BioquÍmica II PrÁctica 6 Extraccion DE GlucÓgeno PDF

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Universidad de Guayaquil Facultad de Ciencias Químicas Carrera: Química y Farmacia Guía de Prácticas de Laboratorio de Bioquímica II Asignatura: Profesor/a: Número de la práctica #6 Bioquímica II Dra. Q. Patricia Jiménez G. EXTRACCIÓN DEL GLUCÓGENO A PARTIR DEL HÍGADO Y DETERMINACIÓN DE LA GLUCOSA M...

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Universidad de Guayaquil Facultad de Ciencias Químicas Carrera: Química y Farmacia Guía de Prácticas de Laboratorio de Bioquímica II Asignatura: Profesor/a: Número de la práctica #6

Bioquímica II Dra. Q.F. Patricia Jiménez G.

EXTRACCIÓN DEL GLUCÓGENO A PARTIR DEL HÍGADO Y DETERMINACIÓN DE LA GLUCOSA Miembros del Equipo: 

Betancourt Anthony

Semestre: Quinto Grupo: 3 OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA DE LABORATORIO

Paralelo: A

1. Realizar la extracción del glucógeno a partir del hígado de pollo. 2. Determinar la presencia de glucosa por medio de la reacción de Molish para hexosas. INSTRUCCIONES O CONSIDERACIONES PREVIAS 1. No entrar en el laboratorio sin que esté presente el profesor o responsable. 2. Seguir las instrucciones del profesor o persona responsable. 3. Estudiar cada experiencia antes de llevarla a cabo. 4. Mantener una actitud responsable, no se deben gastar bromas, correr ni gritar. 5. No comer, beber o fumar en el laboratorio de prácticas. 6. Utilizar mandil. Mantenerlos abrochados. 7. No llevar sandalias o calzado que deje el pie al descubierto. 8. Protege tus manos con guantes. 9. Usar de gafas de seguridad para proteger los ojos.

FUNDAMENTO Los seres vivos almacenan hidratos de carbono en forma de polisacáridos, que sirven como materiales de reserva. El almidón la inulina en los vegetales

superiores y el glucógeno en los animales. El glucógeno consta de unidades por enlaces glicosídicos 1,4 y cada 8 o 10 unidades se ramifican en enlaces glicosídicos 1,6. El glucógeno es especialmente abundante en el hígado y en músculo. Esta práctica consiste en el aislamiento de glucógeno hepático y posterior la identificación de glucosa presente en la muestra; se realiza en las siguientes fases: a) Extracción del glucógeno. b) Identificación de la glucosa. GLUCÓGENO El glucógeno es una sustancia blanca y amorfa que se encuentra en abundancia en el hígado y en los músculos y puede transformarse en glucosa cuando el organismo lo requiere; En la extracción del glucógeno del hígado de esta práctica implica un proceso de homogenización del tejido y ruptura celular, así como la extracción y la eliminación de las proteínas (desproteinizar) para evitar interferencias en los análisis posteriores. Para la valoración posterior de la glucosa (que en esta práctica solo se realizará de forma cualitativa) hay que someter al precipitado de glucógeno a una hidrólisis ácida, de esta forma se rompen los enlaces glicosídicos y se libera glucosa. EL glucógeno ess un polímero de residuos de glucosa muy grande y ramificada. El glucógeno aumenta la cantidad de glucosa disponible inmediatamente entre las comidas y durante la actividad muscular. Los principales sitios de almacenamiento de glucógeno son el hígado (hasta 10%) y el músculo esquelético (hasta 1 a 2%). La concentración es mayor en hígado pero la cantidad de glucógeno es mayor en el músculo debido a su mayor masa. El glucógeno muscular se puede agotar después de 1 hora de ejercicio intenso. Si esta glucosa no estuviera disuelta en el citosol su concentración sería de 0.4 M lo cual afectaría las propiedades osmóticas de la célula. La concentración del glucógeno es 0.01 μm. La mayoría de los residuos de glucosa están unidos por enlaces glicosídicos -1,4. Las ramificaciones se unen a por enlaces glicosídicos -1,6. Las cadenas de glucógeno están formadas por 12 a 14 residuos de glucosa y se extienden en niveles. Las cadenas internas tienen dos ramas unidas por enlaces glicosídicos 1→6. Las cadenas en el nivel externo no están ramificadas. ESTRUCTURA QUÍMICA DEL GLUCÓGENO

RUTA DE BIOSÍNTESIS DEL GLUCÓGENO

PROCESO DE OBTENCIÓN DE ENERGÍA

MATERIALES 1. Tubos de ensayo. 2. Gradilla. 3. Pipetas graduadas. 4. Toalla de lana. REACTIVOS 1. H2SO4 concentrado. 2. C2H5OH absoluto al 96%. 3. α-naftol (C10H8O). 4. Solución de KOH al 30%.

