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Determinación cualitativa de anti-estreptolisina O(ASO)Nombre de la técnica: ASO-Latex. Aglutinación en porta.Principio del método: El ASO-Látex es una técnica de aglutinación en porta para ladetección cualitativa y semicuantitativa de anti-estreptolisina O (ASO) en suero humano. Las partículas de l...

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Determinación cualitativa de anti-estreptolisina O (ASO) Nombre de la técnica: ASO-Latex. Aglutinación en porta.

Principio del método: El ASO-Látex es una técnica de aglutinación en porta para la detección cualitativa y semicuantitativa de anti-estreptolisina O (ASO) en suero humano. Las partículas de látex recubiertas con estreptolisina O (SLO) son aglutinadas por anticuerpos ASO presentes en la muestra del paciente.

Reactivos: Látex: Suspensión de partículas de látex cubiertas con SLO, pH 8.2. Conservante. Control + (Tapón rojo)

Suero humano, con una concentración de ASO > 200 UI/mL.Conservante.

Control (Tapón azul)

Suero animal. Conservante.

Muestras: Suero fresco. Estable 7 días a 2-8oC o 3 meses a -20oC. Las muestras con restos de fibrina deben ser centrifugadas antes de usar. No utilizar muestras altamente hemolizadas o lipémicas.

Procedimiento: Método cualitativo 1. Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad del ensayo disminuye a temperaturas bajas. 2. Depositar 50 μL de la muestra a ensayar y una gota de cada uno de los controles Positivo y Negativo, sobre círculos distintos de un porta. 3. Mezclar el reactivo de ASO- látex vigorosamente o con el agitador vórtex antes de usar. Depositar una gota (50 μl) junto a cada una de las gotas anteriores. 4. Mezclar las gotas con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la superficie interior del círculo. Emplear palillos distintos para cada muestra. 5. Situar el porta sobre un agitador rotatorio a 80 – 100 r.p.m. y agitar durante 2 minutos. El exceso de tiempo puede originar la aparición de falsos positivos. Método semicuantitativo 1. Realizar diluciones dobles de la muestra en solución salina 9 g/L. 2. Proceder para cada dilución, como en la prueba cualitativa.

Cálculos: La concentración aproximada de ASO en la muestra del paciente se obtiene aplicando la siguiente fórmula: 200 x Título de ASO = UI/mL

Valores de referencia: Hasta 200 UI/mL (adultos) y 100 UI/mL (niños < 5 años). Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores

de referencia.

Antiestreptolisinas Definición de neutralización En inmunología cuando hablamos de neutralización, nos referimos a un método inmunoserológico debido a que es una prueba que se utiliza para detectar anticuerpos que neutralizan la toxicidad de algunas moléculas o la inefectividad de los virus o las bacterias. Estos anticuerpos se fijan a la molécula tóxica e impiden que se produzca el daño. Como prueba para evaluar la presencia de anticuerpos neutralizantes se toma un modelo biológico, como es el caso del ratón, al que se le administra un suero para estudiar y posteriormente se le inocula la toxina. Si se observa daño por la toxina, indica que el suero inoculado inicialmente no contenía anticuerpos neutralizantes; si no se observa daño, indica que el suero inoculado contenía anticuerpos neutralizantes, los cuales se combinaron con la toxina (reacción Ag-Ac) y la neutralizaron.

Características de las endotoxinas

Las endotoxinas son complejos lipopolisacáridos que se encuentran en las membranas celulares de las bacterias Gram negativas desencadenantes de la respuesta inmunogénica y capaces de provocar efectos nocivos. Características: ➢ Parte integral de la pared celular de bacterias gramnegativas. (Sólo se encuentran en bacterias gramnegativas) ➢ Lipopolisacáridos complejos. ➢ Relativamente estable a temperaturas mayores de 60ºC durante horas sin perder su toxicidad. ➢ No se convierte en toxoide. ➢ Moderadamente tóxica; mortal para animales en cantidades de 10 a 100 microgramos. ➢ Dosis letal muy grande. ➢ No se encuentran receptores específicos sobre las células. ➢ En general produce fiebre en el hospedero por liberación de interleucina-1 y otros mediadores ➢ Síntesis dirigida por genes cromosómicos. ➢ Débilmente inmunógena; los anticuerpos son antitoxina y protectores.

