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POLICÍA CIENTÍFICA Y LABORATORIO FORENSE GRADO EN CRIMINOLOGÍA

INVESTIGACIÓN DE MANCHAS DE ESPERMA

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CONTENIDOS

1. ANTECEDENTES HISTÓRICOS

2. CONCEPTOS

3. TÉCNICAS DE ESTUDIO DE LA MUESTRA

4. RECOGIDA DE MUESTRAS EN DELITOS DE AGRESIÓN SEXUAL 5. EL CASO “JIMENA HERNÁNDEZ”

6. UN CASO DE NEGLIGENCIA

1. ANTECEDENTES

La identificación de fluido seminal constituye un viejo problema en Criminalística. En 1826, Olliver d’Angers y Barruel informaron sobre un caso de agresión sexual donde se sospechaba que ciertas manchas en la ropa de la víctima fueron hechas intencionalmente con grasa de origen animal. Los expertos analizaron las ropas con respecto a su solubilidad en agua, naturaleza, color y conducta en alcohol absoluto. Ambos concluyeron que la mancha era de semen. En aquella época los investigadores se guiaban sólo por estos parámetros.

En 1827, Orfila, informó de una serie de test químicos para la identificación de fluido seminal basados en la apariencia de las manchas, cambios de color y consistencia obtenidos mediante la acción del calor e inmersión en agua, olor emitido por la mancha humedecida, y la conducta del extracto acuoso frente a un número de reactivos y tratamientos. Las manchas seminales fueron comparadas con otros tipos de secreciones vaginales, y con manchas de mucus nasal y saliva. Aseveró que era muy difícil, si no imposible, encontrar células intactas en extractos de manchas, y que los procedimientos químicos deberían ser empleados siempre. En 1839, Devergie, publicó un trabajo en el cual había encontrado células de esperma en manchas seminales de 10 meses, y afirmó

que la confirmación de la presencia de espermatozoides en una mancha era un criterio más cierto para diagnóstico de manchas seminales que los métodos químicos. En ese mismo año, Bayard publicó un extenso documento acerca del uso del microscopio en el examen de manchas seminales para comprobar la presencia de espermatozoides.

En 1879, Brouardel revisó las técnicas para la identificación de manchas seminales, recomendando el uso del microscopio como la técnica principal.

Ninguno de los test no morfológicos usados durante la mayor parte del siglo XIX ha sobrevivido. La mayoría de las autoridades empezaron a confiar más en la detección de células de esperma para la identificación de manchas seminales alrededor de 1840. El test Florence para la identificación de manchas seminales fue introducido en 1896.

Pollack en 1948 estableció una distinción entre "aspermia" y "azoospermia". La primera condición se caracteriza por una ausencia total de espermatozoides en la eyaculación. La eyaculación de una persona que sufre de aspermia, según Pollack, no se debe llamar semen. El término "azoospérmico" se refiere a

cualquier muestra seminal en el que los espermatozoides maduros no están presentes.

2. CONCEPTOS

Actualmente se hace muy evidente que el estudio de las manchas de esperma supone un avance muy importante para la criminalística, ya que puede constituir una prueba muy precisa a la hora de investigar casos que atentan contra la libertad sexual de las personas principalmente, pudiendo identificar así identificar al agresor o agresores. El médico forense se encarga de recoger las muestras biológicas en víctimas y agresores. Mientras que los indicios de posibles manchas de semen encontrados en la escena del crimen corresponde al laboratorio de biología forense de las Fuerzas y Cuerpos de Seguridad del Estado.

Se denomina esperma, semen o líquida seminal al producto de la secreción del aparato genital masculino, que aparece en el hombre

después de la madurez sexual, cuya función específica estriba en la fecundación. Es de aspecto lechoso, opalescente y ligeramente amarillo. Posee un Ph de 7.2-7.3 y está compuesto por elementos celulares (como los espermatozoides, que pueden ser separados por centrifugación y contienen ADN) y por elementos no celulares que forman el plasma seminal (sirven de nutrición, soporte y transporte de las células).

El plasma seminal está compuesto a su vez por: Cloruro de Na

200 mg%

Dióxido de Carbono

50 ml%

Fósforo inorgánico

40-50 mg%

Fósforo Ácido soluble

95 mg%

Fósforo de la espermina

15-30 mg%

Calcio

24-25 mg%

Glucosa

200-300 mg%

Urea

72 mg%

Ácido Láctico

90-100 mg%

Colesterol

80 mg%

La eyaculación normal consta de 1.5 a 6 ml de fluido. Las anormalidades son la hipospermia (volumen inferior a 1.5ml) y aspermia (falta de semen). Los espermatozoides son células móviles constituidas por una cabeza, cuello, cuerpo y cola. Con una longitud que varía de las 50 a 70 micras. Se calcula que en el producto normal de una eyaculación se encuentran alrededor de 60.000.000 unidades de espermatozoides por ml. de semen.

