Apuntes Complementarios PARA LAS Practicas DE Hematologia (RCS 2018 ) PDF

Preview

Summary

Download Apuntes Complementarios PARA LAS Practicas DE Hematologia (RCS 2018 ) PDF

Description

APUNTES PARA LAS PRACTICAS DE HEMATOLOGIA QFB, FCQ, UANL

2019

Cuantificación de Hemoglobina en sangre. Lecturas previas que se considerarán para el examen diario Manual de Hematología:  Métodos de extracción de sangre (pp. 21 a 27)  Biometría hemática (pp. 28 a 31)  Cuantificación de hemoglobina (hemoglobinometría) (pp. 32 a 34) Material necesario para la práctica  Una pipeta serológica de 5 ml  3 tubos de 13 x 100 mm  Una pipeta Sahli para dilución de hemoglobina  Una boquilla para pipeta Sahli (de preferencia comprar para su uso personal o de lo contrario al pedirla en el almacén lavarla bien y desinfectarla y usarla por todo el semestre)  Gradilla para los tubos de 13 x 100 mm  Espectrofotómetro  Celda para espectrofotómetro

Boquillas

Pipeta Sahli

APUNTES PARA LAS PRACTICAS DE HEMATOLOGIA QFB, FCQ, UANL

2019

Estructura del grupo hem  Hb reducida= Fe2+  Metahemoglobina = Hb oxidada con Fe3+ (MetaHb)  Cianometahemoglobina= el CN se acompleja con la metahemoglobina Dilución de la muestra: Para fines prácticos se calcula la dilución dividiendo 5/0.02 lo cual da 250. Nota: Para la determinación deberán contar con guantes desechables, lentes de seguridad, papel adsorbente y por supuesto su bata de laboratorio así como la indumentaria adecuada para el trabajo en el laboratorio.

APUNTES PARA LAS PRACTICAS DE HEMATOLOGIA QFB, FCQ, UANL Hematocrito Lecturas previas que se considerarán para el examen diario Manual de Hematología:  Métodos de extracción de sangre (pp. 21 a 27)  Biometría hemática (pp. 28 a 31)  Hematocrito (volumen de glóbulos rojos sedimentados) (pp. 35 y 36) Material necesario para la práctica  Torundas con alcohol  Lancetas estériles  Tubos capilares heparinizados para microhematocrito  Plastilina para sellar el tubo capilar  Centrífuga para micro-hematocrito  Regla milimétrica (hasta 10 cm de longitud)  Medidor de micro-hematocrito

Procedimiento:

1.- Desinfectar la yema del dedo con alcohol, secándola posteriormente al aire o con un algodón. Utilizar siempre guantes y lancetas estériles. Los tubos de

microhematocrito deben de ser preferiblemente heparinizados.

2019

APUNTES PARA LAS PRACTICAS DE HEMATOLOGIA QFB, FCQ, UANL

2.- Punzar la yema del dedo con la lanceta y presionar el mismo para que salga sangre.

3.- Llenar el capilar del microhematocrito apoyando uno de los extremos sobre la gota de sangre del dedo. 4.- Taponar el extremo más próximo a la sangre (por el que se hizo el llenado) con plastilina. 5.- Centrifugar el capilar durante 5 minutos a 10,000 rpm en una centrífuga específica para micro-hematocrito.

2019

APUNTES PARA LAS PRACTICAS DE HEMATOLOGIA QFB, FCQ, UANL

2019

6.- Con la regla milimétrica medir la longitud que ocupa en el capilar la columna formada por glóbulos rojos sedimentados y referirla en tanto por ciento a la longitud total que ocupa la sangre que llena el capilar.

Se puede hacer la medida del hematocrito de forma directa, utilizando una plantilla especialmente diseñada para ello. Basta con desplazar el tubo hacia la derecha, manteniendo la interfase plastilina-elementos formes en la línea horizontal inferior, que marca el cero, hasta que el límite superior del plasma alcanza el valor de 100%. En esas condiciones, la interfase plasma-elementos formes nos estaría marcando el valor de hematocrito. En la parte inferior se muestra una simulación de dicho proceso:

También se puede utilizar un lector para microhematocrito. Valor de referencia: El rango de valores normales, es el siguiente:

APUNTES PARA LAS PRACTICAS DE HEMATOLOGIA QFB, FCQ, UANL Mujeres:

35-47% ó 0.35-0.47 L/L

Hombres:

40-52% ó 0.40 a 0.52 L/L

2019

Nota: Para la determinación deberán contar con guantes desechables, lentes de seguridad, papel adsorbente y su bata de laboratorio así como la indumentaria adecuada según lo marca el Reglamento de trabajo en los laboratorios de FCQ.

