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FACULTAD DE MEDICINA DEPARTAMENTO DE FISIOLOGÍA Campus Universitario Avda. de Elvas, s/n 06006 Badajoz

PRACTICAS DE HEMATOLOGÍA

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DETERMINACIÓN DEL GRUPO SANGUÍNEO SISTEMA ABO Los antígenos de superficie son marcadores químicos específicos que se encuentran en la membrana de las células del organismo. Los antígenos presentes en la membrana de los eritrocitos determinan el grupo sanguíneo. El sistema más importante de los grupos sanguíneos humanos es el sistema ABO. La presencia o ausencia de los antígenos A y B, determina la división de los grupos sanguíneos humanos en A, B, AB y O, significando el grupo O la carencia absoluta de ambos antígenos. Los antígenos A y B presentes en los eritrocitos, cuando entran en contacto con su correspondiente anticuerpo, van a dar lugar a la aglutinación de los hematíes, por lo que también se denominan a estos antígenos aglutinógenos, y a los anticuerpos aglutininas. Cuando los eritrocitos de un sujeto presentan el antígeno A, su plasma contiene anticuerpos anti B. Del mismo modo si los eritrocitos de un sujeto poseen el antígeno B, en el plasma hay aglutininas anti A. El grupo O que no posee ningún aglutinógeno, presenta en su plasma aglutininas anti A y anti B. Y por última el grupo AB que posee ambos antígenos de superficie, no posee en su plasma anticuerpos contra ningún antígeno.

Cómo se heredan los grupos sanguíneos Los grupos sanguíneos están determinados por la herencia, siguiendo las leyes mendelianas. Son los genes los que los codifican y en el caso del grupo sanguíneo, vendrá determinado por los alelos (variantes del mismo gen codificante) que posean ambos padres y su combinación en los gametos que dan lugar al nuevo ser. El gen que determina el grupo sanguíneo tiene tres variantes o alelos: A, B y O. Cada persona tiene dos alelos, provenientes de su padre y de su madre. Es decir, aunque el grupo sanguíneo sea A, B, O o AB, la persona tendrá una combinación de genes que puede ser AA, AO, AB, OO, BB y BO. Los híbridos serán del grupo sanguíneo del alelo más dominante, en este caso A o B, pero pueden tener un alelo O que no se manifiesta pero que si puede transmitirse a la descendencia al pasar a uno de los gametos, que son haploides (es decir solo tienen un juego de genes, no el juego doble que tienen el resto de las células). los alelos son dominantes (A y B) o recesivos (O)

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Para que una transfusión sea viable es necesario que los hematíes inyectados no sean aglutinados por las aglutininas del receptor. DADOR UNI VE RSAL O A

B AB

RE CEPT OR UNIV ERS AL

SISTEMA RH Otros antígenos existentes en la membrana de los eritrocitos son los que constituyen el sistema Rh. El antígeno más importante de este sistema es el denominado antígeno D. Las personas que presentan dicho antígeno se les denomina Rh+ (el 85% de la población), los que no lo presentan son los Rh-.

MATERIAL Suero anti A, suero anti B y suero anti D

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Portaobjetos Lancetas estériles Algodón Alcohol

MÉTODO Se deposita una gota de suero anti A, anti B y anti D, sobre 2 portaobjetos (1 para el sistema ABO y otro para el Rh) en cada extremo. Se deposita una gota de sangre sobre cada anticuerpo, se mezcla y se observa la presencia o no de la reacción de aglutinación.