Cabeza: Es de forma ovoide vista de frente y piriforme de perfil; mide de 4-5 micras de longitud. Contiene el núcleo haploide cubierto por el acrosoma y un par de centriolos detrás del núcleo. El acrosoma contiene enzimas como la hialuronidasa y la acrosina que facilitan la penetración del espermatozoide al ovocito.

Segmento intercalar: Región que une la cabeza con la cola y que contiene la carga mitocondrial que provee la energía necesaria

(ATP) para la movilidad del espermatozoide. Es de forma cilíndrica, mide 5 micras de longitud.

Cola: Da la movilidad al espermatozoide. Tiene una longitud de 40-50 micras de longitud.

DATOS DE LABORATORIO Para Calcular la data de la muestra de semen, se debe de observar la movilidad de los espermatozoides. Son móviles incluso a las 24h después de haber tomado una muestra de la vagina de la víctima; 43h después de muestra tomada en el cuello y cavidad uterina. Son móviles durante 5h en el resto de localizaciones. Espermatozoides inmóviles se pueden encontrar hasta 7 días después de la eyaculación en la vagina; hasta 3 días en el recto y hasta 24h en la boca. Sin embargo, algunos autores afirman haber identificado espermatozoides en vaginas de cadáveres hasta 77 días después de los hechos, y en boca hasta 40 días después.

Como regla general, se aprecia movilidad hasta las 24h después de la eyaculación. Células inmóviles hasta 4 días después.

Por otra parte, la enzima segregada (fosfatasa ácida) persiste hasta 4 años en muestras secas (manchas en ropa). Se puede determinar su existencia hasta en un 99,4% de las muestras. También se puede encontrar tras 24h en vagina la PSA (antígeno específico prostático). El ADN es el ácido desoxirribonucleico responsable de contener toda la información genética de un individuo o ser vivo, información que es única e irrepetible en cada ser ya que la combinación de elementos se construye de manera única.

El ADN de la cabeza de los espermatozoides es habitualmente la fuente más importante de ADN como prueba del delito en casos de

ataque

sexual.

5

microlitros

de

semen

contienen

aproximadamente la misma cantidad de ADN que 50 de sangre. Para liberar el ADN de las cabezas de los espermatozoides se requieren métodos de extracción especiales.

La extracción de ADN a partir de muestras de semen puede resultar problemática, ya que es habitual hallar mezclas de semen con células epiteliales vaginales u otros fluidos biológicos

procedentes de la víctima. Eso dará lugar a una mezcla de perfiles genéticos en el genotipado de las muestras, por lo que será necesaria la separación de los diferentes tipos celulares para poder discriminar el perfil genético masculino del femenino.

3.TÉCNICAS DE ESTUDIO DE LA MUESTRA Una mancha es cualquier suciedad o depósito sobre una superficie, corporal o no corporal, originada por la adición de algún producto.

Una mancha de esperma tiene que pasar varias pruebas o diagnósticos para poder determinarse científicamente que efectivamente se trata de fluido seminal:

Diagnóstico de orientación: los soportes donde suele asentarse las manchas de espermas son ropas, superficies corporales,

paredes, suelo, etc. Esta prueba sirve para reconocer manchas de esperma. a) método físico: sobre soportes absorbentes, las manchas de semen presentan un

color grisáceo, con bordes irregulares, que

se torna amarillento en manchas viejas. Si el soporte, a su vez, es flexible se produce una consistencia de apergaminada al tacto. Sobre

soportes

no

absorbentes,

presentan

un

depósito

característico formado por una película o escamas brillantes (costras).

b) método luminoso: se utiliza luz UV de onda corta (de 254nm). Las manchas de semen presentan una típica fluorescencia amarilla aunque puede reaccionar con elementos cruzados como sangre, orina o saliva. La lámpara Bretton, luz azul o luz forense toma en cuenta la fluorescencia de fondo, por lo que el observador debe

usar gafas con un filtro especial para eliminar la luz de fondo y dejar pasar la luz fluorescente que proviene de la propia mancha.

Diagnóstico

de

certeza:

como

no

podemos

asegurar

científicamente que una mancha es o no de esperma por su apariencia física, necesitamos pruebas de certeza en el laboratorio. a) método cristalográfico: reacción de Florence basada en la formación de cristales de yoduro de Colina (componente del esperma). Este reactivo está constituido por: - Yodo metálico 2,54 grms. - Yoduro de potasio 1,56 grms. - Agua destilada 30 ml. Se corta una pequeña área de la mancha y se deja macerando en esta solución 24h. Obtener una gota del macerado y se deposita

sobre un portaobjeto para llevar a secar a la estufa. Se coloca un cubreobjeto sobre el residuo y se agrega el reactivo de Florence. Se debe dejar en reposo unos 20 minutos y tras ello ya se puede observar en el microscopio.

