Informe N° 5 = Determinación DE Triglicéridos PDF

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Práctica de determinación de triglicéridos...

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“DETERMINACIÓN DE TRIACILGLICÉRIDOS”

I.

INFORMACIÓN DE LA PRÁCTICA  Muestras utilizadas: - Muestras de sangre de 3 personas en ayunas - Tubos de ensayo - Pipetas graduadas - Estándar: glicerol equivalente a 200 mg/dl de triacilglicéridos - Reactivo de trabajo - Espectrofotómetro  Características: - Muestras de sangre: Necesariamente debe ser en ayunas debido a la disminución de la acción de las moléculas de la sangre. Al centrifugar esta muestra debe ser a temperatura ambiente para mantener la estabilidad de los triglicéridos.

 Objetivos: - Aprender a obtener muestras y procesarlas para poder cuantificar la concentración de triglicéridos en sangre.

- Ver qué factores pueden influir en la cantidad de triglicéridos encontrados en las muestras de sangre.

II. DETERMINACIONES REALIZADAS a) Determinación de la concentración de triglicéridos en la muestra Primero se tomó muestras de sangre de 3 compañeros en ayunas, luego estas muestras se procedieron a centrifugar a 3000 rpm durante 15 minutos, para así obtener el suero de cada una de las muestras. Y por último se procedió a colocar en 5 tubos de ensayo lo que indicaba la siguiente tabla:

Tabla 1: Procedimiento para la determinación de triacilglicéridos.

Reactivos

Blan

Estánd

Muest

Estándar (uL) --10 --Muestra (uL) ----10 Reactivo de trabajo (mL) 1.00 1.00 1.00 Mezclar. Incubar 10 minutos en baño de agua a 37 C. *Todas las muestras se llevaron a leer al espectrofotómetro a 520 nm.

b) Nombre de las Biomoléculas, Procesos o Vías Metabólicas relacionadas al experimento. -

Triacilglicéridos: Los triglicéridos son ésteres de glicerol y ácidos grasos que provienen de la dieta o son sintetizados principalmente en el hígado. Los triglicéridos se transportan en el plasma en las lipoproteínas y son utilizados por el tejido adiposo, músculo y otros. Su principal función es suministrar energía a la célula. Se considera ideal tener unos triglicéridos por debajo de 150 mg/dl, y valores superiores a 200 mg/dl constituyen lo que se llama una hipertrigliceridemia, es decir, un exceso de triglicéridos por encima de los límites saludables; esta se considera leve hasta valores de 400 mg/dl, moderada hasta valores de 1.000 mg/dl y grave o severa por encima de esas cifras.

-

Método enzimático: Los triglicéridos incubados con lipoproteinlipasa (LPL) liberan glicerol y ácidos grasos libres. El glicerol es fosforilado por glicerolfosfato deshidrogenasa (GPO) y ATP en presencia de glicerol quinasa (GK) para producir glicerol-3-fosfato (G3P) y adenosina-5-difosfato (ADP). El G3P es entonces convertido a dihidroxiacetona fosfato (DAP) y peróxido de hidrogeno (H2O2) por GPO. Al final, el peróxido de hidrogeno (H2O2) reacciona con 4-Aminoantipirina el ácido 3,5-Dicloro-2-Hidroxi-bencensulfónico para producir por medio de la enzima un coloración dependiendo de la cantidad de triglicéridos presentes en el compuesto.

III. RESULTADOS OBTENIDOS Absorbancia de las muestras: Estándar = 0.358 Muestra 1 (Mayra)= 0.107 Muestra 2 (Luis)= 0.118 Muestra 3 (Danae)= 0.092

Fig. 1: Muestras de la determinación de triglicéridos. De izq. a der: Blanco, Estándar, Muestra 1, Muestra 2 y Muestra 3.

 Determinación de la concentración de triglicéridos: Factor = 200 mg/dL / Abs estándar *Donde 200 mg/dL es un valor cte.

