2020.2. Guia de Practica Semana 7. Golgi-Lisosomas-Fagocitosis PDF

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Biología CelularGuía de Prácticade LaboratorioAlumno:Semestre: Ciclo:Grupo: Turno:Docente:Trujillo – Perú2020PRÁCTICA N° 07Temática: Aparato de Golgi y Lisosomas.Sesión: 07 Tiempo estimado de desarrollo: 03 horas. Fecha:Capacidad: Reconoce el aparato de Golgi y lisosomas en observaciones histológica...

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Escuela de Medicina

Biología Celular

Guía de Práctica de Laboratorio

Alumno: Semestre:

Ciclo:

Grupo:

Turno: Docente:

Trujillo – Perú 2020

Escuela de Medicina

PRÁCTICA N° 07 Temática: Aparato de Golgi y Lisosomas. Sesión: 07

Tiempo estimado de desarrollo: 03 horas.

Fecha:

Capacidad: Reconoce el aparato de Golgi y lisosomas en observaciones histológicas de preparados histológicos, e identifica el proceso de glicosilación, haciendo uso de las TICs, ejerciendo un pensamiento crítico y reflexivo.

I.

INTRODUCCIÓN: El aparato de Golgi es un orgánulo presente en todas las células eucariotas. Pertenece al sistema de endomembranas. Está formado por unos 80 dictiosomas (dependiendo del tipo de célula), y estos dictiosomas están compuestos por 40 o 60 cisternas (sáculos) aplanadas rodeados de membrana que se encuentran apilados unos encima de otros, y cuya función es completar la fabricación de algunas proteínas. Funciona como una planta empaquetadora, modificando vesículas del retículo endoplasmático rugoso. El material nuevo de las membranas se forma en varias cisternas del aparato de Golgi. Dentro de las funciones que posee el aparato de Golgi se encuentran la glicosilación de proteínas, selección, destinación, glicosilación de lípidos, almacenamiento y distribución de lisosomas, al igual que los peroxisomas, que son vesículas de secreción de sustancias. Lisosomas. Orgánulos relativamente grandes, formados por el retículo endoplasmático rugoso (RER) y luego empaquetadas por el complejo de Golgi, que contienen enzimas hidrolíticas y proteolíticas que sirven para digerir los materiales de origen externo (heterofagia) o interno (autofagia) que llegan a ellos. Es decir, se encargan de la digestión celular. Tienen una estructura muy sencilla, "semejantes" a vacuolas, rodeados solamente por una membrana, contienen gran cantidad de enzimas digestivas que degradan todas las moléculas inservibles para la célula.

II.

CONOCIMIENTOS PREVIOS − − − − − − −

Medidas de bioseguridad. Aparato de Golgi Modificaciones post-traduccionales de las proteínas. Endosomas. Lisosomas. Vía secretora constitutiva y regulada. Endocitosis: Pinocitosis, Fagocitosis.

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III.

MATERIAL − − − − − −

Mandil. Imagen de corte histológico de epidídimo. Imágenes de extensión de bola de edema y sangre. Ordenador PC. Proyector multimedia. Guía de prácticas.

IV.

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

4.1.

Procedimiento: Reconocimiento de aparato de Golgi. - Observar las imágenes histológicas y reconocer el aparato de Golgi. - Explicar las características de lo que se observa.

Imagen 1. Corte histológico de epidídimo de rata. Coloración Hematoxilina-Eosina (100X)

Imagen 2. Aparato de Golgi en Corte histológico de epidídimo de rata. Coloración Impregnación Argéntica (1000X)

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Reconocimiento de lisosomas. - Observar la imagen y reconocer los lisosomas en los histiocitos o Macrófagos. - Explicar las características de lo que se observa.

Imagen 3. Extendido de bola de edema. Coloración Azul de Tripán. (1000X).

Reconocimiento de fagocitosis. - Observar la imagen y reconocer el proceso de fagocitosis. - Explicar las características de lo que se observa.