Los cristales de yoduro de Colina son láminas romboidales de color pardo. Para sujetos vasectomizados es un buen método. La fosfatasa ácida prostática hidroliza la fosforil colina, dejando libre la colina que al unirse al yoduro forma los cristales de Florence.

b) método enzimático: esta prueba se considera como la más concluyente para detectar la presencia de semen en usencia de espermatozoides. Se realiza cuando los métodos microscópicos presentan resultados negativos. El contenido de esta enzima (fosfatasa ácida prostática) es hasta 400 veces mayor en semen humano que en cualquier otro fluido, por lo que se hace cuasi imposible obtener un falso positivo. Esta enzima constituye el 20% del semen, se elimina en la fracción previa a la eyaculación, incluso antes que los espermatozoides.

Está presente cuando el coito no ha finalizado. También es posible encontrarlo incluso en sujetos azoospérmicos. Se debe de tocar la zona de la prenda en donde se sospeche que existe una mancha de semen con un soporte humedecido para producir la transferencia de esta enzima al soporte.

c) método microscópico: es el método más utilizado. Consiste en la observación de espermatozoides al microscopio. Se han llegado a detectar espermatozoides móviles en líquido de lavado vaginal hasta 24h. después de la violación. E inmóviles, en manchas secas, hasta 100 días después de haber ocurrido el suceso.

d) método cromatográfico: Los espermatozoides son demasiado pequeños para observarse a simple vista, es por ello que la criminalista utiliza diferentes métodos de tinción, y luego realiza una observación al microscopio. Se conoce que el técnicas de tinción para los espermatozoides es

número de

variado

y

múltiple. Tinción Gram: Desarrollada por el Doctor Gram en 1984, usada para clasificar bacterias sobre la base de sus formas, tamaños, morfologías celulares y reacción Gram (color). Es una coloración muy útil para el análisis

de

evidencia de espermatozoides.

Tinción Cristal Violeta: En la forma pura, el violeta de cristal se presenta como lustrosos cristales azul verdosos que funden a 137° Celsius. Son solubles en agua, etanol, dietilenglicol, y dipropilenglicol. Tinción “Árbol de Navidad”: se tiñe con rojo rápido nuclear dejar secar

20 minutos y se lava con agua corriente. Se debe a temperatura ambiente. Tras ello se

contrasta con pícrico índigo carmín durante 1 minuto y se realiza un montaje

húmedo

para

observar

en

el

microscopio. El resultado que muestra es la cabeza del

espermatozoide de color rojo y el fondo (citoplasma celular) de color verde.

4. RECOGIDA DE MUESTRAS EN DELITOS DE AGRESIÓN SEXUAL Muchas de las posibilidades técnicas que nos ofrece la prueba del ADN están supeditadas a la calidad de la muestra, lo que en muchos casos es inherente a la propia muestra, pero a veces

depende de los procesos de recogida y envío de muestras al laboratorio. Además, la admisibilidad de la prueba en los Tribunales de Justicia depende, en gran medida, de cómo se hayan realizado dichos procesos y del cumplimiento de la Cadena de Custodia.

Cuando se lleva a cabo la recogida de muestras, tanto dubitadas como de referencia, deben mantenerse una serie de precauciones encaminadas a proteger tanto al personal que realiza dicha recogida como a la propia muestra.

PROTECCION DEL PERSONAL: Siempre que se manipula material biológico humano es prudente asumir que este tipo de material puede contener patógenos potencialmente peligrosos y por tanto ser una posible fuente de infección (VIH, hepatitis, tuberculosis, meningitis... etc). Por ello es necesario mantener una serie de precauciones universales como las que a continuación se detallan: - Prevenir, en todo momento, el contacto directo del operario con la muestra mediante el uso de guantes, mascarilla, bata u otro tipo de ropa protectora. - Prohibir el consumo de comidas y bebidas, así como de tabaco.

- Extremar las condiciones de asepsia y siempre que sea posible utilizar material desechable. Una vez terminada la recogida de muestras, tirar todo el material desechable utilizado en contenedores

para

residuos

biológicos,

para

eliminarlos

posteriormente según las normas de destrucción de residuos biológicos.

