S1 Généralités techniques -2 PDF

Preview

Summary

ce sont mes notes de cours ...

Description

S1-Techni quesHi st ol ogi ques etcyt ol ogi ques Défini t i ons • En sembl edec el l ul esquis ’ ass oc i entpourf or merunt i ssu.Lescel l ul esd’ un

t i s sus ontas s oc i éesàdesmol écul esECetdesl i qui desbi ol ogi ques . • Or gane=c ons t i t uédepl us i eur st i s s us • Appa r ei l=c ons t i t uédepl us i eur sor ganesetv aas sur erunef onct i on

bi ol ogi ques péc i fi que.App.di ges t i f ,r es pi r at oi r e, …. • Hi st ol ogi eper metd’ ét udi erl amor phol ogi ed’ unt i s s uetd’ unOr gane.Et udede

l ar el at i onst r uc t ur ef onct i on

I-Di ffér entt ypesdemi cr oscopi es 1)Mi c r os copi eopt i que Mi c r os c opedet r av ai l/Mi c r os c opeder ec her c he( pl uss ophi s t i qué,c oupl éàune camér anumér i que) Onut i l i s eenmi c r os c opi eopt i quedescoupesde3à5µm,di s pos éess urunel ame dev er r e.

2)Mi c r os copeél ect r oni que àt r ans mi s si on( MET) • Et udedel ’ ul t r ast r uct ur edel ac el l ul eetdes esor gani t es( c ont r ai r ementà

mi c r os c opephot oni quemoi nspr éc i s).I mageennoi r&bl anc,c ol or at i ons ef ai t apr ès. Mi c r os c opi eél ec t r oni queàbal ay age( MEB) • El ec t r onssontf oc al i sésàl asur f aced’ unéc hant i l l onetsontr éfl éc hi s

I I-Pr épar at i ondeséchant i l l onsbi ol ogi quesav ant l ’ obs er v at i onmi c r os copi que Ons econc ent r es url apr épar at i onauxmi c r os c opesopt i queses s ent i el l ement

•Lepr él èvement ,l i qui deous ol i de •Lafixat i on( pr éser v el as t r uct ur ec el l ul ai r eett i s s ul ai r e) .Doi têt r ef ai t er api dement apr èsl epr él èv ementpourévi t erunedét ér i or at i on •L’ i ncl usi on,pourl espr él èv ement ss ol i des •Lacoupe •Lescol or at i ons

=>Cesét apess ontv al abl espourl aMEetl aMO

1)Di ffér ent smodesdepr él èv ement Sol i de:t i s s usouc el l ul es .Peutdur erpl us i eur ss emai nes . Li qui de:Cel l ul ess eul es .I ln’ yapasd’ i nc l us i on,etdoncl apr oc édur epour l ’ obs er v at i ones tpl usr api dequepourunpr él èv ements ol i de.

Pr él èvement sSOLI DES

• Pr él èv ementc hi r ur gi cald’ or ganesl or sd’ uneaut opsi e( néc r ops i e) ,àpar t i edu

XVI es . • Pr él èv ementc hi r ur gi cald’ unor gane= —ect omi e • Pr él èv ementd’ unf r agmentd’ or gane=bi opsi e( s ousAG ,A. l ocal eou

endoscopi e)

=>Onf ai tens ui t euneEt udeHi st ol ogi que

Pr él èvement sLI QUI DES • Ponc t i onsàl ’ ai gui l l e( v ei neus es ,k y st es ,cav i t épl eur al e,LCR,ar t i c ul ai r e, …) • Pr él èv ement sd’ ur i ne, …

2

=>Et udechi mi queet /ouét udecyt ol ogi que

Aut r est echni quesdepr él èvement

• Fr ot t i s=r ac l aged’ unor ganecr eux( cav i t ébuc c al e,v agi n,colut ér i n)

•Enut i l i s antunécouv i l l on( s or t edec ot ont i ge) ,unes pat ul e,ouenc or e unebr os s e.