APUNTES PARA LAS PRACTICAS DE HEMATOLOGIA QFB, FCQ, UANL

2019

Recuento de Eritrocitos e Índices Eritrocitarios Lecturas previas para el Examen Diario Manual de Hematología:  Métodos de extracción de sangre (pp. 21 a 27)  Biometría hemática (pp. 28 a 31)  Recuento globular (eritrocitos) (pp. 37-39)  Valores corpusculares de los hematíes, índices eritrocitarios (pp. 40-41) Material necesario para la práctica:  Pipetas Thoma para dilución de eritrocitos  Boquilla para pipeta Thoma  Cámara de Neubauer (Hematímetro)  Cubrehematímetro  Microscopio 101

0.5 Pipeta THOMA para dilución de sangre, glóbulos rojos (eritrocitos) Tolerancia: ± 3%

Surco o hendidura transversal

3 Plataformas

Fosas

APUNTES PARA LAS PRACTICAS DE HEMATOLOGIA QFB, FCQ, UANL

2019

0.1 mm de espesor entre el cubreobjetos y la plataforma

Cámara de Neubauer (vista frontal)

Cámara de Neubauer (vista lateral) Se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrícula como la que se ve en la imagen. Es un cuadrado de 3 x 3 mm (9 mm), con una separación entre dos líneas consecutivas de 0.25 mm. La depresión central del cubreobjetos está hundida 0.1 mm respecto a la superficie, de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos éste dista de la superficie marcada 0.1 milímetro.

Observe que en la cuadrícula de la cámara de Neubauer las áreas de recuento de eritrocitos y leucocitos son diferentes. Los glóbulos rojos se cuentan en las áreas coloreadas de rojo, mientras que los glóbulos blancos se cuentan en las áreas coloreadas de azul. Tener en cuenta que la cuadrícula central tiene 25 cuadrados y cada uno mide 0.2 x 0.2 mm. Cada uno de estos está dividido en 16 cuadrados más pequeños.

APUNTES PARA LAS PRACTICAS DE HEMATOLOGIA QFB, FCQ, UANL Procedimiento para el Recuento de Eritrocitos: Se mezcla la sangre hasta que esté homogénea. Se aspira con la pipeta de dilución perfectamente limpia y seca hasta la marca de 0.5. Hay que evitar la entrada de burbujas de aire, pudiendo ayudarnos de un papel de filtro para conseguir el enrasado. La punta y el exterior de la pipeta se limpian antes del siguiente paso.

A continuación se toma con la pipeta líquido de Hayem isotónico o NaCl 0.85% o 0.9%, hasta la marca de 101; así, la sangre queda diluida 1/200 (redondeando 100 ÷ 0.5).

Agitamos la pipeta mecánica o manualmente para que los eritrocitos se mezclen homogéneamente con el líquido de dilución. A través de la goma de conexión con la pipeta, soplamos para desechar las primeras 4-5 gotas por corresponder al líquido que estaba en el capilar.

Se adapta un cubreobjetos (cubrehematímetro) sobre una cámara cuenta glóbulos limpia y seca y se coloca una gota en uno de los lados del cubre; esta gota penetra por capilaridad y rellena el retículo de la misma. Evitar el sobrellenado que levanta el cubrehematímetro lo cual causa un error positivo por aumentar el volumen medido.

2019

APUNTES PARA LAS PRACTICAS DE HEMATOLOGIA QFB, FCQ, UANL Una vez preparada la cámara se coloca sobre la platina del microscopio dejándose unos minutos en reposo para que sedimenten los glóbulos. Disponemos el condensador bajo y luz débil; enfocamos primero con el objetivo débil seco (10X) y luego se cambia al fuerte seco ( 40X) para proceder al recuento, que se lleva a cabo en los cuadrados pequeños del retículo marcado en color rojo. Finalizado el recuento se procede a la limpieza de la pipeta con agua destilada y se deja secar

2019

APUNTES PARA LAS PRACTICAS DE HEMATOLOGIA QFB, FCQ, UANL

2019

La imagen de abajo simula el campo que esta viendo al microscopio con un objetivo de 45x. Solo es visible el centro de la cuadrícula. Cuenta los glóbulos rojos en los cinco cuadrados mencionados anteriormente y determina el recuento de eritrocitos como se ha descrito anteriormente. Muy importante: Cuando un eritrocito se sitúa en mitad de las líneas superior y/o de la izquierda, entonces es contabilizado. Pero no se contabiliza cuando se sitúa en mitad de las líneas inferior y/o de la derecha.