PROTECCION DE LAS MUESTRAS: Son numerosos los procesos que pueden afectar a la integridad de una muestra y por tanto a la posible obtención de perfiles genéticos a partir de los vestigios biológicos existentes en ella. Estos procesos, que en algunos casos son inherentes a la muestra, en otros pueden producirse o incrementarse cuando la recogida y envío de muestras al laboratorio se lleva a cabo de una forma defectuosa. Estos procesos son: a) Contaminación por material biológico humano: Se debe al depósito de material biológico humano, en el lugar de los hechos y/o en el cuerpo de la víctima, con posterioridad a la producción del delito. Puede estar causada por personas ajenas a la investigación como curiosos o familiares, o por personas que colaboran en la investigación y que de forma accidental o por desconocimiento, producen la contaminación. Es frecuente durante el proceso de recogida de indicios si no se mantienen unas

precauciones mínimas y también por defectos en el empaquetado de las muestras.

b) Transferencia de indicios biológicos: Se debe al traslado, normalmente accidental, de los indicios de una localización a otra, lo que puede dar lugar a una contaminación o puede ocasionar la perdida de una prueba. Los vestigios biológicos que sufren con más facilidad este cambio de localización son los pelos.

c) Contaminación microbiológica: Este tipo de contaminación tiene lugar por el desarrollo de microorganismos y suele estar favorecida por la humedad y las altas temperaturas. Normalmente se produce o incrementa por defectos en el empaquetado y conservación de las muestras hasta su envío al laboratorio.

d) Contaminación química: Se debe a la presencia de productos químicos que van a dificultar algunos de los procesos del análisis genético, fundamentalmente la amplificación y extracción de ADN. Se produce fundamentalmente cuando las muestras se envían inmersas en productos conservantes como el formol o cuando se realizan estudios previos con sustancias químicas (p.e., estudio de huellas dactilares) que pueden comprometer el análisis de ADN.

Los procesos descritos podrían evitarse o minimizarse si se mantienen algunas precauciones básicas como son: 1. Aislar y proteger lo más rápidamente posible la escena del delito y, salvo que alguna circunstancia lo impida, los indicios biológicos deben ser los primeros en ser recogidos. 2. Usar guantes limpios que deben cambiarse con frecuencia, especialmente

cuando

se

manipulan

indicios

biológicos

susceptibles de tener distinto origen. 3. Evitar hablar o estornudar sobre las muestras. Usar mascarilla. 4. Usar bata u otro tipo de ropa protectora. 5. Utilizar instrumental desechable (de un solo uso) siempre que sea posible o limpiarlo bien antes de recoger cada indicio biológico. 6. No añadir conservantes a las muestras. 7. Dejar las muestras secar a temperatura ambiente, en un lugar protegido, antes de empaquetarlas para su envío definitivo al laboratorio. 8. Empaquetar cada muestra por separado. 9. Siempre que sea posible, empaquetar las muestras en bolsas de papel o cajas de cartón, evitando utilizar plástico.

10. Una vez terminada la recogida de muestras, tirar todo el material desechable utilizado (guantes, pipetas, papeles....) en bolsas de basura o contenedores para residuos biológicos, para eliminarlo posteriormente según las normas de destrucción de residuos biológicos.

RECOGIDA DE INDICIOS SOBRE PERSONA VIVA La toma de muestras de referencia en personas vivas debe hacerse con autorización judicial y tras el consentimiento informado de la persona a la cual se le practica, así como una autorización expresa de cesión de la muestra para análisis genéticos con fines identificativos.

La exploración debe ser completa ya que las muestras que no se tomen y procesen en las primeras horas, será muy complicado que posteriormente se rescaten y utilicen en la investigación.

Cuando se presenta un caso de delito sexual, el primer contacto que la posible víctima tiene con un profesional de la salud es con un Médico Forense o con un Médico Clínico.

El primer paso que debe realizar el médico es la entrevista personal, donde el objetivo es obtener información sobre las condiciones y circunstancias que rodearon los hechos que se investigan (modo, tiempo, lugar, tipo de relación con el agresor…). Así mismo se indagan antecedentes sexuales, ginecoobstétricos y médico-quirúrgicos para realizar diagnósticos diferenciales.

TOMA DE MUESTRAS A LA VÍCTIMA

La toma de muestras es obligatoria y, además, completa como anteriormente se ha indicado. Se realiza una inspección de las prendas en busca de restos de fluidos o elementos que el agresor pudiese haber transferido durante los hechos. Para ello se coloca a la víctima sobre una sábana para retirar la ropa y que no se pierda ningún resto. Se realiza la técnica de la doble torunda, que consiste en pasar sobre la zona seca un primer algodón impregnado de suero salino, y posteriormente un segundo algodón seco que recogerá el material recuperado.

El examen ex...