•Onét al el epr él èv ementsurunel amedev er r equ’ onpr épar eà l ’ obs er v at i on • Br ossage

•Br os s agebr onc hi queav ecunendos c ope =>Et udesc y t ol ogi quespourcesmét hodes

2)Tec hni quesdepr épar at i onc yt ol ogi ques Rec uei lsurl amedev er r epar:

•ét al ement •empr ei nt e •cent r i f ugat i on •cyt ocent r i f ugat i on Pui sfix at i on,c ol or at i onetobs er v at i on

• Recuei lsurl amedever r e • Av ecét al ementsurl amedev er r edansl ec asd’ unf r ot t i ssangui n

•Et al ementopt i mal:occ upemoi t i éou1/ 3del al ame •I lnef autpasqueças oi tt r opépai s •I lf autobt eni runec ouc heuni c el l ul ai r edesél ément sfi gur ésdus ang r épar t i ss urt outl ef r ot t i s ,pourper met t r euncompt ageetuneanal y s e del af or medescel l ul es 3

• Pa rempr ei nt e:appl i c at i ond’ unef r act i ond’ unor ganes urunel amedev er r e:

l escel l ul ess ecol l ents url al ame

•Ex:gangl i onsl y mphat i ques • Pa rcent r i f ugat i ondesl i qui des:i s ol erl esc el l ul es

•Cel l ul esens us pens i onsontc ent r i f ugées ,onobt i entl ec ul otetun s ur nageant( qu’ onél i mi ne) .

•Onét al eens ui t el ec ul ots urunel amedev er r epourl ’ ét udi er Cyt ocent r i f ugat i on:une parr appor tà pr éc édemment .Les êt r edi r ec t ementdi s pos és dev er r eparpr oj ect i on.

•

ét apeenmoi ns c el l ul esv ont s urunel ame

Di s pos i t i fde

c y t oc ent r i f ugat i on

• Fi xat i on • Pe r metl ac onser v at i ondesconst i t uant st i s sul ai r esetcel l ul ai r es • Pr év i entl ’ aut ol y s ec el l ul ai r e • I mmobi l i s edesmol éc ul es«i ns i t u»:onobs er ver al acel l ul eenl ’ ét atoùel l ese

t r ouv eaumomentdel afi x at i on • Do i têt r ef ai t e:

•Rapi dementapr èsl epr él èv ement •Rappor téc hant i l l on/ v ol umefix at eurde1à5 •Tempsdefixat i onv ar i eenf onc t i onduv ol umedepr él èv ement( r api de pourc y t ol ogi e) 4

•Nombr euxfix at eur ssel onl est ec hni quesetc ol or at i ons -Mél angeal cool / ét her ,ac ét one,par af or mal déhy de, … •Pourl ef r ot t i ss angui n,onfix epars éc hageàl ’ ai r+al c oolmét hy l i que • Col or at i on

• Mé t hodesmanuel l es:demoi nsenmoi nsut i l i s ées ,saufpourl esdemandes

t r èss péc i fi quesetponc t uel l es . • Aut omat edecol or at i on:pl us i eur sbacs ,pr ogr ammat i ondut empspour

c haquebac .

•Col or at i onMCG •Col or at i onPapani c ol aou • Ex empl esdec ol or at i on

•Pourl e

f r ot t i ss angui netc el l ul es c y t oc ent r i f ugées ,onfix e s éc hageàl ’ ai retal cool mét hy l i que(cont enu l eMCG)

par dans

=Col or at i ondeMay-Gr unwal d-Gi emsa( MCG)

eudemét hy l ène,az ur sdemét hyl ène,éos i ne Mél angedec ol or ant s:bl 5

>Noy aux:v i ol et >Cy t opl asme:bl euour os ec l ai r >Gr anul at i onsI nt r ac y t opl as mi ques :v i ol et /or anger os e/v i ol etf onc é

•Pourl e

f r ot t i sv agi naletc er v i cov agi nal ,onfix egr âc eà mél angeal c ool / ét her

un

=Col or at i onde Papani col aou

er t-or ange-vi ol et Mél angedec ol or ant s:v >Cy t opl asmedesc el l ul ess uper fi c i el l es:Ros e >Cy t opl asmedesc el l ul esdescouc hesmoy ennes:Bl eu

3)Aut r est echni quesdec yt ol ogi eàvi s éedi agnos t i que Apar t i rdecul t ur escel l ul ai r esdel y mphoc y t esdus angoudec el l ul esdul i qui de amni ot i que Apar t i rdecul t ur esvi vant es:Anal y s edel amobi l i t édessper mat oz oï des

4)Lest ec hni quesdepr épar at i onhi s t ol ogi quespourbi ops i es •Fi xat i on •Préparat i onàl acoupe,i nc l us i onenpar affine •Coupe( 3à5µm) •Col or at i ons 6

•Observat i onaumi cr oscopeopt i que Pourl espr él èvement sdegr andet ai l l e:néces s i t éd’ uneét udemac r os c opi queen amont .Par f oi spl usi eur séc hant i l l onsàanal y s erpourl emêmepr él èv ement . LaFi xat i on Dur ée:2à5Hpourl espet i t spr él èv ement s , j us qu’ à24/ 48Hpourl esgr ospr él èv ement s opér at oi r es .

