Manual DE Todos LOS Métodos Analíticos Usados EN EL Laboratorio Clínico PDF

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Manual de métodos analíticos en el laboratorio ProvLab

MANUAL DE TODOS LOS MÉTODOS ANALÍTICOS USADOS EN EL LABORATORIO CLÍNICO Serie: MOL-003

2021

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Manual de métodos analíticos en el laboratorio ProvLab

Contenido HEMATOLOGÍA ...............................................................................................................................3 Punción cutánea o capilar ..........................................................................................................3 Fundamento ...........................................................................................................................3 Procedimiento ........................................................................................................................4 Punción venosa...........................................................................................................................5 Fundamento ...........................................................................................................................5 Procedimiento ........................................................................................................................5 Hematocrito (hto) o volumen celular compacto (vcc) o volumen del paquete celular (vpc) ....7 Fundamento ...........................................................................................................................7 Micrométodo ..........................................................................................................................7 Macrométodo de Wintrobe ...................................................................................................8 Conteo de glóbulos rojos ............................................................................................................8 Fundamento ...........................................................................................................................8 Procedimiento ........................................................................................................................9 Conteo de leucocitos ............................................................................................................... 10 Fundamento ........................................................................................................................ 10 Procedimiento ..................................................................................................................... 11 Grupo sanguíneo ..................................................................................................................... 14 Fundamento ........................................................................................................................ 14 Procedimiento ..................................................................................................................... 14 Factor de crecimiento plaquetario .......................................................................................... 15 Fundamento ........................................................................................................................ 15 Procedimiento ..................................................................................................................... 15

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Contenido Determinación del tiempo de protrombina .................................................................................17 Fundamento .........................................................................................................................17 Procedimiento ......................................................................................................................17 Determinación del tiempo de tromboplastina parcial activada...............................................18 Fundamento .........................................................................................................................18 Procedimiento ......................................................................................................................18 Determinación de la proteína C reactiva (PCR) ........................................................................19 Fundamento .........................................................................................................................19 Procedimiento ......................................................................................................................19 Determinación de HCG (prueba en tira) suero/orina...............................................................20 Fundamento .........................................................................................................................20 Procedimiento ......................................................................................................................20 Resultados y valores de referencia...........................................................................................21 Conteo de glóbulos rojos ......................................................................................................21 Conteo de leucocitos ............................................................................................................22 Grupo sanguíneo ..................................................................................................................22 Referencias ...................................................................................................................................23

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HEMATOLOGÍA Punción cutánea o capilar Fundamento Los métodos de extracción nos permiten recoger muestras sanguíneas para su análisis en el laboratorio. Es decir, nos permite obtener una muestra de sangre adecuada para efectuar su análisis hematológico, bioquímico o microbiológico. Dentro de los métodos de extracción sanguínea encontramos la punción capilar. Ésta consiste en utilizar una lanceta y punzar un dedo. Preferiblemente se pincha la primera falange del dedo anular, es decir, su falange más distal. También pueden utilizarse el dedo corazón o el dedo índice. Es una técnica que cuenta con el inconveniente de tener que extender rápidamente la gota de sangre obtenida antes de que ésta se coagule. También presenta dificultad e imposibilidad de conseguir una gran cantidad de sangre y de introducirla en un tubo con anticoagulante. Existe cierta controversia con la utilización de la técnica de la punción capilar en cuanto a quién debería y quién no debería realizarla. Hoy en día es una técnica de obligatorio uso, junto con un glucómetro, en pacientes con diabetes. Sus familiares se ven obligados a aprender la técnica para tener un control exhaustivo de los niveles de glucosa en sangre. La controversia nace de la particularidad de que familiares y enfermos no son personal sanitario (Rodríguez, 2017).

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Procedimiento 1. Seleccionar un punto adecuado para la punción. En lactantes se elige por lo general la superficie plantar externa del talón. En niños de mayor edad puede utilizarse la superficie palmar de la última falange del segundo, tercero o cuarto dedo de la mano. Otro punto es el lóbulo de la oreja. La zona de punción no debe presentar edema ni haberse puncionado previamente. 2. Calentar la zona de la punción con una compresa húmeda a temperatura no superior a los 42°C. Con ello se aumenta el flujo de sangre a través de arteriolas y capilares. 3. Limpiar la zona de punción con una solución acuosa de isopropanol al 70 % Realizar la punción únicamente con la lanceta con cuchilla de menos de 2.4 mm de longitud para no lesionar el calcáneo. 4. Desechar la primera gota de sangre enjuagándola con una gasa estéril, regular el flujo de sangre con el pulgar. No hay que realizar maniobras de “ordeñador” ya que se puede hemolizar la muestra e inducir un exceso de tejido hístico. 5. Recoger la muestra en un recipiente adecuado para volúmenes comprendidos entre 1-200 microlitros. Suelen utilizarse micropipetas desechables de vidrio y de extremo abierto. Existen pipetas heparinizadas. 6. Sellar el recipiente de una muestra introduciendo un fragmento de arcilla en cada uno de los extremos de la micropipeta. 7. Etiquetar el recipiente con la fecha, hora de extracción y datos del paciente.

