Practica de esterilización PDF

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Práctica de esterilización para estudios microbiológicos...

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UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE CORREGIDORA MICROBIOLOGÍA PRACTICA 1. Esterilización 1. OBJETIVOS 1.1 Preparar material de vidrio para esterilizar por calor húmedo. 1.3 Preparar material para esterilizar por calor seco. 1.3 Preparar un medio de cultivo líquido para la práctica 2. 1.4 Preparar un medio de cultivo sólido para la práctica 2. 2. INTRODUCCION A lo largo de la historia, los humanos han utilizado el fuego para esterilizar objetos. El calor generado mediante la aplicación de altas temperaturas afecta a las membranas y desnaturaliza las proteínas y los ácidos nucleicos de los microorganismos. Sin embargo, someter los objetos al fuego resulta excesivo para el uso cotidiano. El principio de esterilización preferido para la esterilización es el calor húmedo, así que la autoclave es el método más utilizado para realizarla. En un horno de aire seco, son necesarias dos horas a 160 °C para eliminar las esporas de la bacteria Clostridium botulinium (relacionada con la comida enlatada). Mediante calor húmedo, se pueden eliminar las mismas esporas en solo cinco minutos a 121 °C, lo que demuestra que el calor húmedo es más eficaz que el calor seco. Para ser eficaces contra bacterias y virus formadores de esporas, las autoclaves deben: - Hacer que el vapor entre en contacto directo con el material que se desea esterilizar. Por ello la carga es muy importante, no debe llenarse la autoclave arriba de ¾ partes de capacidad. - Crear el vacío para desplazar todo el aire presente originariamente en la autoclave y sustituirlo por vapor. - Implementar un medio de control bien diseñado para la evaluación de la efectividad. La eficiencia del proceso de esterilización depende de dos factores principales. Uno de ellos es el tiempo que deben exponerse a los microorganismos a la temperatura indicada para acabar con ellos. El segundo factor es la temperatura a la que perecen todos los microbios de una muestra o material. Para monitorear la eficiencia del proceso se utilizan regularmente la medición de la presión interna de la autoclave con un manómetro calibrado y un termómetro de temperatura máxima. Otra medición que se puede utilizar pero no es muy común, es la medición del volumen recuperado, que además puede ayudar a identificar microfugas. Definiciones Escriba la definición y un ejemplo de: a) Limpieza, b) Desinfección, c) Esterilización. Métodos de esterilización alternativos Escriba al menos tres métodos de esterilización que no utilicen calor para eliminar a los microorganismos. De cada uno indique el mecanismo de acción y en que casos se aplican.

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3. DESARROLLO Reactivos Peptona Cloruro de sodio Agua destilada Agar métodos estándar Infusión cerebro corazón

Material de almacén 2 matraces Erlenmeyer de 150 ml ó 300 ml 5 Pipetas serológicas de 5 ml Probeta de 100 ml 2 tubo de cultivo con tapa 4 cajas Petri de 90 mm Material a traer por el equipo Papel Kraft Bolsas ziploc® con cierre Esponjas de 5 x 5 cm ó similares Algodón, gasa y cinta adhesiva (masking tape) Hisopos de algodón de tallo largo Cinta testigo para autoclave

Parte experimental Preparación de material - Envuelva las pipetas, los hisopos y las cajas Petri con el papel Kraft y la cinta adhesiva. Para ello coloque la pipeta sobre un rectángulo de papel Kraft de 10 cm de ancho y 10 cm más largo que la pipeta o el hisopo, lo mismo para las cajas. Coloque la punta de la pipeta apuntando hacia una esquina y doble la esquina sobre la pipeta, doble el borde largo del papel sobre la pipeta y después enrolle el papel alrededor de ella, repita el procedimiento sin enrollar para las cajas petri. Coloque cinta adhesiva para mantener el material envuelto cubierto. - Envuelva las esponjas con el papel Kraft formando un paquete rectangular como si envolviera un regalo. - Rotule el material y marque con cinta testigo. Preparación de medios de cultivo - Disuelva 1 g de peptona y 0.9 g de cloruro de sodio en 100 ml de agua dentro de un matraz Erlenmeyer. - Coloque un tapón de gasa y algodón en la boca del matraz, y cúbralo con un sombrero de papel Kraft. - Rotule el material y marque con cinta testigo. - Disuelva la cantidad necesaria de agar métodos estándar en 100 ml de agua destilada. Caliente hasta la disolución. - Calcular la cantidad necesaria para preparar 100mL de Caldo BHI. Pesar la cantidad calculada del medio. Esta operación debe ser rápida para evitar que la humedad del ambiente no afecte el resto del contenido del frasco. - Disolver el medio en 60mL de agua destilada y una vez disuelto completar el volumen a 100mL. - Coloque un tapón de gasa y algodón en la boca del matraz, y cúbralo con un sombrero de papel Kraft. - Rotule el material y marque con cinta testigo. Esterilización en autoclave - Coloque los medios de cultivo, las esponjas, los hisopos y las placas petri en el interior de la canastilla. - Asegúrese que la autoclave tiene agua destilada suficiente para cubrir las resistencias. - Cierre la autoclave, conecte a la corriente, enciéndala y gire el control de temperatura hasta el máximo. - Asegúrese que la válvula ubicada en la tapa está abierta. - Cuando salga vapor en una corriente continua por la válvula, ciérrela. - Deje que la presión llegue a 15 psi y manténgala así durante 15 minutos girando la perilla de control de temperatura a la mitad. - Al término de los 15 minutos apague la autoclave y deje enfriar antes de sacar el material. Página 2 de 4