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DETERMINACIONES ANALITICAS HEMATOLÓGICAS

DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE HEMOGLOBINA Se utiliza el método de la cianmetahemoglobina, que consiste en la dilución de la sangre en una solución de ferricianuro potásico y cianuro potásico. El ferricianuro potásico oxida la hemoglobina a metahemoglobina y el cianuro potásico la transforma en cianmetahemoglobina. La capacidad de absorción de la solución se mide en un espectrofotómetro a 540nm y se compara con la de una solución de cianmetahemoglobina estándar. MATERIAL Solución de Drabkin: ¡solución venenosa! Ferricianuro potásico (200mg)

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Cianuro potásico (50mg) Bicarbonato sódico (1gr) disuelto en 1L de H2O (d). Solución estándar de hemoglobina (15gr/dl) MÉTODO Pitear 10 µl de sangre en 2.5ml de solución de Drabkin Mezclar Dejar incubar esta solución a temperatura ambiente (3 min.) Medir a 540nm frente a blanco (2,5ml solución + 10µl H2O (d). Medir absorbancia estándar (2.5ml solución + 10 µl de hemoglobina estándar). CÁLCULO

Abs muestra x concentración estándar ( 15 gr/dl) =

gr/dl

Abs estándar Valores normales: Hombres: 13.8 a 17.2 gr/dl. Mujeres: 12.1 a 15.1 gr/dl.

HEMATOCRITO El hematocrito es la relación del volumen de eritrocitos en el volumen de sangre total. Se expresa como porcentaje o fracción decimal. Para ello una muestra de la sangre que se mantiene anti coagulada, se separa por efecto de la gravedad en diversas capas de acuerdo con el peso específico de sus distintos constituyentes. Los eritrocitos en la parte inferior del tubo, por encima los leucocitos y por encima de éstos las plaquetas. MATERIAL Sangre incoagulada (EDTA o heparina) Capilar de microhematocrito Plastilina Lector de microhematocrito o regla milimetrada MÉTODO El capilar se llena por atracción capilar a partir de la muestra de sangre, debe llenarse unos 3 cm del capilar.

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Se retira el capilar de sangre y se elimina cualquier traza de sangre de la superficie externa. El extremo se cierra con plastilina. Centrifugar el capilar con una centrífuga para hematocrito o bien una centrífuga convencional; para ello se introduce el capilar en un tubo de ensayo, y se centrifuga a 3000rpm durante 5 min.

CÁLCULO Con una regla milimetrada, medir la longitud que ocupa en el capilar la columna formada por glóbulos rojos sedimentados (Y) y referirla en tanto por ciento a la longitud total que ocupa la sangre que llena el capilar (X). Hematocrito (Y/X ) x 100 = %

ÍNDICES ERITROCITARIOS

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VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO VCM. Es el volumen medio de los eritrocitos. Se expresa en fentolitros 1 fl= l0-15 L( valor normal 80-100) Ejemplo Hto: 45% = 0,45L N° hematies: 5 x 10 6/mm3 = 5 x 10 6/ l = 5 x 1012 hem/ L VC M Hcto x 10 = Nº hematíes

45 X 10 = 5

90 fL

HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA. HCM : Contenido de hemoglobina en el promedio de eritrocitos Se expresa en pg. 1pg = 10-12 gr ( valor normal 27 —32 pg) Ejemplo. Hb : l5 gr/dl Nº hematies : 5 x 10 6/mm3 = 5 x 10 6/ l = 5 x 1012 hem/ L Hb x 10 HCM

=

Nº hem

15 x 10 =

5

= 30 pg

CONCENTRACIÓN CORPUSCULAR MEDIA DE HEMOGLOBINA O CCMH O CHMC Concentración media de hemoglobina en un volumen determinado de concentrado de hematies. Se expresa en gr/ l00m (31-37 gr/100ml) Ejemplo. Hb : l5 gr/dl Hto: 45% = 0,45L CCMH =

Hb x 100

=

15 x 100

Hto

=

33 gr/ dl

45

15 Hb( gr/dl =

= 33 gr / dl 0,45

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Nombre Calcule su hematocrito Calcule su concentración de hemoglobina Cúal es su grupo sanguíneo A quien puede dar? De quien puede recibir? ¿ que grupos sanguíneos son estas muestras?

Calcule los índices eritrocitarios de un sujeto que presenta los siguientes valores

Varón Hematies 4,2X 106/mm3 Hto 32% Hb 9gr/dl.

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