Bitacora colesterol - Nota: 10 PDF

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Instituto Politécnico NacionalEscuela Nacional de Ciencia BiológicasPractica No 8 separación de fosfolípidos por cromatografía en capa fina y determinación de colesterol en la yema de huevoIntroducción. Los lípidos biológicos constituyen un grupo químicamente diverso de compuestos cuya característic...

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Instituto Politécnico Nacional Escuela Nacional de Ciencia Biológicas Practica No 8 separación de fosfolípidos por cromatografía en capa fina y determinación de colesterol en la yema de huevo Introducción. Los lípidos biológicos constituyen un grupo químicamente diverso de compuestos cuya características común y definitoria es su insolubilidad en agua. En muchos organismos, las grasas y los aceites son la forma principal de almacenamiento energético mientras que los fosfolípidos y los esteroles constituyen los principales elementos estructurales de las membranas biológicas. Los esteroles son lípidos estructurarles que se hallan presentes en la membrana de la mayoría de las células eucariontes. La estructura característica de este quinto grupo de lípidos de membrana es la del núcleo esteroide, que consiste en cuatri anillos fisionados, tres de ellos con seis carbonos y uno con cinco. El colesterol es el principal esterol en los tejidos animales y es anfipático, con un grupo de cabeza polar (el grupo hidroxilo de C-3) y un cuerpo hidrocarbonado apolar la cual es casi tan larga como un acido graso de 16 carbonos en su forma extendida. Forma un gran papel como constituyente de las membranas, los esteroles son los percusores de diversos productos con actividades biológicas específicas. Las hormonas esteroideas. Objetivos. • • •

Aplicar la técnica de cromatografía en capa fina para la separación de los fosfolípidos de la yema de huevo. Discutir las ventajas de la técnica de separación respecto a la cromatografía en papel. Determinar la concentración de colesterol en la yema de huevo, por el método de LiebermanBurchard.

Diagrama de flujo. 1.-Extracción de los lípidos de la yema de huevo. Agitar por 20 minutos en baño de hielo y filtra

Mezclar media yema de hubo con 15mL de cloroformo-metanol (2:1)

Mezclar el filtrado con 5mL de HCI al 0.1M y agitar

Dejar reposar y centrifugar a 2500rpm por 5min

Colocar a 1 cm del extremo inferior y debidamente separadas, 2 µL de dos muestras diferentes de extractos de lípidos.

Desechar fase acuosa utilizar fase orgánica

utilizando como fase móvil una mezcla de cloroformo-metanolácido-acético-agua (68:25:8:4).

Instituto Politécnico Nacional Escuela Nacional de Ciencia Biológicas 1.1.-Revelado de los cromatogramas.

calentar la placa a 100o C durante

Rociar una placa con el reactivo de

2 a 3 minutos en el horno). Al

bismuto para revelar fosfolípidos

terminar, se revelarán manchas

que contienen colina, se verán de

de color violeta.

color amarillo-naranja. Rociar una placa con el Rociar una placa con el

Colocar una placa en una cámara con

reactivo de ninhidrina

reactivo de molibdato para

cristales de yodo para lípidos que tengan

para revelar fosfolípidos

fosfolípidos en general. Se

dobles enlaces en su molécula. se verán

que contienen grupos.

verán de color azul.

de color café.

2.-Determinación de colesterol por el método de lieberman-burchard Estándar de colesterol 80µg/mL Cloroformo mL Extractos de lípidos µg/mL Anhidrido acetico mL

1.25mL 0.40 mL

0.25 mL

0.5 mL

0.75 mL

1mL

0.75mL

0.5mL

0mL

0mL

0mL

0.40 mL 1 mL

1.25 mL

0.25mL

0mL

0mL

0mL

0.40 mL

0.40 mL

0.40 mL

0 mL

agitar

0.40 mL

0.40 mL

1.25mL 5 mL

50 µL de H2SO4 concentrado Incubar x 5 minutos y agitar Observar absorbancia a 640nm dentro de los 20 min

Bibliografía. Nelson, D.L., Cox, M.M. 2009. Lehninger: Principios de Bioquímica. 5a edición. Omega, pag 345-355...