APUNTES PARA LAS PRACTICAS DE HEMATOLOGIA QFB, FCQ, UANL

2019

En los cuadros encerrados en un círculo azul se cuentan leucocitos y los eritrocitos se cuentan en los cuadros encerrados en un círculo rojo. Se debe llevar una secuencia de conteo para no confundirse y olvidar contar algunos o contar dos veces.

APUNTES PARA LAS PRACTICAS DE HEMATOLOGIA QFB, FCQ, UANL

2019

En resumen: o La cámara de Neubauer está dividida en 9 cuadrados de 1 mm de lado. o Los cuadros de las cuatro esquinas (marcados con L o azul claro) sirven para contar leucocitos. o El cuadro central, a su vez está dividido en 25 cuadros más pequeños de 0.2 mm de lado cada uno, en los cuales se cuentan los eritrocitos en cinco de ellos (los de las cuatro esquinas y el del centro marcados en rojo). o El espacio que queda entre la base de la cámara y el cubreobjetos es de 0.1 mm, por lo tanto el volumen de líquido en el cual se cuentan los eritrocitos se determina considerando la superficie de los 5 cuadrados en los cuales se cuentan las células y la profundidad de la cámara que es de 0.1 mm. o Por lo tanto el volumen total contado es: o Superficie de cada cuadrado: 0.2 mm x 0.2 mm por cuadrado = 0.04 mm2 o Superficie total en 5 cuadrados: 0.04 mm2 x 5 = 0.2 mm2 o Volumen total contado = 0.2 mm2 x 0.1 mm = 0.02 mm3 La dilución de la muestra fue de 1:200, el cálculo de eritrocitos se realiza de la siguiente manera: En 0.02 mm3 de muestra diluida (1:200) hay Y número de eritrocitos (contados en los 5 cuadros) En 1 mm3 de muestra sin diluir hay X número de eritrocitos. No. de Eritrocitos por mm3 de sangre (X) =

Y 0.02 mm3

x 200 (dilución)

Índices Eritrocitarios VGM ó VCM= Volumen Globular Medio ó Volumen corpuscular medio MCV en inglés =Mean cell volume. Representa el volumen individual de los eritrocitos expresado en femtolitros.

Recuento automatizado de glóbulos rojos y VGM Los contadores de células más comunes se basan en el principio de la “impedancia eléctrica”, conocido como principio de Coulter en honor al ingeniero Wallece Coulter quien lo describió en 1956 y que ha permitido realizar el recuento de eritrocitos, leucocitos y plaquetas con gran precisión y eficiencia. El principio de impedancia eléctrica mide el número y el tamaño de partículas (células), de acuerdo con los cambios que se producen en la resistencia eléctrica al pasar éstas por un pequeño orificio. Las células sanguíneas, que no son conductoras de electricidad, se diluyen en una solución amortiguada de electrolitos como la solución salina (conductora), que pasa por un orificio (por lo general de 100 µm de diámetro) en un tubo de apertura entre dos electrodos (positivo “ánodo” y negativo “cátodo”) colocados a ambos lados del orificio. La interrupción de la corriente por las células altera la carga eléctrica y se produce una pulsación. La amplitud de cada pulsación es proporcional al volumen de la célula y el recuento total de eritrocitos se determina a partir del número total de señales obtenido en un determinado volumen de sangre. El VGM se obtiene por el

APUNTES PARA LAS PRACTICAS DE HEMATOLOGIA QFB, FCQ, UANL

2019

promedio de las amplitudes de cada pulsación, las cuales representan el volumen de cada eritrocito.

