Mapa mental aula prática de microbiologia IV PDF

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Mapa mental com anotações referentes ao protocolos utilizados nas aulas práticas de microbiologia (identificação de bactérias)...

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Análise dos testes bioquímicos  Provas bioquímicas para identificação de enterobactérias => para identificação das enterobactérias foram utilizados 14 tubos. Cada tubo contém um ágar nutritivo e um reagente especifico que detecta a mudança de pH do meio. A bactéria consome os nutrientes do ágar e depois secretas metabolitos ácidos. Esses metabolitos alteram o pH do meio e graças ao reagente ocorre uma mudança de coloração que indica se o teste é positivo ou negativo. Alguns desses metabolitos além de alterar o pH também produzem um gás. Obs.: os testes realizados foram específicos para bactérias Gram negativas fermentadoras de glicose.  Reagentes:  Dextrose: fermentação de carboidratos - glicose  Ácido produzido promove uma mudança de cor do: vermelho  amarelo  Amarelo  resultado positivo  Vermelho (sem mudança de cor)  resultado negativo Como todas as bactérias testadas eram fermentadores de glicose, foi feito um segundo teste a partir desse tubo de dextrose. Foi colocado um tubo de Durhan de cabeça para baixo dentro do tubo de dextrose. Se a bactéria liberar gás ao degradar glicose, esse tubinho apresentará uma quantidade de bolhas gás presas no fundo. Figura 1 - Tubo de dextrose com resultado positivo à esquerda e negativo à direita. Observar a presença de bolhas de gás no tubo de Durhan.

 Sacarose: fermentação de carboidratos – sacarose  Ácido produzido promove uma mudança de cor do: vermelho  amarelo  Amarelo  resultado positivo  Vermelho (sem mudança de cor)  resultado negativo Neste caso é possível perceber a produção da enzima invertase, que quebra a sacarose em frutose e glicose, que será posteriormente metabolizada. Figura 2 - Tubo de sacarose com resultado positivo à esquerda e negativo à direita.



 Lactose: fermentação de carboidratos – lactose Ácido produzido promove uma mudança de cor do: vermelho  amarelo  Amarelo  resultado positivo  Vermelho (sem mudança de cor)  resultado negativo

Neste caso é possível perceber a produção da enzima beta-galactosidase, que quebra a ligação galactosídica, liberando a glicose para ser metabolizada.

Figura 3 - Tubo de lactose com resultado positivo à esquerda e negativo à direita.

 Lisina, arginina e ornitina: fermentação de aminoácidos

As bactérias que crescem num meio líquido fazem a descarboxilação - retirada de um grupo carboxila de um aminoácido – de forma mais intensa quando o ambiente é anaeróbio e ligeiramente ácido. Além disso, cada enzima descarboxilase é específica para o aminoácido. Por isso foram utilizados três aminoácidos: lisina, arginina e ornitina. Muitas descarboxilases são ativadas por em um pH baixo, causado por produtos ácidos provenientes da fermentação. Ao remover os grupos ácidos dos aminoácidos são produzidas aminas que aumentam o pH do meio neutralizando o pH do meio.  

Ácido produzido promove uma mudança de cor do: roxo  amarelo Descarboxilação do aminoácido que neutraliza o meio causa mudança de cor do: amarelo  roxo

Os ácidos produzidos, a partir da fermentação, vão, inicialmente, baixar o pH do meio e causar uma mudança de cor do indicador de: roxo  amarelo. Então, o pH ácido ativa a enzima que causa descarboxilação do aminoácido neutralizando o meio, que muda novamente: amarelo  roxo o

Lisina:

No tubo contendo lisina, a descarboxilação de aminoácidos resulta na produção de uma amina, a cadaverina.  

Roxo  resultado positivo Incolor/amarelo  resultado negativo

Figura 4 - Tudo com lisina mostrando resultado positivo

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Arginina:

No tubo contendo arginina, a descarboxilação de aminoácidos resulta na produção de uma amina, a citrulina.  

Roxo  resultado positivo Incolor/amarelo  resultado negativo

Figura 5 - tubo com arginina com resultado positivo à esquerda e negativo à direita.

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Ornitina:

No tubo contendo ornitina, a descarboxilação de aminoácidos resulta na produção de uma amina, a putrescina.  

Roxo  resultado positivo Incolor/amarelo  resultado negativo

Figura 6 - Tubo com ornitina com resultado positivo à esquerda e negativo à direita.

