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Mycobacterias – laboratorio

Mycovacterias: descienden baceterias de la tierra, actinobacterias, corynebacteriales, mycobacteriaceae     

Características: aerobias, resistentes al alcohol acido, microaerofilicas (crecen mejor 5% co), blanco crema o naranja, algunos filamentos, GC 51-71% mol Tuberculosis, m. avium (leprae, ulcerans) Mycolicibacterium: cutáneas crónicas, purulentas, no responden a antibiótico: fortuitum y trivialis, mycolicibacter terrae, my colicibacillus trivialis Cutáneas: crecedoras rápidas: mycobacteroides (30%), mycolicibacterium Crecimiento lento: mycobacterium, mycolicibacter,

Mycobacterium tuberculosis: todas producen clínica de tuberculosis – todas son sonaticas (99% homología) -

M. tuberculosis, m. microti (roedores), africanum (humanos), canetti (roedores ¿), caprae (cabra) Pinnipedi (focas), orygis, suricattae (suricatas), daman, bovis

Lepra: -

M leprae, lepraemurium, lepromatosis (lepra de lucio  hipersensibilidad)

M. avium: - m. avium  m intracellulare  m chimaera  m colombiense - M arosiense  m manteni  m indicus pranii  m marseillense - m timonesne  m bouchedurhonense  m vulneris  m yongonense

Mycobacterium tuberculosis -

Aerofilo (medio cultivo liquido agitado, tubos abiertos) Mesófilo Nutrientes: lípidos, carbono: glicerol (m bovis: piruvato), nitrógeno (glu-asn)

Linajes mas usuales: 2 y 4

Envoltura celular: membrana celular + pared celular

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60% lípidos Ácidos micólicos: 2 cadenas, los lípidos se meten entre cadenas (lípidos de intercalamiento)  respuesta citocínica Tiene 2 membranas, biderma, parecido a un gram negativo Arabino galactano: lípidos Capa ácidos micólicos: membrana interna

Baciloscopia 1. Fijación: con un palo astillado donde se vea mas pus o calcificación, se extiende en una placa y se fija con el mechero 2. Tinción: ziehl-neelsen - Se cubre la lamina 5 min con fucsina y se calienta - Se espera a que se formen vapores - 5 minutos de emisión de vapores 3. Decolorar la placa 4. Resistente a alcohol y ácido clorhídrico (alcohol – ácido) 5. No se decolora 6. Cubrir la lamina con colorante de contraste, azul de metileno (todo lo que no tenga membrana  moco, no se tiñe la bacteria) *** fuscia: mycobacteria *** entre 6 mil y 10 mil bacilos para poder detectar la bacteria Tinción fite-faraco (leprae) 1. Fucsina de 15 a 20 minutos Auramina o: $$$ 1. amarillo- rojo naranja 2. aumenta sensibilidad 3. percarmanato de potasio cuantificación: contar cuantos bacilos se observan por cada campo (100 aumento) -

numero de bacilos contados (0-9 en 100 campos 100x CP) promedio bacilar 10/CP en 20 CP

Muestra de esputo: Células inflamatorias, moco, bacilos color fucsia Globias: lepra

Medios de cultivo: -

solidos: 10-100/ ml (liquido)- 4 a 8 semanas (dura creciendo hasta 16 semanas) base de huevo, colesterol y triacilglicerol löwenstein-jensen: colonias color crema, conteo de colonia, fuente de carbono glicerol, aspargina como fuente de nitrógeno ogawa kudoh: fuente de nitrógeno glutamato herrold petragnani: fuente de carbón piruvato, bovis más sensible SIEMPRE se pide Base de agar: todos traen acido oleico, fuente de lípidos

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Medios base de huevo: Mycobacterium tuberculosis: amarillo crema, rugoso y opaco

Bacterias no tuberculosis Mycobacterim gordonae: pigmento color naranja - betacarotenos Mycobacterium avium: húmeda, envoltura celular con azucares

Medios de cultivo: -

Líquidos: Más rápidos Dubos, sauton, sauton-tween-albumina, middlebrook 7H9, MGIT (7días), Proskauer-beck, dorset-henley MGIT: curva de fluorecencia: si tubérculos is crece, se separa y coemiza a briillar Resistencia en MTB Proporciones múltiples 2 tubos de control 2 tubos muestra löwenstein-jensen: resistencia a antibiótico se busca numero de colonias por mL 2 tubos por cada antibiótico a concentración critica Promedio numero de colonias por cada antibiótico Mayor al 1% es resistente (menor a 1 – susceptible)

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Medicamentos 2da línea: Nucleares: A: todas  LFX/ MFX, BDQ, LNZ Adicionales: B: 1 o 2  CFZ, CS/TRD C: completar  E, DLM, IMP-CLN/ MPM, AM – S, ETO-PTO, PAS

Molecular: resistencia rifampicina GeneXpert Posición 531 ecoli: 41% todas las mutaciones, posición 450 TBC 526: ecoli 445 TBC 516 ecoli 435 TBC Genotype MTBDRplus 2.0: resistencia rifampicina e isoniacida PCR IS6110: modalidades: gen Para saber si tiene o no TBC Si carril 2 y 3 positivos  tiene tbc Qpcr: fluorescencia Control positivo y negativo Tifipicación molecular: linaje RFLP: pvull MIRU-VNTR Polimorfismos de fragmentos de longitud Brotes Spoligotyping: brotes Presente 1 No presente 0 SNPs: variante de un nucleótido sobre secuencia consenso: genoma Deeplex Myc-TB: más avanzado

Bacilospocia MLP: Escala de Decotomia: pausibacilar 6-9m: d Taxonomía Lesiones en piscina o en agua, crónicas, crecimiento lento  m marinum a 30 grados Genotupe mycobacterium CM 2.0: se le pide a pacientes con VIH...