Title | Ejercicios HPLC |
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Course | Bioquímica |
Institution | Universidad Nacional Autónoma de México |
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ejercicios a resolver sobre HPLC...
Ejercicios Parámetros cromatográficos Química Analítica instrumental I y II Tania Rojo Portillo 1. Se requiere analizar una mezcla de dos compuestos A y B en una relación 1:1, se inyectaron 20uL de una disolución en un sistema cromatográfico. El análisis se realizó isotérmicamente a tres temperaturas. Condiciones cromatográficas de análisis: Analito
Columna
Fase móvil
AyB
C18(150x4.6 mm, d.i. 4μm), Synergi Fusion-RP 80
Fase A HClO4 10-2 M
Longitud de onda
Flujo (mL/min)
Modo de elución
220
1
Isocratico
Fase B AcCN. Detector UV-Vis Temperatura 20 C
t0 (min) tr (min) 0.32 0.610 0.930
Area 559.7 9 511.8 6
W1/2 (min) 0.016 0.024
Temperatura 30 C
t0 (min) tr (min) 0.32 0.530 0.740
Area 559.7 0 515.0 9
W1/2 (min) 0.012 0.016
Temperatura 40 C
t0 (min) tr (min) 0.32 0.470 0.580
Area 558.9 9 514.5 5
W1/2 (min) 0.011 0.014
a) Utilizando los resultados experimentales de cada temperatura de trabajo, calcular el factor de retención (k`), la eficiencia (N), la selectividad (α), la Resolución (Rs). Completa la siguiente tabla Temperatura del Horno 20C 30C 40C
Compuesto
k`
N
α
Rs
A B A B A B
b) Con base a los resultados de la tabla anterior responde: 1) ¿Cómo se modifican los parámetros cromatográficos al variar la temperatura?
2) ¿Qué significado tienen estos resultados en la separación cromatográfica?
3) ¿En qué temperatura de horno seria adecuada para realizar el análisis cromatográfico? Justifica tu respuesta. 2. Las sustancias A y B tienen tiempos de retención de 16.40 y de 17.63 minutos, respectivamente, en una columna de 30cm. Una especie que no es retenida pasa por la columna en 1.30 min. Las anchuras de pico (en la base) para A y para B son 1.11 y 1.21min, respectivamente. Calcule: a) La resolución de la columna b) El número de platos promedio de la columna c) La altura del plato d) La longitud de la columna necesaria para conseguir una resolución de 1.5 e) El tiempo necesario para que la sustancia B eluya en la columna que da un valor de Rs de 1.5 f) La altura de plato necesaria para obtener una resolución de 1.5 mediante la columna original de 30cm y en el tiempo que se da en un principio
3. Los siguientes datos corresponden a una columna para cromatografía de líquidos:
Calcule a) Numero de platos teóricos para cada pico b) Altura de plato teórico de la columna c) Factor de retención d) La resolución
e) Selectividad...