul.

IMAGEN 3. Tinción de Wright

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

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Tinción con Azul de Metileno (Muestra de semen recuperado)

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IMAGEN 4. Tinción con Azul de Metileno (Muestra de semen recuperado)

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS Los espermatozoides se observan coloreados tanto la cabeza como el cuerpo de color azul.

DISCUSIÓN Debido a la composición del semen, en condiciones adecuadas, los espermatozoides pueden permanecer vivos fuera del organismo durante varios días. El análisis básico de la muestra de semen se llama seminograma. En él se valoran, entre otros parámetros, el volumen, la concentración, la movilidad y la morfología de los espermatozoides. El análisis de semen nos indica el estado funcional del aparato genital masculino y nos orienta sobre posibles patologías. En cuanto a la escena de un delito con frecuencia las manchas de semen se encuentran en estado seco en diferentes soportes como son: las prendas de vestir de la víctima y del agresor; así como en superficies de muebles, alfombras, pisos, toallas, sábanas, papel higiénico, entre otros. Las prendas de vestir, están diseñadas con diferentes fibras textiles como algodón, poliseda, material sintético. El tipo de textura de la fibra textil y su composición química influye en la absorción y conservación del semen. (2) CONCLUSIÓN Como se mencionó existen varios factores que pueden alterar la morfología de los espermatozoides como lo es el tiempo, la temperatura y la textura de las telas de donde es recolectado. Al realizar esta práctica pudimos identificar espermatozoides mediante muestra de semen fresca y otra en muestra seca realizando un extendido y posteriormente las tinciones y la observación, es de vital importancia realizar bien la técnica de recolección de muestra seca ya que si no se hace adecuadamente no se podrá recuperar ni observar morfología espermática.

REFERENCIAS

Allard, J. (2009). Fluidos en delitos sexuales. En J. Fraser r. William. (Eds). Libro de ciencias forenses. Pág. 157-158; 160; 166-168. Londres William Publishing 2: Ariagno J. (2016). Guía práctica para la evaluación del semen. 22/02/2019, de Departamento de Bioquímica Clínica, Facultad de Farmacia y Bioquímica Sitio web: file:///C:/Users/Acer/revista-aba-80-3-2016-guia-practica-para-laevaluacion-ariagno-y-col-web.pdf...