Fc=

200 mg/dL = 558,65 0.358

Triglicéridos mg/dL = Abs muestra * factor Concentración de Muestra 1 (Mayra) = 0,107 x 558,65= 59,77 mg/ dL. Concentración de Muestra 2 (Luis) = 0,118 x 558,65 = 65,92 mg/ dL. Concentración de Muestra 3 (Danae) = 0,092 x 558,65 = 51,39 mg/ dL.

IV. DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS Muchos médicos afirman que los niveles de azúcar y colesterol cambian en función de lo que se haya comido antes del análisis y no reflejan correctamente los valores propios a comparación de los que se obtiene en ayunas. Por supuesto, la ingesta de comida previa al análisis afecta al nivel de glucosa, que sí se ve fuertemente afectado, como es natural. Sin embargo, A. Langsted, J.J. Freiberg, B.G. Nordestgaard (2008), muestran que los niveles en sangre de lípidos, lipoproteínas y apoliproteínas prácticamente no cambian en un análisis clínico si se toma comida “normal” antes del análisis.En un estudio, los cambios tras comer respecto a ayunar en sustancias como el colesterol fueron muy pequeños, menores de -0.2 mmol/L para el LDL y menores de -0.1 mmol/L para el HDL, o para los triglicéridos, menores de +0.3 mmol/L. Sin embargo, otro estudio reciente de Steven R. Craig, Rupal V. Amin, Daniel W. Russell, Norman F. Paradise (2000),muestra que los niveles de colesterol se pueden predecir en el 95% de los casos tanto si se ayuna como si no se ayuna antes del análisis clínico. En el 5% restante indican que es más fiable el dato en ayuno, por lo que recomiendan que se siga exigiendo ayunar antes de los análisis clínicos. El nulo efecto del ayuno en la medida de los triglicéridos también se muestra en los estudios comentados en Paul M Ridkera (2008), estos y otros estudios muestran que ciertos análisis químicos se ven afectados muy poco por haber o no ayunado (se recomienda entre 8 y 12 horas de ayuno, caso de ayunar), sin embargo, también los médicos interpretan el análisis en ayuno y esta información es importante para integrar e interpretar toda la información del análisis. La concentración normal de triglicéridos en la sangre que se encuentra < a 150 mg/dl se considera normal, 150-199 mg/dl se considera en el límite superior de lo normal, 200-499 mg/dl una concentración de triglicéridos en ayunas entre 200499 mg/dl se considera alto y, valores mayores de 499mg/dl en un paciente en ayunas se consideran muy altos. Los resultados obtenidos en los experimentos, indican que la concentración de triglicéridos para la muestra de suero de los alumnos está en el rango normal. Los triglicéridos son enzimáticamente hidrolizados por lipasa a ácidos grasos libres y glicerol. El glicerol es fosforilado por ATP por el glicerolquinasa para producir glicerol-3-fosfato y ADP. Glicerol-3-fosfato es oxidado a dihidroxiacetonafosfato por la glicerol fosfato oxidasa (GPO) para producir peróxido de hidrógeno (H2O2). La producción de color es catalizado por peróxidasa, el H2O2 reacciona con 4-aminoantipirina (4-AAP) y 4-clorofenol para producir un derivado rojo. La absorbancia es proporcional a la concentración sérica de triglicéridos presente en la muestra. El reactivo está basado en el método de Wako con modificación de McGowan et al. (2009). Con respecto a la determinación lípidos en los alumnos, se calculó que los alumnos tuvieron en promedio un rango de 5 g/L y según OMS Y FAO, los niveles

óptimos de colesterol están en un rango de 4 a 8 g/L, por lo tanto los pacientes tienen un resultado normal en el rango establecido. Diversos estudios han demostrado que los patrones alterados en los niveles de lípidos séricos como colesterol total por arriba de 240 mg/dl (National Cholesterol Education Program: Adult Treatment Panel ID, 2001), triglicéridos mayores a 200 mg/dl, LDL por arriba de 130 mg/dl y niveles bajos de colesterol HDL, son factores de riesgo para el desarrollo de enfermedad isquémica coronaria (Ramírez et al., 2003).