Los contadores de partículas para determinar el número de eritrocitos cuentan por triplicado un promedio de 70.000 células con un coeficiente de variación menor de 1.0%, en contraposición con el recuento manual que oscila entre 11 y 22%. Este método de contar eritrocitos es muy preciso y por lo tanto el cálculo de VGM por este método también lo es. VGM obtenido de una Biometría Hemática por el método manual. En este caso se relacionan el Recuento de Eritrocitos y el Hematocrito para obtener el volumen individual promedio de los eritrocitos. El método manual de recuento de eritrocitos tiene muchos puntos críticos por lo tanto es muy impreciso, lo cual no da resultados muy confiables de VGM. o El Hematocrito representa el volumen total de todos los eritrocitos en 100 ml de sangre (%) o en un litro de sangre (L/L) o La cuenta total de eritrocitos me indica cuantos eritrocitos hay en cada mm 3 (L)o bien en cada litro de sangre, según las unidades en que se exprese. Ejemplo: Hematocrito = 45 %, 0.45 L/L 45 % significa que en 100 mL hay 45 mL de eritrocitos o lo que es lo mismo en 1 L de sangre hay 0.45 L de eritrocitos. Eritrocitos = 5.0 x 106 /mm3, 5.0 x 1012 /L Para calcular El VGM se relaciona el número de eritrocitos por litro, con el volumen total de eritrocitos en el mismo litro de sangre. 5.0 x 1012 eritrocitos ocupan un volumen de 0.45 L (Hto) ¿Qué volumen ocupa un eritrocito? VGM =

Hto L/L = Eritrocitos /L

0.45 L/L 5.0 x 1012/L

Si despejamos las unidades nos van a quedar litros y el resultado de este ejemplo sería 0.09 x 10-12 L. Para que las unidades queden en números enteros se multiplica por 1000, lo que nos da 90 x 10-15 L. 10-15 L es igual a 1fL =femtolitro Si usamos el hematocrito en % debemos multiplicar por 10 VGM = Hto L/L = 45 % =9 x 10 = 90 fL Eritrocitos /L 5.0 x 1012/L Valores de referencia = 80-100 fL

APUNTES PARA LAS PRACTICAS DE HEMATOLOGIA QFB, FCQ, UANL

2019

Tomar en cuenta que la forma correcta es la primera pues maneja las unidades correctas. La segunda fórmula es solo para ajustarse a las unidades. HCM ó MCH = Hemoglobina celular media ó mean cell hemoglobin Es el promedio de la concentración de hemoglobina que posee cada eritrocito. Esta es calculada a partir de la hemoglobina en sangre y del recuento de eritrocitos, tanto por el método manual como por el automatizado. La confiabilidad de este dato (HCM) depende del método por el cual se contaron los eritrocitos. Por lo tanto el automatizado es muy confiable pero el manual no lo es tanto. La relación aquí es la siguiente: o La hemoglobina representa los g de ésta que tenemos en 1 L de sangre o La cuenta total de eritrocitos me indica cuantos eritrocitos hay en cada mm 3 (L) o bien en cada litro de sangre, según las unidades en que se exprese. Ejemplo: Hemoglobina 15 g/dL, 150 g/L Eritrocitos = 5.0 x 106 /mm3, 5.0 x 1012 /L 5.0 x 1012 eritrocitos contienen 150 g de Hemoglobina ¿Cuánta hemoglobina contiene un eritrocito? HCM =

Hb g/L Eritrocitos /L

=

150 g/L 5.0 x 1012/L

=

30 x 10-12 g ó 30 pg

Las unidades nos quedan g Valores de referencia = 27 – 34 pg CHCM ó MCHC = Concentración de Hemoglobina celular media ó mean cell hemoglobin Es el promedio de la concentración de hemoglobina que hay en un decilitro de eritrocitos. Esta es calculada a partir de la hemoglobina en sangre y del hematocrito, tanto por el método manual como por el automatizado. La confiabilidad de este dato (CHCM) depende del método por el cual se obtuvo el Hematocrito. Por lo tanto el manual es muy confiable pero el automatizado no lo es ya que el hematocrito se calcula a partir de la suma del volumen de cada eritrocito. Calibrar el hematocrito en un método automatizado es un punto crítico del método. La relación aquí es la siguiente: o La hemoglobina representa los g de ésta que tenemos en 1 L de sangre o El Hematocrito representa el volumen total de todos los eritrocitos en 100 ml (decilitro) de sangre (%) o en un litro de sangre (L/L)

APUNTES PARA LAS PRACTICAS DE HEMATOLOGIA QFB, FCQ, UANL

2019

Ejemplo: Hemoglobina 15 g/dL, 150 g/L Hematocrito = 45%, 0.45 L/L 45 % significa que en 100 mL hay 45 mL de eritrocitos o lo que es lo mismo en 1 L de sangre hay 0.45 L de eritrocitos. En 0.45 L de eritrocitos hay 15 g de hemoglobina ¿Cuánta hemoglobina contiene un decilitro de eritrocito? CHCM =

Hb g/dL Hto L/L

=

15 g/dL 0.45 L/L

=

33.3 g/dL

Las unidades nos quedan g/dL g . dL .