 Ureia: produção de uréase

Existem bactérias que utilizam a enzima uréase. Essa enzima possui a capacidade de degradar a ureia presente no meio liberando amônia, CO2 e H2O. A amônia forma o carbonato de amônia que alcaliniza o meio. 

O indicador de pH é o vermelho de fenol, que em meio alcalino toma a coloração rosa  Rosa  resultado positivo 

Pêssego  resultado negativo

Figura 7 - Tubo com uréase com resultado positivo à esquerda e negativo à direita.

 Vermelho de metila (VM): fermentação de glicose

Com o vermelho de metila avalia-se se as bactérias produzem ácidos a partir da fermentação da glicose, pela via ácida mista. Algumas bactérias, durante a fase final de incubação, convertem os ácidos produzidos em metabolitos não ácidos, como o etanol e a acetoína. Isso causa o aumento do pH (pH 6). Por isso foi observada as colorações: 

pH abaixo de 4,4 é vermelho  resultado positivo.

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pH acima de 6 é amarelo  resultado negativo. Figura 8 - Tubo com Vermelho de metila com resultado positivo à esquerda e negativo à direita.

 Vogoes proskauer (VP): fermentação de glicose

Algumas bactérias fermentam a glicose produzindo acetil-metil- carbinol, butilenoglicol e pequenas quantidades de ácidos. Adiciona-se hidróxido de potássio – indicador de mudança de pH – homogeneíza-se o tubo e o deixa destampado para, na presença de O2 o acetil-metil- carbinol ser oxidado a diacetil. A adição de alfa-naftol, nesta reação, catalisa a produção de um anel vermelho tijolo:  

Vermelho  resultado positivo Amarelo  resultado negativo Figura 9 - Tubo com VP com resultado positivo à esquerda e negativo à direita.

 Citrato: fermentação de citrato O citrato determina se a bactéria é capaz de utilizar o citrato de sódio como única fonte de carbono para crescer. Foi utilizado o meio Citrato de Simmons, contendo citrato de sódio, fosfato de amônia e azul de bromotimol. Sua utilização pela citrase produz hidróxido de amônia, que eleva o pH, fazendo com que a reação se torne azul. Os tubos continham meio inclinado para a cultura ter mais acesso ao oxigênio, que é necessário para utilização do citrato.  

Azul  resultado positivo Verde  resultado negativo Figura 10 - Tubo de citrato de Simmons com resultado positivo à esquerda e negativo à direita

 Motilidade: capacidade de se movimentar Foi utilizado um meio semi-sólido que permitiu o crescimento bacteriano no interior do meio. A inoculação é feita com uma picada através da haste de inoculação. Se a bactéria apresenta alguma forma de locomoção ela cresce por todo o tubo. Se ela não apresenta essa estrutura ela só apresenta crescimento no local onde foi inoculada.  

Meio turvo  motilidade positiva Meio turvo somente no local de inoculação  motilidade negativa Figura 11 - Tubo mostrando motilidade da bactéria com resultado positivo à esquerda e negativo à direita

 H2S: degradação de aminoácidos com enxofre Algumas bactérias degradam aminoácidos que contém enxofre, através do tiossulfato redutase. Assim, é produzido o gás H2S, que reage com o ferro, formando um precipitado preto (sulfeto ferroso). Para que essa reação aconteça, o meio tem que estar ácido.  

Presença de precipitado preto  resultado positivo Tubo incolor  resultado negativo Figura 12 - Tubo com H2S com resultado positivo à esquerda e negativo à direita

 Fenilalanina: fermentação de aminoácidos Há algumas bactérias que produzem enzimas responsáveis por remover o grupo amina da fenilalanina presente no meio. Assim, surge o ácido fenilpirúvico, que reage com o cloreto férrico – adicionado 5 gotas posteriormente - formando uma cor verde.  

Anel verde  resultado positivo Anel amarelo  resultado negativo Figura 13 - Tubo com fenilalanina com resultado positivo à esquerda e negativo à direita.

 Triptofano: fermentação de aminoácidos  Produção de indol A degradação do aminoácido triptofano pela enzima triptofanase resulta na formação do grupo indol. A prova foi realizada inserindo a bactéria no meio contendo excesso de triptofano. Depois foi adicionado 5 gotas do reativo de Kovacs. Quando o reagente de Kovacs age ocorre a formação de um anel rosa.  

Anel rosa  resultado positivo Anel amarelo/esverdeado  resultado negativo

Figura 14 - Tubo com triptofano com resultado positivo à esquerda e negativo à direita....