PRÁCTICA 6: METABOLISMO, BIOSÍNTESIS Y NUTRICIÓN PDF

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[Escribir el subtítulo del documento] | [Escribir el nombre del autor] FISIOLOGÍ A PRÁCTICA 6: METABOLISMO, BIOSÍNTESIS BACTERIA Y NUTRICIÓN NA INTRODUCCIÓN: Las pruebas bioquímicas son un conjunto de reacciones que determinan la actividad de una vía metabólica de la bacteria a partir de un sus...

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FISIOLOGÍ A

PRÁCTICA 6: METABOLISMO, BIOSÍNTESIS Y

BACTERIA

NUTRICIÓN

NA

[Escribir el subtítulo del documento] | [Escribir el nombre del autor]

INTRODUCCIÓN: Las pruebas bioquímicas son un conjunto de reacciones que determinan la actividad de una vía metabólica de la bacteria a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer transforma o no. Estas pruebas identifican de forma clara y precisa, la presencia o ausencia de una enzima, de un grupo de enzimas, o de una vía metabólica completa en uno o más microorganismos. La mayor parte de las pruebas usadas para evaluar la actividad bioquímica o metabólica de bacterias se lleva a cabo mediante el subcultivo del aislamiento primario en una serie de medios diferenciales, cuyos resultados pueden interpretarse después de uno o dos días de incubación. Estas pruebas se pueden resumir en los siguientes puntos:    

Sustrato (contenido en el medio de cultivo) Enzima o vía metabólica (secretada o en el interior del microorganismo) Producto Revelador y/o indicador (aunque algunas no los emplean)

Existen diversas pruebas bioquimicas, algunas de ellas son:  Indol. identifica la capacidad de degradar el triptófano con producción de Indol y metabolitos indólicos.  Voges Proskauer. Estudia la fermentación butanodiólica con formación de un metabolito intermediario neutro.  Citrato. Estudia la capacidad de utilizar el citrato como única fuente de carbono.  Ureasa. Estudia si el microorganismo posee el enzima ureasa que cataliza la hidrólisis de la urea.  Reducción Nitratos. Estudia la capacidad de los microorganismos para reducir los nitratos por la presencia de un conjunto de enzima denominado nitrato reductasa  Óxido - Fermentativa o de Hugh-Leifson. Estudia si el microorganismo es capaz de metabolizar un hidrato de carbono por via oxidativa o por vía fermentativa.  Ácidos y gases. Estudia la capacidad de utilizar un hidrato de carbono con la producción de ácidos y la formación de gas.  Agar TSI. El agar TSI estudia la utilización de la glucosa y lactosa, la producción de gas y ácido sulfhidrico (como producto metabolico final de los aminoacidos azufrados). Entre otras. En esta práctica se realizaron diferentes pruebas bioquímicas para el metabolismo del carbono, nitrógeno, azucares y ácidos orgánicos. Asi, de esta forma, se pueden identificar las diferentes bacterias.

COMENTARIOS Y RESULTADOS:

I.

Pruebas bioquímicas de fermentación

Medio Manitol Sacarosa Glucosa RM VP OF Glucosa OF Glucosa + aceite mineral estéril Kingler (TSI)

Tabla 1. Resultados de P. B. de Fermentación Microorganismo Resultado E. Coli Positivo E. Coli Positivo E. Coli Positivo E. Coli Positivo E. Coli Negativo Pseudomonas Oxidación de Glucosa Pseudomonas Negativo E. Coli

Citrato Malonato

(1)

Positivo para Glucosa y producción de CO2 Positivo Positivo

Klebsiella Klebsiella

(2)

(3)

(4)

(5)

(6)

(7)

(8)

(9)

Fotografía (1): Prueba bioquímica de Sacarosa Fotografía (2): Prueba bioquímica de Kingler Fotografía (3): Prueba bioquímica de Citrato Fotografía (4): Prueba bioquímica de Malonato Fotografía (5): Prueba bioquímica de OF Glucosa + aceite mineral estéril Fotografía (6): Prueba bioquímica de RM/VP Fotografía (7): Prueba bioquímica de OF Glucosa Fotografía (8): Prueba bioquímica de Mnitol Fotografía (9): Prueba bioquímica de Glucosa

II.