Imagen 4. Células de Kupffer en corte histológico de hígado. Coloración Tinta China. (1000X).

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Reconocimiento de fagocitosis. - Observar la imagen y reconocer el proceso de fagocitosis. - Explicar las características de lo que se observa.

Imagen 5. Extendido de sangre periférica con suspensión de bacterias. Coloración Wright (1000X). 4.2.

Resultados: análisis e interpretación Reconocimiento de aparato de Golgi.

Aparato de Golgi.

Interpretación: En esta muestra de un Corte histológico de epidídimo de rata con coloración de Impregnación Argéntica y con aumento de 1000x, observamos el núcleo de la célula y el aparato de Golgi que es el más desarrollado en este tipo de células.

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Reconocimiento de Macrófagos.

Macrófagos

Interpretación: En la muestra de Extendido de bola de edema con coloración Azul de Tripán y aumento de 1000x, podemos observar a los macrófagos Reconocimiento de Células de Kupffer.

Célula de Kupffer

Interpretación: En la muestra de Células de Kupffer en corte histológico de hígado con coloración Tinta China y aumento de 1000x, observamos y distinguimos las células de Kupffer por la coloración negra y oscura que toma, propia de la tinta china.

Reconocimiento de Células de fagocitosis en sangre periférica – 5 –

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Macrofago fagocitando a la bacteria

Interpretación: En la muestra en corte histológico de extendido de sangre periférica podemos observar a los macrófagos fagocitando a la bacteria, a través del aumento en 1000 y en coloración Wright.

V.

PRECAUCIONES Y BIOSEGURIDAD 1. Ingresar al laboratorio con su guardapolvo. Esta ropa protectora deberá sacarse inmediatamente antes de abandonar el laboratorio. 2. Es obligatorio la utilización de guardapolvo que le cubra brazos, piernas y torso; deben portar además guantes de látex y mascarilla. 3. Está prohibido el uso de sandalias, pantalones y faldas cortos, gorras, bufandas y otros accesorios en el laboratorio. La persona inapropiadamente vestida para trabajar en el laboratorio no podrá ingresar. 4. Toda persona con cabello largo, deberá sujetarlo y recogerlo.

VI.

CONCLUSIONES

Podemos concluir que gracias a este experimento podemos observar al aparato de Golgi, lisosomas y fagocitos en diferentes tejidos por el aumento y por la coloración que se usa. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Wang P, Mazrier H, Caverly J, Raj K, Giger U, Una variante sin sentido de GNPTAB se asocia con mucolipidosis II felina (enfermedad de células I), PubMed, Diciembre 2018. Disponible en:

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30591066/ Navarro E, Blasco A, Gutierrez L, Luz M, Cancho-Candela R, Lázaro P, Guía de práctica clínica para el tratamiento del síndrome de Hunter, ElSevier, Noviembre 2016. Disponible en:

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0025775313005320

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https://www.clinicalkey.es/#!/content/book/3-s2.0B9788491135500000328?scrollTo=%23hl0003591 ANEXOS: PREGUNTAS DE APLICACIÓN 1) ¿Qué procesos ocurren en la región cis, medial y trans del aparato de Golgi? Cara cis: ocurre el proceso de formación, aquí llegan las vesículas provenientes del Retículo Endoplasmático, además, ocurre el proceso de glucosilación, sulfatación y fosforilación. Cara trans: ocurre el proceso de maduración, aquí se forman las vesículas que sacan los productos que sintetiza el aparato de Golgi. 2) ¿Cuál es la diferencia entre N-glicosilación y O-glicosilación de las proteínas? La síntesis de oligosacáridos que se unen por enlaces N-glucosídicos, comienzan en el RER y termina en el complejo de Golgi, participa la enzima llamada glicosiltransferas que toman monosacáridos de moléculas donantes para la transferencia a la cadena oligosacárido en crecimiento. La síntesis se cumple en la cavidad del complejo del Golgi por el agregado, mediante glicosiltransferas especificas de sucesivos monosacáridos y se ligan a una serina o una treonina. 3) Esquematice en un cuadro las características de la endocitosis y la exocitosis. C A R A C T E R I S T I C A S