4. RESULTADOS Esterilización Calor húmedo

Tiempo Hora de Inicio Hora de Fin Tiempo efectivo

Temperatura

Presión

Cinta testigo

Comentarios y/o observaciones Escriba los eventos relevantes que se presentaron durante el desarrollo que considere importantes para la interpretación de los resultados obtenidos. 5. CONCLUSIONES Escriba en las siguientes preguntas: ¿Se lograron los objetivos? ¿Si, no, porqué? Los resultados, ¿coinciden con lo esperado? ¿Si, no, porque? ¿Qué factores influyeron en el éxito logro o fracaso en el logro de los objetivos? ¿Qué sugiere modificar para mejorar los resultados? ¿Qué aprendizaje logró y como lo puede aplicar en su vida profesional o en su vida diaria? Para escribir estas conclusiones utilice todo el espacio que sea necesario. Sustente sus argumentos con información obtenida de bibliografía relacionada. Reporte esta fuente de información en la sección 7 (Bibliografía). 6. CUESTIONARIO Responda brevemente las siguientes preguntas. En cada caso indique la fuente de donde obtuvo la respuesta, por ejemplo (Morrison, 2007) y reporte la referencia completa en la sección 7. Bibliografía. - ¿Qué es el punto de muerte térmica? El punto de muerte térmica es la temperatura más baja necesaria para causar la muerte de todas las bacterias en una suspensión líquida particular en 10 minutos. - ¿Qué es el tiempo de muerte térmica (D)? Es el tiempo mínimo requerido para que todas las bacterias de un cultivo líquido mueran a una temperatura determinada. - ¿Qué tipo de control de esterilización es la cinta testigo y cuál es su fundamento? Es de tipo químico, el objetivo de este indicador es diferenciar los paquetes que han sido procesados de aquellos que no han sido procesados. Contienen un químico que reaccionan a un proceso específico de esterilización. - Menciona al menos dos ventajas y desventajas de emplear este tipo de control. Ventajas: Es de fácil empleo y de un coso accesible. Desventajas: Solo responde a ciertos criterios de esterilización y es un control para un proceso específico. - ¿Qué método de control de esterilización consideras que sería el más efectivo y por qué? Un método biológico, ya que estos certifican la muerte de microorganismos una vez terminado el proceso de esterilización, y no solo que se hayan cumplido los parámetros, ya que el equipo podría cumplir con algunos parámetros, pero su función de esterilizar podría fallar. - ¿Cuál es el fundamento o mecanismo de acción de la autoclave para esterilizar? Su mecanismo de acción es por calor húmedo, el cual se fundamenta en que destruye a los microorganismos por coagulación de las proteínas, o bien, desnaturalización de las proteínas, que es causada por la rotura de los enlaces de hidrógeno que mantienen la estructura tridimensional. 7. BIBLIOGRAFIA Página 3 de 4

[1] El proceso de esterilización (2016). Eurotherm by Schneider electric. Consultado el 5 de Junio de 2016 en http://www.eurotherm.es/sterilization [2] Tortora, G. (2007) Introducción a la microbiología. Argentina: Ed. Médica

Panamericana. p. 191 [3] Rutala WA, Jones SM, Weber DJ, Comparación de una lectura rápida de indicadores biológicos para la esterilización por vapor, con cuatro indicadores convencionales de cinco indicadores biológicos y químicos. Infect Control Hosp Epidemiol 1996:17:4238. A partir de aquí escriba en formato APA las fuentes que utilizó para la introducción, las conclusiones y el cuestionario.

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