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Universidad Central del Ecuador Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Bacteriología y Micología Nombres: Johana Núñez; Berenice Rosero Curso: Tercero “A” Fecha: 25 de Octubre del 2017 Tema: PRUEBA DE CAMP (tipos de hemólisis) y Pruebas API (Fundamentos bioquímicos, procedimientos, resultados, ejemplos). La prueba CAMP ha sido el nombre de Christie, Atkins y Munch-Peterson, quien la describió en 1944. Esta prueba se utiliza para la identificación de estreptococos del grupo B (Streptococcus agalactiae), mediante hemólisis. La reacción de hemólisis junto con otra de las características fisiológicas es suficiente para una identificación clínica presuntiva.Índice Analítico de Perfil (Analytical Profile Index) API, fue inventado en 1970 en los Estados Unidos por Pierre Janin para Enterobacteriaceae y otras bacterias Gram (-). Rápido, eficaz y de permitir realizar numerosas pruebas a la vez .Sustratos deshidratados, tiras de papel de filtro impregnadas en reactivos o pequeños compartimentos con medios listos para sembrar .Consta de 21 tests bioquímicos y se emplean códigos numéricos para la interpretación de resultados. . (Stanier, 2003) Test de Camp CAMP (Christie- Atkins- Munch-Peterson test) Fundamento El factor CAMP actúa sinérgicamente con la hemolisina beta producida por S. aureus para inducir una mayor hemólisis de los glóbulos rojos de oveja o de los bóvidos, pero no humana, de conejo o caballo glóbulos rojos. Una cepa hemolítica conocida de S. aureus (ATCC 25923) se raya en una línea recta a través del centro de la placa de agar sangre de carnero. Inóculo de prueba se raya en una línea recta (2-3 cms de longitud) perpendicular a S.aureus racha, pero sin tocarlo. Un grupo conocido de Streptococcus B también puede ser rayado de manera similar como un control positivo. Cuatro y cinco organismos de prueba se pueden probar por placa. La placa se incuba a 37 º C durante 18-24 horas. Una prueba positiva para el factor CAMP aparece como hemólisis "punta de flecha" entre la unión del crecimiento de S. aureus y Streptococcus del grupo B. No hay mayor o "punta de flecha" hemólisis si el aislado de prueba no es Streptococcus del grupo B.

Procedimiento En placa de agar sangre ovina sembrar una estría de la cepa de S. aureus y perpendicularmente a ésta con distancia 4 mm de tal manera que cuando se desarrollen las colonias estas no se toquen sembrar la cepa de estreptococo en estudio. Incubar 24 horas a 35ºC en aerobiosis (en CO2 aumentan falsos positivos). En la misma placa pueden sembrarse estreptococos del grupo A como control negativo.

Tipos de hemolisis Después del crecimiento de estreptococos en agar con sangre de oveja se observan tres tipos de reacción de hemólisis beta-hemolíticos: son aquellos que producen una hemólisis total de los glóbulos rojos, observándose como un halo transparente alrededor de las colonias. alfa-hemolíticos: son aquellos que producen hemólisis parcial, la cual se observa como un halo con tonalidad verdosa alrededor de las colonias debido a la liberación de un producto de degradación de la hemoglobina llamado bili-verdina. gamma-hemolíticos: son aquellos que no producen hemólisis sobre el agar sangre. Por lo tanto la reacción de hemólisis es importante para la clasificación de los estreptococos. La reacción de hemólisis junto con otra de las características fisiológicas es suficiente para una identificación clínica presuntiva.

PRUEBAS API INTRODUCCIÓN Los sistemas miniaturizados API son métodos rápidos que permiten la identificación de microorganismos a través de la realización de diferentes pruebas bioquímicas. Estos sistemas consisten en un dispositivo de plástico con varios microtubos que contienen diferentes medios de cultivo deshidratados o diferentes sustratos de enzimas de acuerdo al tipo de prueba que se requiere montar. (Desconocido, 2010)Entre algunas de las pruebas bioquímicas que pueden realizarse con estos sistemas están las pruebas de fermentación de carbohidratos, la determinación de la producción de H2S, la determinación de la hidrólisis de la gelatina, entre otras. En el mercado existe una variedad de galerías para ser utilizadas en la identificación de diferentes tipos de microorganismos, por ello aunque todos estos sistemas tienen el mismo fundamento, difieren en el número y tipo de pruebas que permiten realizar, ya que su

selección está directamente relacionada con la actividad metabólica del género al que pertenece el microorganismo a identificar. FUNDAMENTO Los ensayos bioquímicos tradicionalmente utilizados, llamadas pruebas bioquímicas convencionales, generalmente determinan la actividad de una vía metabólica (conjunto de reacciones químicas) a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer transforma o no. (Dominguez, 2010) Las pruebas o ensayos bioquímicos, son pruebas simples que se han desarrollado para demostrar en forma clara una determinada característica bioquímica como presencia o ausencia de una determinada actividad enzimática, grupo de enzimas o determinada vía metabólica, crecimiento a una determinada temperatura, crecimiento en presencia de inhibidores, etc. Estos sistemas consisten en un dispositivo de plástico con varios microtubos que contienen diferentes medios de cultivo deshidratados o diferentes sustratos de enzimas de acuerdo al tipo de prueba que se requiere montar. (Desconocido, 2010) PROCEDIMIENTO Preparación de la suspensión bacteriana: Tomar una colonia bien aislada de cada microorganismo y resuspenderla homogéneamente en 5 mL de solución salina (1% de NaCl) o 5 mL de agua estéril. (Dominguez, 2010)

Siembra de la galería API: Cada pocillo tiene un tubo y una cúpula (parte aerobia). Llenar con la suspensión de bacterias los tubos, no la cúpula, de todos los pocillos. Llenar la cúpula de los pocillos CIT , VP, GEL con la suspensión de bacterias. (Salamanca., 2011)

Tapar con parafina líquida: Llenar con parafina las cúpulas de los pocillos ADH, LDC, ODC, URE, H2S para obtener anaerobiosis. (Salamanca., 2011)

Poner la galería en su propia cámara húmeda de incubación: Poner la tira en su propia cámara húmeda de incubación. Previamente poner agua en los alvéolos de la cámara para proporcionar una atmósfera húmeda durante la incubación.

