Enzimaimunoensaio ( Elisa) PDF

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Enzimaimunoensaio ( Elisa)...

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ENZIMAIMUNOENSAIO (ELISA) ● É feita a leitura com um espectrofotômetro adaptado ● Para realizar a leitura, usa-se uma enzima   E  LISA indireto:  ● É o mais utilizado para pesquisa de anticorpos ● Tem alta sensibilidade, alta especificidade e permite fazer várias amostras de uma só vez, utilizando pouco volume de amostra ● Baixo custo ● A placa já vem com o antígeno ● Exemplo: pesquisa de anticorpos contra toxoplasmose - IgG: ○ Adiciona sim uma amostra na placa contendo antígenos contra o toxoplasma ○ Se no soro houver anticorpos, haverá a formação do complexo ○ Para revelar a reação, adiciona-se um conjugado (anticorpo e enzima) , em seguida adiciona-se o substrato da enzima (H2O2 -> H2O+ O) e um cromógeno ○ O cromógeno é oxidado pelo produto da ação enzimática, e mudará de cor

○ Quanto mais antígeno houver na amostra, mais colorida fica. 

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   ELISA direto:  ● Em um poço contendo o antígeno, adiciona-se a amostra do paciente amostra do paciente, se houver anticorpos específicos para esse antígeno ele se liga e forma o complexo antígeno-anticorpo ● Posteriormente, adiciona-se o conjugado (uma enzima ligada a antígeno) ● É posto o substrato desta enzima. ● A reação realizada pela enzima é revelada com a adição de um cromógeno. 

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     ELISA sanduíche:  ● Pesquisa antígenos, mas também pode ser usado para pesquisa de anticorpos ● Exemplo: antígeno de superfície da hepatite B (HBs) ○ Não entendi corpo contido no poço, adiciona se amostra, se houver um anticorpo, ele se ligar a e formaram o complexo antígeno anticorpo ○ Adiciona-se o conjugado (antígeno anti-HBs e enzima) ○ Adiciona o substrato e o cromógeno ○ Haverá alteração de cor que será medido.    

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   ELISA por competição:  ● Chama-se Elisa por competição pois haverá uma competição entre os reagentes e amostras ● É mais usado para pesquisa de antígenos, mas também pode ser utilizada na pesquisa de anticorpos ● Não poço contendo anticorpo, adiciona se amostra e ao mesmo tempo, ou conjugado (um antígeno igual ao da amostra e uma enzima) ● Haverá uma competição do antígeno da amostra e o conjugado ● se houver mais antígeno na mostra, ela se ligar a mais do que o conjugado e depois da lavagem, a enzima ter ido embora e o substrato juntamente com cromógeno não sofreram alteração

● Neste caso, a cor é inversamente proporcional à quantidade de analito na amostra.  

   ELISA por captura:  ● Teste usado para pesquisas de anticorpos da classe IgM ● O IgM é um marcador de infecção de fase aguda, quando a doença ainda está se desenvolvendo ● Esse teste consegue eliminar alguns interferentes, como o fator reumatóide ● Pacientes com doenças auto-imunes principalmente artrite reumatóide, tem fator reumatoide circulante (FR)no corpo, este FR geralmente é um anticorpo da classe e IgM, que acabam interferindo nos testes e gerando resultados falso-positivos, e esse teste tem a capacidade de eliminar esses interferentes ● Para pesquisa de anticorpos da classe IgM, utilizam-se anticorpos do tipo IgG.

● Método: ○ Em uma placa contendo e IgG anti- IgM, adiciona-se a amostra, e se houver anticorpos IgM, ele se ligaram ao anticorpo e IgG anti- IgM presente na placa. ○ Adiciona-se um antígeno específico para o esse anticorpo IgM, eles se ligam ○ É adicionado então um outro anticorpo ligado a uma enzima e quando adicionado o substrato e o cromógeno, haverá formação de cor. ...