•

• No mbr euxmél angesdefix at eur s:

•Et hanol:c oagul el espr ot éi nes •For mol:r ét i c ul el espr ot éi nes •Aci dePi cr i que,aci deacét i que La

Pr épar at i onàl a

coupe

I nfi l t r at i on Dés hydr at at i on

• Dé shydr at at i on

•Subst i t ut i ondufix at eurparunl i qui dedés hy dr at anthy dr ophi l e( ét hanol ) •Bai nss uc ces si f sd’ ét hanolenconc ent r at i onc r oi ss ant e( ét hanol50/ 50° à100° )

•Al afi ndel adés hy dr at at i on,l est i s s uscompor t ent60% d’ ét hanol100° 7

>Ut i l i s at i ondec as s et t esenf er mantc hac uneunpr él èv ement ,afindet r ai t er pl us i eur spr él èv ement senmêmet emps .

• L ’ i nfil t r at i on

•Subst i t ut i ondel ’ ét hanolparuns ol vantor gani quehy dr ophobe( x y l ène) •Bai nssucces s i f sdex y l èneenc onc ent r at i onc r oi s s ant e( 50xy l ène/ 50 ét hanolà100°x yl ène)

•Al afindel ’ i nfi l t r at i on,l est i s suscompor t ent60% dexyl ène •Remar que:l ex y l ènes ol ubi l i s el esl i pi des( i mpactsurl esadi pocyt es, quicompor t entunev ac uol el i pi di quei mpor t ant equidi s par ai t=> appar ai s sentl esl acunesbl anches )

• I mpr égnat i on

•Lamat i èr ev i v ant eesti nc ol or eetmol l e( di ffic i l eàs ec t i onner ) •Par affine: -Mol éc ul esl i néai r esd’ hy dr oc ar bur ess at ur és -Li qui deaudel àde45°C -Sol i deetbl anc hât r eàT°ambi ant e -Sol ubl edansl ess ol v ant sor gani quesx y l ène •Subst i t ut i ondux y l ènepardel apar affinef ondue( 50à60° C) •Bai nssucces s i f sdepar affineenc onc ent r at i onc r oi ss ant edansl exy l ène 50par affinel i qui de/50xy l èneà100% par affine

•Al afindel ’ i mpr égnat i on,l est i s susc ompor t ent60% depar affinel i qui de. • L ’ i ncl usi on:per metl edur c i s s ementetl epr él èv ement

•Labi ops i ees ti nc l uedansl apar affinef onduedansunmoul e,onr et i r ede l apl aquec hauffant eetl apar affines es ol i di fi eens ui t e

•Al afindel ’ i nc l usi on,l est i s s uscompor t ent60% depar affines ol i di fiée

8

• LaCoupe • Ona t t endenv i r on24hpui soncoupedesbl oc sdepar affineauMi cr ot ome • Onc ommenc epardégr os s i r ,pui sonf ai tdescoupes«enr uban»àdes

ét agesdi ffér ent s ,pourav oi runei déedel ac omposi t i ondupr él èv ementdans s agl obal i t é. • Mont ageetcol l agedescoupes

•Lescoupessontmont éesetcol l éess urunel amedev er r e.Lapar affine adhèr enat ur el l ementàl al ame

•Séchagei ndi spens abl eav antl ac ol or at i on:surunepl aquec hauffant e oudansuneét uv e;

Caspar t i c ul i er:Let i s s uos seux L ’ i nc l usi ondut i s suos s euxnondéc al c i fiénepeutêt r ef ai tdansl apar affine. • So i t:Ut i l i s at i ond’ uner és i nes péc i fiquepourt i s s udur e:r és i nepl as t i que

—>c oupesav ecuncout eaupourobj etdur • So i t:déc al c i fi cat i ondel ’ ospourl er endr epl usmou

• LesCol or at i ons • L amat i èr evi v ant ees ti nc ol or e=néces s i t edesc ol or at i ons • L escol or ant ss ’ ut i l i s entenphas eaqueus e,orl escoupescont i ennent60% de

par affine,hy dr ophobe.DONC

•Dépar affinagepr éal abl e •Réhy dr at at i on

• Dé par affinage

9

•Oni mmer gel esc oupesdansl exy l ènepours ol ubi l i serl apar affine •Onr i nceàl ’ ét hanolpourél i mi nerl es ol v ant •Onr i nceàl ’ eau:r éhydr at at i ondesc oupes • Mont agedesl amesetl amel l esapr èscol or at i on

•Lescoupescol or éess ontf r agi l esetdoi v entêt r epr ot égées —>onut i l i s eunec ol l e+unel amel l edev er r e

•Lescoupessegar dentai ns ipl us i eur sannéesdepr éf ér enc eàl ’ abr i del al umi èr epournepasal t ér erl esc oul eur s

• Ex empl esdec ol or at i on • Col or at i onst opogr aphi quesder out i ne:pourv oi rl ’ or gani s at i ondest i s s us

ent r eeuxaus ei nd’ unecoupe.