V. CONCLUSIONES  Dentro de las enfermedades crónicas, las enfermedades del corazón son las que presentan las elevaciones de mayor importancia por lo que la prueba de triglicéridos es un análisis que se utiliza para determinar el nivel de estos en la sangre, así como también para evaluar la función hepática y un posible riesgo cardiovascular.  Los niveles de triglicéridos varían con la edad, el índice corporal y del tiempo que tenga el paciente de haber ingerido alimentos.  Los valores normales de triglicéridos son menores de 150 mg/dl. Los valores obtenidos en la práctica tanto para hombre y mujer son normales.  El resultado de la absorbancia de la muestra es directamente proporcional a la concentración de lípidos en la sangre.  El rango de colesterol vario en cada participante ya que es determinado por la edad, peso, talla y el estilo de vida que posea cada uno.

VI. CUESTIONARIO - ¿En qué organelo celular se sintetizan los triglicéridos? Los ácidos grasos se almacenan como triglicéridos (siglas en Inglés: TG o TAG) en todas las células para ser utilizados en un futuro cuando sea necesario. Los triglicéridos están formados por moléculas de glicerol a las que tres ácidos grasos han sido esterificados. Son sintetizados por prácticamente todas las células. Los principales tejidos para la síntesis de TAG son el intestino delgado, el hígado y los adipocitos. Esta síntesis ocurre a nivel del retículo endoplasmático liso de estos tejidos por varias enzimas unidas a la membrana.

- ¿En qué forma se transportan los triglicéridos en la sangre? Las grasas se hidrolizan en el intestino delgado para poder formar ácidos grasos y glicerina para atravesar la pared intestinal, aislados o en forma de jabones al combinarse con los jugos pancreáticos e intestinales. Luego son reconstruidos de nuevo al otro lado de la pared intestinal; pero, dado que los lípidos son insolubles en agua, deben combinarse con proteínas, sintetizadas por el intestino, para ser transportadas y distribuidas a través de la sangre a todo el organismo. El transporte de triglicéridos está estrechamente integrado con el transporte de otros lípidos, como el colesterol. El cuerpo humano utiliza tres tipos de vehículos transportadores de lípidos:

- Lipoproteínas: como los quilomicrones, que los transportan al hígado tras su absorción por el intestino, desde donde se distribuyen al resto de las células del cuerpo, sobre todo las adiposas y musculares, en forma de lipoproteínas VLDL, IDL, LDL y HDL. Las células del tejido adiposo son las principales células de reserva de grasas. - Albúmina sérica: Transporta ácidos grasos libres. - Cuerpos cetónicos: Pequeñas moléculas hidrosolubles (acetoacetato y βhidroxibutirato) producidas en el hígado por oxidación de los ácidos grasos. Dado que son solubles en agua (y por tanto en la sangre), pueden viajar en ella sin problemas.

- Diferencias entre triglicéridos animales y vegetales. Triglicéridos vegetales: De aquí provienen principalmente las grasas no saturadas y son líquidas a temperatura ambiente. Este tipo de grasas son aptas para el consumo, debido a que el cuerpo humano no puede sintetizarlo y ayuda al mejoramiento del metabolismo. Los aceites vegetales, incluyendo a los provenientes del maíz, la soja, el cártamo y aceite de girasol, son grasas poliinsaturadas las cuales poseen colesterol LDL que en exceso es muy perjudicial para la salud .Las grasas monoinsaturadas incluyen a los aceites de oliva, de canola y de cacahuate. Triglicéridos animales: Las grasas poliinsaturadas que se encuentran en alimentos como el salmón, el atún y las nueces contienen ácidos grasos omega3, las cuales ayudan a reducir los triglicéridos y el colesterol LDL. El consumo de grasas saturadas y grasas trans es perjudicial para la salud de tu cuerpo. Las grasas saturadas son sólidas a temperatura ambiente y se encuentran principalmente en alimentos de origen animal, como la carne, la mantequilla, el queso y la leche entera. Estas grasas elevan los niveles de colesterol LDL, así como los niveles de colesterol total. Las grasas trans se fabrican mediante un proceso conocido como hidrogenación. No sólo elevan el colesterol LDL o malo, sino también el colesterol HDL más bajo, o bueno. Muchos alimentos procesados y envasados son ricos en grasas trans.

