Diag Flujo y reseña del metodo de Miller PDF

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Summary

El docente nos pidió elaborar una muy breve reseña de dicho método y elaborar un diagrama de flujo del mismo, se elaboro el trabajo con la información obtenida de un articulo proporcionado por el docente....

Description

Diagrama de flujo del método de Miller

Lisis celular

Digestion de proteinas

-Se suspenden las células nucleadas obtenidas con EDTA o ACD en tubos de centrifugación. -Adicionar 3 ml de tampón de lisis de núcleos (Tris-HCl 10 mM, NaCl 400 mM y 2 mM y Na2EDTA 2 mM, pH 8,2)

-Al terminar el proceso de lisado celular se llevo a cabo un proceso de digestion durante la noche a 37ºC con 0,2 ml de SDS al 10% y 0,5 ml de una solución de proteasa K

Método de Miller

Este método implica la salazón de las proteínas celulares mediante deshidratación y precipitación con una solución saturada de NaCl.

1 ml de NaCl

Agitar vigorosamente

Resuspensión de DNA

Cuantificación de DNA

-Dejar que el DNA se disuelva en la solución durante 2 horas a 37 ° C antes de su cuantificación

-Añadir 2 volúmenes de etanol absoluto a temperatura ambiente, se invirtió el tubo hasta precipitar el DNA. -Retirar las hebras de ADN precipitadas se retiraron con una espátula o pipeta de plástico -Transferir a un tubo de microcentrífuga de 1,5 ml que contenía 100-200 ul de tampón TE

Precipitación

-Añadir 1 ml de NaCl y agitar vigorosamente por 15 seg -Centrifugar a 2500 rpm durante 15 minutos. -El pellet resultante se deja sedimentar y el material genético se pasará a otro tubo por decantación.

Reseña del método de Miller Este método llegó a revolucionar la forma de extraer DNA debido a que puede sustituir los métodos de desproteinización en los cuales se utilizaban peligrosos solventes orgánicos como fenol e isocloroformo, esto es debido a que es un procedimiento más sencillo y seguro el cual consiste en la expulsión salina de las proteínas celulares mediante deshidratación y precipitación con una solución saturada de NaCl. Para realizar este experimento se utilizaron células nucleadas obtenidas de sangre disuelta en un anticoagulante, posteriormente se le añade una solución tampón de lisis de núcleos una vez terminado este proceso, se lleva a centrifugación para precipitar las proteínas y dejar el DNA en suspensión para posteriormente decantarse hacia otro tubo, se le añaden dos volúmenes de etanol y se agita para precipitar el DNA el cual será retirado y llevado a un tubo de microcentrífuga que contiene una solución tampón, por último se deja disolver el DNA en la solución y se cuantifica Materia: Ingeniería genética...