= g L dL L

= g/dL

L L Valores de referencia = 31 – 36 g/dL Estos índices sirven para clasificar los eritrocitos con respecto a su volumen y cantidad de hemoglobina, lo cual da un indicio de la causa de los defectos en los eritrocitos y en su caso de anemia. VGM > 100 fL es macrocitosis VGM < 80 fL es microcitosis HCM o CHCM > 34 ó 36 respectivamente, es hipercromia HCM o CHCM < 27 ó 31 respectivamente, es hipocromia

APUNTES PARA LAS PRACTICAS DE HEMATOLOGIA QFB, FCQ, UANL

2019

Recuento de Reticulocitos Lecturas previas que se considerarán para el examen diario Manual de Hematología:  Métodos de extracción de sangre. Pp 21 a 27  Biometría hemática. Pp 28 a 31  Hematocrito (volumen de glóbulos rojos sedimentados) pp 35 y 36  Recuento de reticulocitos pp 46 y 47 Material necesario para la práctica MAT ERI ALNECESARI OP ARALAPRÁCTI CA:

1. Recuento de Reticulocitos  Micropipeta de 1000 µL y puntas.  1 tubo de 10 x 75 mm  Portaobjetos limpios y secos  Cubreobjetos  Microscopio Aceite de inmersión para microscopía 2. Para la determinación del micro –hematocrito.  Tubos capilares sin heparina  Centrífuga para micro-hematocrito  Medidor de micro-hematocrito Descripción:

Características de los reticulocitos:  Representan la fase anterior a los eritrocitos maduros  Carecen de núcleo  Su tamaño es mayor al de los eritrocitos.  Contienen restos de ARN (ribosomas)  Se observan en las anemias hemolíticas, en la enfermedad hemolítica del recién nacido y, en general, cuando hay una producción aumentada de eritrocitos.

APUNTES PARA LAS PRACTICAS DE HEMATOLOGIA QFB, FCQ, UANL

2019

Tradicionalmente el conteo de reticulocitos se realiza a partir de la tinción de la sangre periférica con colorantes supravitales (azul de cresilo brillante o el azul de metileno) de sangre anticoagulada con EDTA ya que el RNA precipita observándose como estructuras gránulo-filamentosas en el interior de estos hematíes jóvenes con ayuda del microscopio óptico Por otro lado, en una tinción Romanowsky (ej. Wright), el citoplasma se tiñe de rosa con tonalidades azuladas (basofilia difusa o policromasia) debido a que contienen residuos de aparato de golgi, mitocondrias y restos de ARN. El número de reticulocitos en sangre periférica es un reflejo del grado de actividad eritropoyética de la médula ósea, por lo que la identificación y cuantificación de reticulocitos es un método para valorar la actividad eritropoyética medular. Procedimiento: 1. Colocar en un tubo de ensayo 250 µL de la muestra de sangre y 250 µL del colorante azul de cresilo brillante. 2. Mezclar bien y llene uno de los tubos capilares con la mezcla. 3. Dejar reposar 10-15 minutos a temperatura ambiente. 4. Hacer una extensión de la mezcla sobre un portaobjetos. Realización de las extensiones de sangre periférica: Uno de los métodos más empleados para la realización del frotis sanguíneo es el método de los dos portaobjetos. Consiste en la extensión de una gota de sangre sobre un portaobjetos mediante otro portaobjetos. La técnica es la siguiente: 1. Depositar una pequeña gota de sangre (en este caso la mezcla de sangre y colorante) en el extremo de un portaobjetos. 2. Con el borde de otro portaobjetos a 45 grados, tocar la gota, esperar a que la sangre se distribuya por capilaridad y después deslizar suavemente un portaobjetos sobre el otro en sentido longitudinal hasta que la gota quede bien extendida sobre la superficie del primar portaobjetos.

3. Dejar secar al aire 4. Observar al microscopio óptico.

APUNTES PARA LAS PRACTICAS DE HEMATOLOGIA QFB, FCQ, UANL    

2019

Primero evaluar el frotis con objetivo de 40 X para seleccionar la porción del frotis para contar. Contar de 1000 a 2000 eritrocitos (10-15 campos),...