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ENDOCITOSIS Proceso en el que la célula ingiere diferentes clases de moléculas. Tiene 3 tipos. FAGOCITOSIS: ingesta de partículas sólidas relativamente grandes. ENDOCITOSIS MEDIADA POR RECEPTORES: proceso selectivo PINOCITOSIS: proceso de ingerir líquidos y moléculas sin selección.

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EXOCITOSIS Proceso de secreción celular, en el cual expulsan moléculas grandes a través de vesículas. Tiene 2 tipos. CONSTITUTIVAS: liberación de componentes a la matriz extracelular o transportar proteínas sintetizadas. REGULADA: secreción de moléculas y expulsión al espacio extracelular.

4) ¿Cómo se forman los lisosomas y cuáles son sus funciones? Organelos creados por el Retículo endoplasmático rugoso y producidos por el aparato de Golgi. Su principal función es que se encarga de la digestión celular, asimismo, digieren lípidos, proteínas, degradan ácidos nucleicos, materia intracelular y desintegración por la muerte celular. – 7 –

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5) ¿Qué tipos de enzimas contienen los lisosomas? Contiene enzimas lisosomales o hidrolíticas como las lipasas, glucosidasas, proteasas y nucleasas 6) ¿Cómo se produce la fagocitosis? La membrana plasmática emite extensiones llamadas seudópodos que envuelven al material por ingerir, lo introducen y forman una vesícula llamada fagosoma que se desprende de la membrana para incorporarse al citosol, luego el fagosoma se fusiona con el lisosoma cuyas enzimas degradan el material fagocitado, la formación es llamada fagolisosoma. 7) Explique las esfingolipidosis (Enfermedad de Tay Sachs), Mucopolisacaridosis (Enfermedad de Hunter) y Mucolipidosis (I-cell disease) 1. La enfermedad de Tay-Sachs es un trastorno del almacenamiento lisosómico autosómico recesivo causado por la deficiencia de la enzima hexosaminidasa A. Las mutaciones de HEXA consisten en inserciones, deleciones, zona de procesamiento alternativo, mutaciones sin sentido y con sentido erróneo. Estas mutaciones afectan al procesamiento, el ensamblaje o la actividad de la enzima. Esto provoca un grupo de trastornos neurodegenerativos causados por el almacenamiento intralisosómico del gangliósido glucoesfingolípido GM 2 específico. La enfermedad de Tay-Sachs clásica se caracteriza por la pérdida de habilidades motoras que comienza entre los 3 y los 5 meses de edad, con neurodegeneración progresiva que incluye crisis epilépticas, ceguera e incapacitación total final, y el fallecimiento habitualmente antes de los 4 años. 2. El síndrome de Hunter (SH), o mucopolisacaridosis tipo ii, es una enfermedad producida por la deficiencia o ausencia de la enzima iduronato-2-sulfatasa (I2S) debida a mutaciones en el gen IDS. La deficiencia de la I2S ocasiona un bloqueo en el proceso de degradación de glucosaminoglucanos (GAG) en los lisosomas citoplasmáticos, lo que da lugar a su acumulación en las células. Esto provoca una alteración celular generalizada, y una eliminación aumentada de estos GAG. 3. La mucolipidosis II (ML II; enfermedad de las células I) es causada por una deficiencia de Nacetilglucosamina-1-fosfotransferasa (GNPTAB; EC 2.7.8.17), que conduce a una falla en la internalización de las hidrolasas ácidas en los lisosomas para el catabolismo adecuado de diversas sustancias. Esta es una enfermedad de almacenamiento lisosómico autosómica recesiva y causa neuropatía progresiva severa y disfunción oculoesquelética en humanos (OMIM 252500)

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