5. Solución saturada de Na2SO4 al 15%. EQUIPOS 1. Hornilla eléctrica. 2. Cronómetro. 3. Centrífuga. ACTIVIDADES POR DESARROLLAR/ TÉCNICA OPERATORIA O PROCEDIMIENTO 1. Pesar 10 g. de muestra (hígado) en un vidrio de reloj. 2. Agregar 5 mL. de KOH al 30%. 3. Triturar y pasar a un tubo de ensayo 180 x 16 mm. 4. Llevarlo a baño de agua hirviendo por 15 minutos. Retirar y enfriar. 5. Centrifugar por 5 minutos a 3000 rpm, descartar el precipitado. 6. Adicionar al líquido sobrenadante 0,5 mL. de Na2SO4 al 15 % y mezclar. 7. Añadir 8 mL. de C2H5OH al 96% y mezclar. 8. Llevar a baño de hielo durante 15 minutos. 9. Centrifugar por 5 minutos a 3000 rpm. Descartar el líquido sobrenadante. 10.Al sedimento (glucógeno) agregar 2 mL. de agua destilada y homogenizar. 11. Adicionar a 1 mL. de residuo 3 gotas de α-naftol + 3 mL. de H2SO4 concentrado (reacción de Molish). Observar la presencia de carbohidrato. RESULTADOS OBTENIDOS La extracción del glucógeno del hígado de esta práctica implica un proceso de homogenización del tejido y ruptura celular, así como la extracción y la eliminación de las proteínas (desproteinizar) para evitar interferencias en los análisis posteriores. Para la valoración posterior de la glucosa (que en esta práctica solo se realizará de forma cualitativa) hay que someter al precipitado de glucógeno a una hidrólisis ácida, de esta forma se rompen los enlaces glicosídicos y se libera glucosa. La valoración cualitativa de la cantidad de glucosa presente en cada hidrolizado se realizará con una sal de cobre (II) en medio alcalino (Reactivo de Nelson), aprovechando el carácter reductor que tienen todos los monosacáridos. La reacción que tiene lugar será:

Se pesó 3 gramos de hígado de pollo, y se le agregó 5 mL. de KOH al 30%, esta solución actúa de inmediato con el polisacárido presente en la muestra (glucógeno) produciendo una lisis intermedia y separando los carbono anomérico de las millones

da a descomponer los enlace α y β y desintegrando la cromolécula en unidades de glucosa simple. La centrifugación da a la interfase del sobrenadante y del precipitado, se scarta el precipitado y al sobrenadante se le adiciona 0,5 mL. de a2SO4 al 15%, para que la muestra adquiera más salinidad, el etanol al 95% esclarifica la molécula y destruye cualquier agente pirógeno y microbiano presente en la muestra (hígado). El baño de hielo precipita la solución, se lo lleva a centrifugar, y en este caso el precipitado presente en el tubo de ensayo, es lo que llamamos glucógeno.

Una vez extraído el glucógeno del hígado de pollo, se procede a alizarle la reacción de Molish. Para comprobar si el carbohidrato sente en el polisacárido del glucógeno es una hexosa se le añade otas de α-naftol y 2 mL. de H 2SO4 concentrado; y en caso de dar itivo, se forma un anillo violeta al que le denominaremos roximetilfurfural, que se produce a consecuencia de que el ácido oncentrado deshidrata la molécula, lo cual nos indica que químicamente el glucógeno se conforma por unidades de glucosa. REACCIÓN DE MOLISH

CONCLUSIONES 

Al concluir la práctica se pudo extraer glucógeno a partir del hígado de pollo, gracias a los reactivos y al equipo de centrífuga, el sedimento de la segunda centrifugación, es lo que se denomina glucógeno que es importante al momento de la identificación.



En la reacción de Molish hace que dicha clasificación se debe al tiempo que tarda en formarse el anillo color rojo violeta en el tubo ya que el ácido sulfúrico concentrado [H2SO4] permite que los glúcidos se deshidraten formando compuestos furfúricos; En

conclusión se podrá decir en nuestro caso las hexosas dan hidroximetilfurfural. RECOMENDACIONES

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Utilizar siempre la técnica operatoria que el docente indique Usar correctamente los reactivos, y no intentar contaminarlos con pipetas sucias. Utilizar las medidas de protección obligatorias en una práctica de laboratorio. Controlar el tiempo previsto en la práctica, esto dependerá el éxito de la misma. En caso de tener contacto con el KOH al 30%, avisar al director de laboratorio y lavar las manos con abundante agua del grifo.

ANEXOS

BIBLIOGRAFÍA

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Díaz Zagoya I. C., y J. Gómez. Bioquímica 2ª. Ed. 1995 Interamericana. México, D. F. 750 págs.

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Mathews J. Linch. Métodos de Laboratorio 2ª. Ed. Interamericano. México, D. F.

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Murray R. et al. Bioquímica de Harper 16ª y 17ª Ed. 2007 El Manual Moderno. México, D. F.

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Mathews, C.K. et al Bioquímica. 3ª. Ed. Pearson Educación, S. A. Madrid, 2002.

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Donald Voet, et al. Fundamentos de Bioquímica. 2ª. Ed. Editorial Médica Panamericana, Argentina, 2008.

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Lehninger, A. L., Nelson, D. L., Cox, M. M., 2005. Principios de Bioquímica.Ediciones Omega, S.A. Segunda Edicion. España. 1152

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http://www3.uah.es/bioquimica/Sancho/farmacia/practicas/glucogeno.pdf...