- ¿Cuáles son las fuentes alimenticias ricas en triglicéridos? Azúcar: Es el culpable principal de la elevación de los triglicéridos y no aporta nutrientes necesarios en nuestra dieta balanceada. Lo recomendable es reemplazarlo por miel de abeja o estevia ya que son componentes naturales que cumplen la misma función del azúcar pero sin producir lo mismo. Alcohol: Son bebidas ricas en triglicéridos, porque se trata de una fuente de calorías vacías, que nuestro organismo termina convirtiendo en triglicéridos, así que un solo trago, puede aumentar los niveles. Alimentos procesados: Cualquier alimento procesado, cuenta con un nivel alto de grasa y azúcar, por lo que incrementa los triglicéridos. Mariscos: Los mariscos son alimentos que contienen unos niveles muy grandes de triglicéridos. Grasas saturadas de origen animal: Los alimentos con alta presencia de grasas, como las salsas y cremas, carne, mantequilla, etc. incrementan los niveles de triglicéridos.

Productos lácteos bajos en grasa: Como la leche entera, yogurt rico en grasa, helado, postres realizados con leche entera, nata, etc. Hidratos de carbono refinados simples: Dentro de estos alimentos ricos en triglicéridos tenemos al pan blanco, la pasta, arroz blanco, galletas, etc.

VII. BIBLIOGRAFÍA  Balcells, G., A., La clínica y el laboratorio, 18ª Edición, EditorialMasson, México, 2001.  Betes, J.G, Manual Normon, 8ª Edición, Editorial Laboratórios Normon,S.A , España.  Buccolo. G. et. al.(1973). Quantitative determination of serum triglycerides by use of enzimes. Clin Chem 1973; 19 (5): 476-482.  Devlin, T. M. 2004. Bioquímica, 4.ª edición. Reverté, Barcelona. ISBN 84-2917208-4  Fiscbach, T.F., Manual de pruebas diagnósticas, 5ª Edición, 1997, Editorial MCgrawhill Interamericana, México.  Henry J.B., Diagnóstico clínico y tratamiento clínico, 9ª edición, 2000,Editorial Masson, México.  Langsted, J.J. Freiberg, B.G. Nordestgaard.“Fasting and Nonfasting Lipid Levels: Influence of Normal Food Intake on Lipids, Lipoproteins, Apolipoproteins, and Cardiovascular Risk Prediction,” Circulation 118: 20472056, 2008  McGowan O, Sasaki A, D'Alessio AC, Dymov S, Labonté B, Szyf M, Turecki G, Meaney MJ..Epigenetic regulation of the glucocorticoid receptor in human brain. Nat Neurosci. 2009 Mar;12(3):342-8. doi: 10.1038/nn.2270.  National Cholesterol Education Program Expert Panel on Detection, Evaluation, and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (2001). National Cholesterol Education Program: Adult Treatment Panel III. Manuscrito no publicado.  Paul M Ridkera .Fasting versus Nonfasting Triglycerides and the Prediction of Cardiovascular Risk: Do We Need to Revisit the Oral Triglyceride Tolerance Test?,” Clinical Chemistry 54: 11-13, 2008  Ramírez-López, G., Clicerio, C., Salmerón-Castro, J., Valles, V., GonzálezOrtiz, M. & Sánchez-Corona, J. (2003). Concentración de insulina y lípidos séricos en adolescentes de preparatoria en Guadalajara, México. Salud Pública de México, 45 (Suppl.1), 103-107.  Steven R. Craig, Rupal V. Amin, Daniel W. Russell, Norman F. Paradise .Blood Cholesterol Screening: Influence of Fasting State on Cholesterol Results and Management Decisions,” Journal of General Internal Medicine 15: 395-399, 2000

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