Características biológicas de las exotoxinas Son proteínas secretadas por el patógeno durante su crecimiento,termolábiles,de

acción específica y de gran actividad. Características: ➢ Producidas por bacterias gramnegativas y grampositivas ➢ Polipéptidos de PM de 10 000 a 90 000. ➢ Altamente tóxica; mortal para animales en cantidades de microgramos o menores. ➢ Altamente antígena; estimulan al aumento de títulos de la antitoxina. (La antitoxina neutraliza la toxina). ➢ Relativamente inestables; toxicidad con frecuencia destruida con rapidez mediante calentamiento a temperatura mayores de 60ºC. ➢ Por lo general no produce fiebre en el hospedero. ➢ Dosis letal pequeña. ➢ Convertida en toxoide antígeno, no tóxico, mediante formalina, ácido, calor, etcétera. Los toxoides se emplean para inmunizar (ejemplo: toxoide tetánico). ➢ Suele unirse a receptores específicos sobre la célula.

Ejemplos de las exotoxinas

Microorganismo

Enfermedad

Toxina

Clostridium tetani

Tétanos

Neurotoxina

Staphylococcus aureus

Síndrome del shock tóxico

TSST-1

Clostridium botulinum

Botulismo

Neurotoxina

Shigella dysenteriae

Disentería

De Shiga (STX)

Streptococcus pyogenes

Faringitis bacteriana, impétigo, fiebre

Estreptolisina “O” Estreptolisina “S”

escarlatina, Síndrome shock-tóxico estreptocócico, pioderma, erisipela, fascitis necrosante, shock tóxico,fiebre reumática, glomerulonefritis aguda:

Hialuronidasa Toxina eritrogénica Estreptoquinasa

Hemolisinas Las Hemolisinas son anticuerpos del suero que cuando actúan con el sistema complemento tienen el poder de usar o destruir a los eritrocitos, aunque también pueden alterar su membrana permitiendo la salida de la hemoglobina. La naturaleza de las Hemolisinas es desconocida; no son sustancias químicas; algunos autores creen que son de la naturaleza de los fermentos lipolíticos; para otros, las Hemolisinas son identificadas con la fracción globulina del suero, en contradicción con las Hemolisinas producidas por bacterias, que en el concepto de Cornell y Holby, y otros, son considerados com o grasas bacteriales en estado coloidal Estreptolisina “S”: La estreptolisina S es una hemolisina producida por los estreptococos en presencia de suero (de ahí “S”) o en presencia de una variedad de otras sustancias tales como albúmina, alfa-lipoproteína, RNA. La estreptolisina S no es antigénica. Tiene la capacidad de dañar la membrana de leucocitos, plaquetas y organelos subcelulares. No es inactivada por el oxígeno pero es termolábil. Antiestreptolisinas “O”: Las antiestreptolisinas (ASL) son anticuerpos específicos contra productos extracelulares de Streptococcus pyogenes (estreptococos del grupo A: GAS), entre

los cuales la antiestreptolisina O (ASlO) es la más empleada en los análisis de laboratorio. La determinación de la antiestreptolisina O proporciona información útil para el diagnóstico y la monitorización de las infecciones humanas por estreptococos, como amigdalitis, otitis, erisipela, escarlatina y enfermedades asociadas como la fiebre reumática o la glomerulonefritis. Los anticuerpos contra la estreptolisina O pueden detectarse entre 1 y 3 semanas después de la infección, y los valores máximos se alcanzan entre 3 y 6 semanas después. Los valores patológicos de ASO indican siempre una infección por estreptococos, mientras que los resultados negativos no excluyen la posibilidad de una infección por GAS actual o pasada.

Valores de referencia de cada una de las pruebas del perfil

PERFIL REUMÁTICO ASLO: Hasta 200 UI/mL (adultos) y 100 UI/mL (niños < 5 años). PCR: Hasta 6 mg/L FR: Hasta 8 UI/mL

Velocidad de sedimentación globular: 50 años:

Mujeres 0-30 mm/h Hombres 0-20 mm/h

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