Incubación en estufa: Incubar a 37 °C durante 18-24 h.

Anotar los resultados inmediatos: La lectura de los resultados se lleva a cabo por comparación de los colores de cada pocillo con los de las tablas de lectura.

Interpretación

(Salamanca., 2011) Perfil numérico e identificación: Del conjunto de resultados se obtiene un perfil numérico de siete cifras. Los pocillos están separados en grupos de tres. Para poder cifrar e identificar se toma en cuenta las siguientes condiciones: 1. Si la reacción es negativa se pone 0. 2. Si la reacción es positiva se pone: 1 si es el primer pocillo de un triplete, 2 si es el segundo, 4 si es el tercero. 3. Se suman los valores de cada triplete y se obtiene un código de 7 cifras 4. Con este código se busca en la tabla de identificación la especie de que se trata.

PERFIL NUMÉRICO

0104140

Shigella flexneri

0104452

Salmonella paratyphi A

0104504

Pasteurella multocida

0104521

Yersinia enterocolitica

0140004

Pasteurella multocida

0144042

Shigella boydii

0206042

Acinetobacter calcoaceticus

0210004

Achromobacter sp.

0210004

Alcaligenes faecalis

0210004

Alcaligenes sp.

0314000

Proteus mirabilis

0504512

Salmonella paratyphi A

(Salamanca., 2011)

EJEMPLOS DE PRUEBAS API API 20E Permite la identificación de microorganismos pertenecientes al grupo de las enterobacterias y de otros bacilos gram negativos. Es una galería conformada por 20 microtubos. (Desconocido, 2010) Cuando se utiliza esta galería las cartas de colores correspondientes a las pruebas negativas y positivas son las siguientes:

API 20 NE Permite la identificación de bacilos gram negativos no pertenecientes al grupo de las enterobacterias como por ejemplo Pseudomonas, Acinetobacter, Flavobacterium, Moraxella, Vibrio, Aeromonas, entre otros. Es una galería conformada por 20 microtubos. (Desconocido, 2010) Cuando se utiliza esta galería las cartas de colores correspondientes a las pruebas negativas y positivas son las siguientes:

Resumen: •

Las pruebas API son muy rápidas y eficaces. Existen varios tipos de pruebas API como son la API 20E. Tiene la ventaja de realizar varias pruebas al mismo tiempo y determinar la bacteria de la cual se trata mediante el perfil numérico que nos da al final de la prueba y de la suma de los pocillos de cada triplete. El color varía dependiendo de la prueba, enzima sobre la cual se da la reacción y si es positiva o negativa.

•

Esta prueba se utiliza para la identificación presuntiva de estreptococos del grupo B , el factor CAMP actúa con la hemolisina beta producida por S. aureus para inducir una mayor hemólisis de los glóbulos rojos de oveja , Un resultado positivo para el factor CAMP aparece como hemólisis en forma de punta de flecha entre la unión del crecimiento de S. aureus y Streptococcus del grupo B, y no hay esta punta de flecha o hemólisis si el aislado de prueba no es Streptococcus del grupo B .

BIBLIOGRAFÍA

Gerard J. Tortora, B. R. (2007). Introducción a la microbiología. Ed. Médica Panamericana. Obtenido de https://books.google.es/books?id=Nxb3iETuwpIC&dq=factores+de+crecimiento+b acteriano&hl=es&source=gbs_navlinks_s Joklik WK, W. H. (1994). Microbiología. Lima: Panamericana. Stanier, R. Y. (2003). Microbiología (ilustrada ed.). (J. R. Villanueva, Trad.) Reverte. Obtenido de https://books.google.es/books?id=2u6Q2XCMDgC&dq=crecimiento+bacteriano&hl=es&source=gbs_navlinks_s

Desconocido. (2010). SISTEMAS MINIATURIZADOS API. Recuperado el 13 de Noviembre de 2017, de SISTEMAS MINIATURIZADOS API: http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_Siste masAPI.pdf Dominguez. (2010). Sistemas de identificación multipruebas. Recuperado el 13 de Noviembre de 2017, de Sistemas de identificación multipruebas: http://perso.wanadoo.es/microdominguez/API.htm MARTINEZ, H. A. (2004). PROPUESTA DE GUÍA DE APLICACIÓN DE TÉCNICAS DE . EL SALVADOR: U.Salvador.

Salamanca., U. d. (2011). Batería de pruebas API20E. Recuperado el 13 de Noviembre de 2017, de Batería de pruebas API20E: http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/LabV/API/api.ht ml

AYUDAS NEMOTÉCNICAS

PREGUNTAS: De cuántos test bioquímicos consta la prueba API a) 22 b) 24 c) 30 d) 21 ¿Qué bacterias se pueden identificar con las pruebas API? a) Enterobacteriaceae b) Bacterias Gram (-) c) Bacterias Gram (+) d) A y b son correctas e) Ninguna Los beta-hemolíticos producen: a) hemólisis parcial b) no producen hemólisis. c) hemólisis total. d) Ninguna de las anteriores. e) Todas las anteriores El S. aureus para inducir una mayor hemólisis produce : a) hemolisina beta . b) bili-verdina. c) toxina alfa . d) Ninguna de las anteriores. e) Todas las anteriores....