•TRI CHROME: -Col or antnuc l éai r e -Col or antc y t opl as mi que -Col or antdesfibr esdel aMEC —>Remar que:L ’ ut i l i sat i onuni quementd’ unc ol or antnuc l éai r eas s oc i é àunc ol or antc y t opl asmi queestposs i bl eetcons t i t ueunec ol or at i on bi chr omi queder out i ne

☛ Col or antnucl éai r ev i ol et:Hémat oxyl i ne ☛Col or antc y t opl as mi quer ouge:-Eosi ne -Fuchsi ne( de+en+) -Phl oxi ne ☛ Col or antduc ol l agène(c ons i t uantl esTCs) -Ver t -

( l umi èr e) Bl eu( Mét hyl ène) Jaune( Saf r an)

• Col or at i onshi st ochi mi ques:Per met t entl adét ect i ondegr oupement s

s péc i fiques( SH,SO4, …)oudecons t i t uant ss péc i fi quesd’ unec el l ul e ( Gl y c ogène,mucus ,pi gment s )

•

Dét ect i ondeGAG av ecunec ol or at i onau Al ci an

sul f at és, Bl eu

Car t i l age

•Dét ect i on

deconst i t uant s gl uci di ques:

-

c ol or at i ont r i chr ome

-

Col or at i onauP. A. S (per i odi cac i ds c hi ff):mi s e év i denc ede muc opol y s acc har i des ( muc us )

en

11

=>Remar que:l ac ol or at i onauP. A. Sper metaus s ider epér erl es membr anesbasal es= él ément sac el l ul ai r esà l ’ i nt er f ac ed’ un épi t hél i um et d’ unTC.

•Dét ect i on

d’ i ons( Fer ,Cal c i um,Al u, …)

Fer( enbl eu) .Onv oi t égal ementl esadi pocy t es

Lesz onesc al c i fi ées appar ai s s entenv er t

•Dét ect i on

decomposant sI C

-

Col or at i ondeFont ana-

Mas s on

dansl ’ épi der me

Mi s eenév i denc edel a del apeau( ennoi r )

12

mél ani ne

-Col or at i on

ar gent i quedeGr i mél i us

Mi seenév i denc edec el l ul es dansl ’ i nt es t i n char géengr ai ns

endoc r i nes ( c yt opl as me noi r s )

•Dét ect i ondecomposant smacr omol écul ai r esdel aMEC -Col or ant s

ar gent i ques

Mi s eenév i denc eennoi rde fibr esder ét i cul i ne( c oupede r at e)

-

Col or at i onàl ’ or c éi ne

Mi s eenév i denc ede fi br esél ast i ques

• Col or at i onshi st oenz ymol oi ques

•Dét ect i on

d’ enz ymesspéci fiques

Onf ai tt r emperl acoupe dansun s ubs t r atpour obs er v erl epr odui td’ une r éac t i onenz y mat i que

• Col or at i onsI mmunohi st ochi mi ques

•Dét ect i on

pardesmol écul es

col or ées

ant i c or pspour pr és enc ede

Onut i l i s edes dét ec t erl a mol éc ul esr ec onnues

di agnos t i c

Ut i l i s édansl e t umor al

•Dét ect i on

pardesant i cor ps fluor escent s

Obs er v at i onenmi c r os c opi eàfl uor es c enc e ouc onf oc al e. l amol éc ul ec i bl éeappar aî tenr ougeen pér i phér i edel acel l ul e

Remar que: Pourunmêmepr él èv ementonpeutr éal i s erpl us i eur sc ol or at i onsenf onc t i ondec eque l ’ onr ec her c heoudec equel ’ onsouhai t emet t r eenévi denc e

14

Pl usi eur scol or at i onss ontcompl ément ai r esetper met t entder egr ouperdi ffér ent s i nf or mat i onsàpar t i rd’ unmêmepr él èv ement .