Medio INO3 SIM FAD LIA MIO UREA

Otras pruebas bioquímicas Tabla 2.- Resultados de Pruebas bioquímicas Microorganismo Resultado E. Coli Positiva. E. Coli Positivo. Producción de ácido sulfhídrico e indol Proteus Positivo. Klebsiella Positivo para Lisina descarboxilasa (Descarboxilacion) Shigella Positivo a fermentación y producción de H2S Proteus

(10)

(11)

(12)

Fotografía (10): Prueba bioquímica de INO3 Fotografía (11): Prueba bioquímica de Urea Fotografía (12): Prueba bioquímica de LIA Fotografía (13): Prueba bioquímica de FAD Fotografía (14): Prueba bioquímica de SIM

Prueba bioquímica de Ornitina

(13)

(14)

CONCLUSIÓN: Existen diversas pruebas ya que el metabolismo de cada bacteria es diferente, así se tiene una gama extensa de medios que se pueden utilizar. Cada medio tiene los requerimientos para la identificación apropiada de cierto tipo de metabolismo, utilizando además, algunos de ellos otros reactivos que sirven como indicadores, pueden ser catalizadores y/o intensificadores. Además de esto, cada medio debe cultivarse con su forma apropiada de inoculación, ya que será de suma importancia para la detección de los resultados. Cabe destacar que el uso adecuado de los tiempos de incubación son importantes para una adecuada identificación, ya que algunos pueden perder el color indicador después de pasado cierto tiempo de incubación. Se lograron realizar las diferentes pruebas bioquímicas obteniendo resultados satisfactorios. Así mismo identificar el tipo de microorganismo de acuerdo a su metabolismo, por lo que las pruebas bioquímicas son una herramienta útil para este propósito.

CUESTIONARIO: Sesión A: 1. Investiga las reacciones químicas de Voges Proskaver y Citrato VP: Fermentación de glucosa

acetoína

Citrato: En las bacterias el desdoblamiento del citrato involucra un sistema enzimático son la participación de la coenzima A, la citratasa o la citrato desmolasa. La citratasa requiere un catión divalente para su actividad. Magnesio o manganeso. Los intermediarios en el metabolismo del citrato son el oxalacetato y el acetato 2.

Anota los cambios de color de los siguientes indicadores rojo de fenol y azul de bromotinol, el pH en el que ocurren dichos cambios, asi como los medios de cultivo que los contienen

Medio de cultivo: Agar urea de Christensen Ácido: Amarillo (pH = 6.8) Alcalino : Rojo rosado (pH = 8.4) Medio no inoculado: Amarillo (pH = 6.8) Medio de cultivo: Caldo básico rojo de fenol Indicador de pH: Rojo de fenol Ácido: Color amarillo (pH = 6.8) Alcalino: Color rojo (pH = 8.4) Medio no inoculado: Rojo (pH = 7.4) Medio de cultivo: Medio básico de Hugh Leifson,medio O/F. Indicador de pH: Azul de bromotimol Ácido: Color amarillo (pH = 6) Alcalino: Azul de Prusia intenso (pH = 7.6)

Medio no inoculado: Verde (pH = 7.1)

3. Explica por que en el Kingler se observa la fermentación de la lactosa en el pico y de la glucosa en el fondo Porque la fermentación es un proceso que se lleva acabo encondiciones aeróbicas (pico de flauta, mismo donde se observa) y anaeróbicamente (fondo) 4. ¿Qué función desempeña el alfa naftol en el Voges Proskaver? Explica la reacción. Es un catalizador porque éste actúa como intensificador del color, lo que aumenta la sensibilidad de la reacción sin pérdida de su especificidad. 5. ¿De dónde proviene el gas formado en el Kingler? De la fermentación de los carbohidratos (Glucosa) presentes en el medio (degradación del ácido pirúvico) 6. Explica de qué manera utilizan las bacterias el Malonato. ¿Por qué algunas no lo pueden utilizar? Lo utilizan como única fuente de carbono. Algunas bacterias no lo pueden utilizar debido a que no pueden usarlos radicales anionicos como fuente de carbono. 7. Explica que significado tiene la presencia de las enzimas oxidasa y catalasa La presencia de la enzima catalaza ayuda a la identificación de los microorganismos grampositivos. La oxidasa para establecer la diferenciación entre grupos de bacterias gramnegativas 8. Escribe en forma simplificada; glucolisis, fermentación, ciclo de Krebs y respiración. Menciona en que puntos realizamos las pruebas bioquímicas y que detectamos. Glucolisis.- es un proceso, completo en sí mismo, para la generación de ATP escindiendo glucosa en dos moléculas de ácido láctico. Fermentación.- parte del piruvato y solo tiene lugar en condiciones de anaerobiosis. Ciclo de Krebs.- es la ruta de oxidación de todos los combustibles metabólicos en condiciones aeróbicas. Respiración.- función biológica de los seres vivos por la que absorben oxígeno y se expulsa dióxido de carbono para mantener funciones vitales

