Informe Cromatografía de Capa Fina PDF

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INFORME PRÁCTICA 9. CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA (CCF)Autor del informe: Alejandro Rojas García Autor de la práctica: Alejandro Rojas García Asignatura: Operaciones Básicas de Laboratorio Número y Nombre de la Práctica: 9, Cromatografía de capa fina Fecha de realización: 23 de Mayo de 2015 Fecha de en...

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INFORME PRÁCTICA 9. CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA (CCF) Autor del informe: Alejandro Rojas García Autor de la práctica: Alejandro Rojas García Asignatura: Operaciones Básicas de Laboratorio Número y Nombre de la Práctica: 9, Cromatografía de capa fina Fecha de realización: 23 de Mayo de 2015 Fecha de entrega: 25 de Mayo de 2015 Profesor Responsable de la Práctica: Francisco Javier Salva García y Dolores Bellido Milla INTRODUCCIÓN: La cromatografía es una técnica de separación relativamente nueva que se basa en la distribución selectiva de compuestos en dos fases distintas: estacionaria (sin movimiento) y móvil. Existe la cromatografía en capa fina, con fines analíticos, y en columna, que se centra más en la separación. En esta sesión nos centraremos en la de capa fina, y sobre todo en la de adsorción (fase estacionaria sólida y fase móvil líquida). La placa que usaremos viene prefabricada cubierta con la fase estacionaria (sílica gel). Los reactivos que usaremos reaccionarán con este gel mediante interacciones dipolo-dipolo o puentes de hidrógeno. La CCF (cromatografía en capa fina) es la más usada cuando se realiza este tipo de pruebas, debido a que su dificultad, velocidad y coste son muy escasos. OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA: El principal objetivo de la práctica en el conocimiento y el manejo de la técnica de la cromatografía así como de términos referidos a esta técnica, además del uso de nuevos instrumentos y el uso de patrones para determinar sustancias problema. MATERIALES Y REACTIVOS: MATERIALES: – Placas de cromatografía – Vaso de precipitado de 100 ml – Vidrio de reloj – Probeta de 10 ml – Capilares de vidrio REACTIVOS: – Acetato de etilo – Hexano – Patrón 1: Mentol – Patrón 2: Acetoacetato de etilo – Patrón 3: Pirogalol – Patrón 4: Floroglucina – Patrón 5: Benzofenona – Muestras A y B – Revelador anisaldehído PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL: – Antes de empezar, se recomienda no usar agua para lavar los instrumentos, pues es un disolvente demasiado polar que podrá interceder con las sustancias y reactivos que se usen. – En una placa dibuje (siempre con lápiz para evitar que la tinta entre en contacto con algún disolvente) una línea paralela y a 1 centímetro de la base, y bajo la línea separe el espacio en siete puntos más o menos equivalentes y separados entre sí y al borde unos 5 milímetros. Prepare cuatro placas. – En el recipiente en el que se colocan los capilares vierta una pequeña cantidad de acetato de etilo, lo que evitará mezclas entre reactivos no deseadas. Ahora, en cada uno de los

siete puntos dibujados en la placa deberá colocar una gota de cada uno de los siete reactivos con ayuda de los capilares; para ello, tome el capilar del recipiente y presiónelo suavemente contra un trozo de papel hasta eliminar todo el acetato de etilo contenido. Después, introdúzcalo en el interior del frasco del reactivo unos segundos, llévelo a la placa, presione sobre el punto correspondiente y forme una mancha más o menos consistente que no entorpezca ni ocupe otro espacio que no sea el suyo. Después, elimine el exceso presionando el capilar sobre el papel y devuélvalo a su recipiente hasta nuevo uso. Repítalo con todos los reactivos. – Una vez finalizado, prepare el tanque de elución en el vaso de precipitado con 5ml de distintas concentraciones de acetato de etilo y hexano (20%, 40%, 60% y 80% para cada caso). Mediante los cálculos necesarios, prepare la mezcla en la probeta (el volumen será aproximado) y añádala al vaso de precipitado. Tome con las pinzas la placa preparada y colóquela de pie en el vaso con las muestras hacia el interior de la mezcla, suéltela de manera que no se caiga y cierre el tanque de elución con un vidrio de reloj (pues el contenido del vaso en contacto volatiliza los compuestos que se están usando y corre el riesgo de que desaparezcan y obstaculicen la realización práctica). La mezcla comenzará a subir a través de la placa; cuando queden unos 0,5 cm para llegar al borde superior extraer la placa del tanque. – Lleve la placa a la lámpara de rayos UV, que le realizará un revelado físico marcando con color el lugar en el que se encuentran ahora los productos. Dibuje con lápiz las señales obtenidas. – A continuación, se le realizará a la placa el revelado químico. Para ello bañe la placa por completo en anisaldehído, déjela secar un poco sobre papel y caliente con una pistola de calor (aplicar el calor por la zona de aluminia, no por la del gel de sílice) hasta que los productos se coloreen. Realizar el mismo procedimiento explicado en tres placas más con distintas concentraciones en el tanque de elución y comprobar resultados. RESULTADOS Y DISCUSIÓN: Mediante la siguiente ecuación:

