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Vermander Steve 2BCCC Manipulation n°9 : Dosage des lipides totaux par turbidimétrie Bouyaddou Bilal Murekeyisoni Lucrèce Date de réalisation de la manipulation : 20/10/2017 Professeur : Mme Motte N° étudiant :

N° manipulation :

56

9

Cote :

Laboratoire de Chimie Clinique Dosage des lipides totaux par turbidimétrie

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Vermander Steve 2BCCC Manipulation n°9 : Dosage des lipides totaux par turbidimétrie Bouyaddou Bilal Murekeyisoni Lucrèce 1) But : Déterminer la concentration en g/l des lipides totaux d’une inconnue sérique par spectrophotométrie et pouvoir les comparer aux valeurs de référence afin de savoir si le patient est en bonne santé ou non. 2) Théorie : L’unique propriété qui est en commun parmi les lipides totaux sériques est leur solubilité dans un solvant organique peu polaire. Pour le dosage, on commencera par une extraction à l’isopropanol qui sera suivi d’une floculation quantitative. Le trouble qui en résulte est mesuré par turbidimétrie à 620 nm. 3) Matériel et méthodes : Matériel : - Isopropanol - Réactif floculant : composé de deux réactifs différents : - Solution (a) de sulfate de dextrane Concentration : 0,500 g/l Date de préparation : 29/09/2017 - Solution (b) de chlorure de magnésium Concentration : 0,1 M Date de préparation : 25/09/2017 Stockage : Stable à température ambiante - 2 séra standards de concentration 4,8 g/l et 11,2 g/l - Inconnue sérique n°2 - Centrifugeuse 4222 (2860 tours/min) - Spectrophotomètre n°2 (620 nm) - Petit matériel (tubes à essai, cuvettes de lecture, Parafilm, micropipettes, tips, berlins pour aliquote et pipette graduée 5 ml) Méthodes : Tableau 1: Récapitulatif des volumes pour la préparation des solutions Réactifs (ml) A (3x) S1 (2x) 3,8 3,8 Isopropanol 0,2 Sérum étalon Sérum inconnu 0,2 A = inconnue sérique à analyser ; S1 = standard 1 ; S2 = standard 2

S2 (2x) 3,8 0,2 -

Tous les échantillons sont traités en même temps ! Pour l’extraction, homogénéiser par retournement avec le Parafilm. Centrifuger 10 minutes à 2860 tours/min (position 4). Ne pas oublier au préalable de vérifier l’équilibrage de la centrifugeuse. Page | 2

Vermander Steve 2BCCC Manipulation n°9 : Dosage des lipides totaux par turbidimétrie Bouyaddou Bilal Murekeyisoni Lucrèce Pour la floculation, reprendre 1 ml de tous les tubes (4 tubes pour les filtrats de séra standard (S) et trois tubes de filtrat échantillon (A)) et ajouter 5ml de réactif floculant. Un blanc (TR) est également réalisé dans les mêmes conditions (1 ml d’isopropanol et 5 ml de réactif floculant). Le réactif floculant est obtenu en mélangeant en partie égale au moment de l’analyse les solutions a et b. Agiter par retournement. Laisser reposer 45 minutes et lire au spectrophotomètre à 620 nm contre le TR. Veillez à ne pas oublier d’homogénéiser par retournement juste avant la lecture pour que le trouble soit en suspension. Calculer la concentration en lipides totaux de l’inconnue sérique, par graphique, via la loi de Beer-Lambert (E = k.c.l) sur base de la droite de standardisation établie avec l’extinction (E) en fonction de la concentration en lipides totaux, qui permet de déterminer la constante k (pente de la droite d’étalonnage). Ceci permet d’obtenir la concentration en lipides totaux de l’inconnue grâce à l’extinction de l’inconnue mesurée, via la relation déterminée précédemment. 4) Résultats et discussions : Tableau 2 : Extinction en fonction de la concentration en lipides totaux

Echantillon

E1

E2

Standard 1 Standard 2 Inconnue sérique n°

0,241 0,561

0,221 0,576

(0,163)*

0,212

0,231 0,569

Concentration par graphique (g/l) 4,8 11,2

0,217

4,3

E moyen

0,222

Valeur non prise en compte car plus de 10% d’écart Graphique de la droite de standardisation

Graphique représentant l'extinction en fonction de la concentration en lipides totaux 0.6 f(x) = 0.05 x R² = 1

0.5 0.4 Extinction

*

E3

0.3 0.2 0.1 0 0

2

4

6

8

10

12

Concentration en lipides totaux (g/l)

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Vermander Steve 2BCCC Manipulation n°9 : Dosage des lipides totaux par turbidimétrie Bouyaddou Bilal Murekeyisoni Lucrèce E 0,217 = = 4,3 g/l k .l 0,0504 . 1 Discussions : La valeur de la première extinction de l’inconnue sérique est écartée de plus de 10% par rapport à l’extinction moyenne de l’inconnue sérique, ceci peut s’expliquer par une erreur de manipulation lors du pipetage des réactifs ou à cause d’une mauvaise homogénéisation de la solution. Les deux valeurs d’extinction pour chaque standard donnent un résultat assez proche. La valeur de l’extinction et de la concentration en lipides totaux pour l’inconnue sérique corrèlent bien avec la droite de standardisation du graphique. Calculs : 1) Avec le graphique : E = k.c.l → c =

5) Conclusion : Valeurs de référence : - Homme ou femme : 5 à 8 g/l - Femme enceinte : > 5 à 8 g/l Sur base des résultats de la concentration en lipides totaux de l’inconnue sérique et en comparant avec les valeurs de référence, je peux conclure que le patient n’est pas en très bonne santé comme il a une concentration de 4,3 g/l en lipides totaux, ce qui est en dessous des valeurs de référence de 5 à 8 g/l.

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