Sesión B: 1. Investiga las reacciones químicas de Reduccion del NO3, producción del Indol y desaminacion de la fenilalanina INO3:

La aparición de color se da cuando el nitrito reacciona con los dos reactivos. La reacción de color resultante se debe a la formación de un compuesto diazoico, psulfobenceno-azo-alfa-naftilamina. Indol: El triptófano es un aminoácido que puede ser oxidado por ciertas bacterias para formar tres metabolitos principales: indol, escatol e indolacético. El principal intermediario en la degradación del triptófano es el ácido indolpirúvico.

Desaminacion de la fenilalanina: El aminoácido aromático fenilalanina sufre una desaminaciónoxidativa catalizada por un aminoácido oxidasa para producir el ácido cetónico.

El color producido como consecuencia del agregado de cloruro férrico se debe a la formación de un cetoácido, el ácido fenilpirúvico. La reacción positiva con este reactivo se debe a la formación de una hidrazona. 2. Que indicador utiliza el medio de urea y cuál es su pH final? Utiliza el Rojo de fenol. Rojo rosado (pH = 8.4) 3. ¿Qué indica K/K en el medio LIA y como es la reacción? ¿Cuál seria la explicación para el resultado R/A? (Tubo purpura) indica descarboxilacion (capacidad enzimática de un organismo paradescarboxilar un aminoácido (lisina y arginina) para formar una amina. El aminoácido L-lisina sufre la descarboxilación para darcadaverina y CO2 por acción de la enzima específica lisina-descarboxilasa. K/A= azul de prusia / lila = No desaminación 4. Explica las reacciones que ocurren en el SIM que conducen a a producción del Indol El triptófano es un aminoácido que puede ser oxidado por ciertas bacterias para formar tres metabolitos principales: indol, escatol e indolacético. El principal intermediario en la degradación del triptófano es el ácido indolpirúvico. La formación de indol se produce solamente en aquellosorganismos capaces de fermentar los hidratos de carbono.La elevada acidez producida por la fermentación de laglucosa puede impedir el crecimiento del organismo o inhibirla enzima. El agregado de triptófano estimula la producción de indol mientras que la glucosa la inhibe.

5. Explica por qué se debe enfriar la gelatina Debido a que las proteínas se desnaturalizan al estar en contacto con el calor 6. Explica las reacciones que ocurren en las prueas FAD (+), y NO3 (+) FAD.- el aminoácido fenilalanina sufre la desaminacion oxidativa catalizada por la enzima fenilalanina deaminasa, para producir acido fenilpiruvico y amoniaco. La presencia del acido fenilpiruvico se demuestra con el agregado de cloruro férrico en medio acido, con el cual se forma un quelato de color verdoso entre el acido fenil pirúvico y los iones Fe3+. NO3.- la reducción del nitrato a nitrito o gas nitrógeno por medio de la enzima nitrato reductasa, es un proceso de oxidación por el cual el nitrato proporciona oxígeno para ser usado como aceptor de electrones. El nitrito presente puede detectarse con el reactivo de Griess A y Griess B Britania, dando un compuesto diazoico coloreado.

BIBLIOGRAFÍA

Bailon L., Cruz, R., & Cervantes, A. (2003). Atlas de pruebas bioquímicas para identificar bacterias. 23/Mayo/2017, de Universidad Nacional Autónoma de México. Sitio web: http://www.academia.edu/4858992/Atlas_de_pruebas_bioquimicas_para_identificar_bacterias

García, H. (2014). Pruebas bioquímicas. 23/Mayo/2017, de Blog http://microbiologia3bequipo5.blogspot.mx/2014/10/pruebas-bioquimicas.html

Sitio

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