Rf=

(distancia recorrida por el compuesto) mm (distancia recorrida por el disolvente)

podremos conocer en factor de retención de cada sustancia patrón. Placa nº 1

Recorrido disolvente = 35 mm

Patrón Nº

Recorrido (mm) 1 2 3 4 5

Rf

16,5 12,5 0 0 22,5

0,47 0,36 0 0 0,64

Sistema eluyente = 4:1 Hex/Acet.

UV

Color

Nombre

Si Si Si Si Si

Azul Rosa Morado Rojo Incoloro

Mentol Acetoacetato de etilo Pirogalol Floroglucina Benzofenona

En el sistema eluyente, 4 partes serán de hexano y 1 de acetato de etilo, por lo que en 5 ml 4 serán de hexano y 1 de acetato de etilo. Placa nº 2

Recorrido disolvente = 35 mm

Patrón Nº

Recorrido (mm) 1 2 3 4 5

29 25 10,5 4 29,5

Rf 0,83 0,71 0,3 0,11 0,84

Sistema eluyente = 3:2 Hex/Acet.

UV

Color

Nombre

No Si Si Si Si

Azul Rosa Morado Rojo Incoloro

Mentol Acetoacetato de etilo Pirogalol Floroglucina Benzofenona

En el sistema eluyente, 3 partes serán de hexano y 2 de acetato de etilo, por lo que en 5 ml 3 serán de hexano y 2 de acetato de etilo.

Placa nº 3

Recorrido disolvente = 35 mm

Patrón Nº

Recorrido (mm) 1 2 3 4 5

Rf

30 27 19 17 29

0,86 0,77 0,54 0,49 0,83

Sistema eluyente = 2:3 Hex/Acet.

UV

Color

Nombre

No Si Si Si Si

Azul Rosa Morado Rojo Incoloro

Mentol Acetoacetato de etilo Pirogalol Floroglucina Benzofenona

En el sistema eluyente, 2 partes serán de hexano y 3 de acetato de etilo, por lo que en 5 ml 2 serán de hexano y 3 de acetato de etilo. Placa nº 4

Recorrido disolvente = 35 mm

Patrón Nº

Recorrido (mm) 1 2 3 4 5

29 26 16,5 11 28,5

Rf 0,83 0,74 0,47 0,31 0,81

UV

Color

Nombre

No Si Si Si Si

Azul Rosa Morado Rojo Incoloro

Mentol Acetoacetato de etilo Pirogalol Floroglucina Benzofenona

En el sistema eluyente, 1 parte serán de hexano y 4 de acetato de etilo, por lo que en 5 ml 1 será de hexano y 4 de acetato de etilo. A continuación, las placas obtenidas tras la realización del proceso experimental: PLACA 1

PLACA 2

PLACA 3

PLACA 4

Si observamos y comparamos los resultados de los patrones y las muestras problemas

podemos llegar a la conclusión de que: – La muestra A está formada por pirogalol y floroglucina, demostrado por revelado químico, y por benzofenona, demostrado por revelado físico. – La muestra B está formada por mentol y acetoacetato de etilo, demostrado por revelado químico. Se puede demostrar viendo cómo coinciden los colores y la distancia recorrida de los productos en las muestras problema, que se corresponden con algunas muestras patrón, tanto en el caso químico como físico. En el caso de que una placa se intentara volver a eluir en el mismo eluyente (misma concentración) no sucedería nada, pues los productos ya han avanzado lo máximo posible durante la primera elución, y es imposible que durante una segunda elución de misma concentración avance más. CONCLUSIÓN: Se concluyen y comprueban las capacidades analíticas y de purificación de materiales de la cromatografía en capa fina, que nos ha permitido conocer la composición química de dos muestras problemas a través de otras soluciones patrón. También ha sido posible conocer los R f de cada una de las sustancias, así como saber cuál es el revelado adecuado para cada una de ellas. BIBLIOGRAFÍA: – Cuaderno de laboratorio → Anotaciones, información sobre la cromatografía, explicaciones... – http://laboratoriotecnicasinstrumentales.es/cromatografa → Información general sobre la técnica de cromatografía. – http://www.uprm.edu/biology/profs/velez/fina.htm → Usado como ejemplo para formar y corregir el informe....