Ex empl es urune couped’ ar t èr e Tr i c hr omede Mas s on Col or at i onà l ’ or c éi ne

Surl acoupedegauc he:l esc el l ul esdesnoy auxsontv i s i bl es( br un/ r ouge) ,l esfi br esde c ol l agèneappar ai ss entenbl eu,pasdemi s eenév i denc es péci fiquedesfi br esél as t i ques . Surl acoupededr oi t e:Seul esl esfibr esél as t i quess ontvi s i bl esenr ougev i f ,l acol or at i o nemetpasenév i denc el esc el l ul esetl esfi br esdec ol l agène. =>c ompl ément ar i t é

I I I-Pr épar at i onàl ’ obser v at i onetàl ’ i nt er pr ét at i on desobser v at i ons 1)l esdi ffér ent sél ément squi composentl emi c r os cope

Dubasv er sl ehaut • Unl umi èr econdensées url ’ éc hant i l l ongr âc eàuncondenseur .Laquant i t é

del umi èr equiar r i v es url ’ éc hant i l l ones tr égl éeparl edi aphr agme( En hi s t ol ogi e,l edi aphr agmees touv er tàf ondl apl upar tdut emps) • L al amedev er r ees tdépos éeauni v eaud’ unepl at i ne,quipeutêt r edépl ac ée

en( x , y ) . • L al umi èr e,apr èsav oi rt r av er s él ’ éc hant i l l onpas s eparl esobj ect i f s,de

di ffér ent sgr os s i s s ement s ,s el onl acoul eurdel abague,ondi st i ngue: ☛Rouge:x4(x40i nfine) 15

☛Jaune:x10(x100i nfi ne) ☛Ver t e:x 20(x200i nfine) ☛Bl eue:x 40(x400i nfi ne)

• Oc ul ai r e,av ecuneaut r el ent i l l equigr os s i tenx10

=>gr os s i s sementfinal:gr os si s s ementobj ec t i fxgr os s i s s ementoc ul ai r e • Vi smacr omét r i queetmi cr omét r i quepourl ami s eaupoi nt

-Obj ect i fx4adapt épourunpr él èv ementdegr andet ai l l eafi nd’ effect uerun r epér ageaupr éal abl ed’ uneobs er v at i onàunpl usf or tobj ect i f .Vi s i onde di ffér ent esc ouc hes .

-Obj ect i fx10pourv oi runpeupl usdedét ai l s -Obj ect i f sx20etx40:dét ai l sdess t r uct ur esetdescel l ul esàf or tgr ossi s s ement . l epl usf or tgr oss i ss ementn’ es tpast ouj our sl emei l l eur .

-Possi bi l i t éd’ obs er v at i onàl ’ obj ect i fX100:néc es s i t éd’ ut i l i s erdel ’ hui l eà i mmer s i onent r el al ameetl ’ obj ec t i f .Tousl esmi cr os c opesn’ enpos s èdentpas mai spos s i bi l i t éd’ enaj out erun.

2)I nt er pr ét at i ondesi mages

Bas éenot ammentsurl ar econnai ss ancedesf or mesetdescoul eur sai ns iques ur l ’ or gani s at i ondesdi ffér ent sél ément sent r eeux . Di fficul t éd’ i nt er pr ét at i onl i éeauxi nc i dencesdecoupesetàd’ év ent uel sar t éf act sd pr épar at i onhi s t ol ogi que. T ouj our sav oi renmémoi r equel ’ onobs er v eenmi c r os c opi eunec oupeen2Dal or sque c et t ecoupepr ov i entd’ unens embl eor gani s éen3D.

• Les

de

i nci dences coupes

• Ga ffeaudi ffér ent est ubul ur es!EX:Dansl enéphr on( =uni t éf onc t i onel l edu

r ei n,>1M parr ei n,sor t esdet ubes ) •Le sar t éf act sdecoupe • Dé fi ni t i on:Effetar t i fic i elc r ééparl at ec hni quedepr épar at i onhi st ol ogi que=>

génér at i ond’ unei magear t i fic i el l e.

•Prél èvement:pi nces,ci s eaux , … •Fi xat i on:r et ar ddefi x at i on,er r eurdos age •I ncl usi on:v i desar t i fic i el s •Coupe:r as oi r ,er r eurd’ épai ss eur •Col l age:déc ol l ement ,pl i s •Mont age:Bul l esd’ ai r •Col or at i on:dépôt s ,t âc hes ,…. • Nep asc onf ondr eunar t éf actav ecunez onepat hol ogi que.Ex:déc ol l ementde

r ét i ne.

17...