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Punción venosa Fundamento Los métodos de extracción nos permiten recoger muestras sanguíneas para el análisis de sangre en el laboratorio. Es decir, nos permite obtener una muestra de sangre adecuada para efectuar su análisis hematológico, bioquímico o microbiológico. Dentro de los métodos de extracción sanguínea encontramos la punción venosa. Se define como el arte de introducir una aguja en una vena para así poder acceder al torrente sanguíneo. Mediante esta vía se logra extraer sangre, y administrar vacunas o medicamentos, entre otros fines. De la extracción de sangre se realizan análisis, los cuales pueden ser de rutina para apoyar el diagnóstico de enfermedades o como control de salud (Rodríguez, 2017). Procedimiento 1. Identificación del paciente Se verifica con el paciente la real correspondencia entre éste y la etiqueta del tubo. No hay que extraer ninguna muestra sin identificar adecuadamente al paciente. Si el análisis que solicita requiere estado de ayuno, hay que verificar que el paciente se encuentre en dicho estado. 2. Eliminar en lo posible la tensión psicológica del paciente. 3. Selección de la vena para punción. Se solicita al paciente cierre el puño para que las venas resulten más palpables, seleccionando la vena más adecuada. Se prefieren las venas de la fosa antecubital y en particular la vena cubital interna y cefálica. También pueden utilizarse las venas del tobillo, de la muñeca y de la mano, si existiera un catéter intravenoso en un brazo se utilizará el brazo contrario para la extracción.

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5. Hacer asepsia en el lugar de la punción Con una torunda embebida de una solución de alcohol isopropílico al 70%. 6. Se coloca el torniquete debe aplicarse varios centímetros por encima de la zona de punción, no más de 2 minutos. 7. Se realiza la venopunción Se penetra a través de la piel con la aguja vacutainer, jeringa o mariposa según sea el caso, formando un ángulo de 15 grados con el brazo del paciente y con el bisel de la aguja hacia arriba. Hay que introducir la aguja con suavidad, pero con la suficiente rapidez para evitar molestias al paciente. Si se utiliza jeringa, hay que tirar el émbolo hacia atrás en la medida de la sangre va fluyendo. No deben realizarse movimientos con rapidez excesiva ya que la sangre puede hemolizarse o colapsarse la vena. 8. Cuando la sangre comienza a fluir se puede retirar el torniquete. 9. Una vez que se ha extraído la muestra hay que indicar al paciente que relaje su puño, colocando suavemente sobre el punto de punción una torunda embebida en alcohol isopropílico al 70 % y retirar la aguja. Es de suma importancia retirar la aguja de la jeringa antes de vaciar la sangre a los tubos para evitar hemólisis.

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Hematocrito (hto) o volumen celular compacto (vcc) o volumen del paquete celular (vpc) Fundamento Se basa en la centrifugación de la sangre total para medir el espacio que los eritrocitos ocupan con el de sangre total para medir el espacio que los eritrocitos ocupan, es decir que el hematocrito de una muestra de sangre es la relación del volumen de eritrocitos con el de sangre total. Indica la masa total de rojos (Ramos, 2016). Micrométodo 1. Homogeneizar la muestra. 2. Llenar el capilar (3/4 partes de la capacidad del capilar). Se sella el extremo vacío. Los tubos llenos se colocan en los canales o surcos radiales del aparato de centrifugación con el extremo cerrado dirigido hacia afuera. 3. Limpiar con gasa o papel. 4. Centrifugar a 12,000 r.p.m. durante 5 min, a menos que el hematocrito exceda del 50%, en este caso se centrifuga durante 5 min adicionales, con el objeto de asegurar que se ha reducido al mínimo la cantidad de plasma atrapado. 5. Leer inmediatamente. Los tubos capilares no están graduados. La longitud de toda la columna de eritrocitos solo debe medirse en cada caso con una regla milimetrada. 6. El resultado se expresa en %.

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Macrométodo de Wintrobe 1. Se homogeneiza la muestra. 2. Se llena el tubo de wintrobe. A medida que se va llenando el tubo, eleve la punta de la pipeta, pero manténgala por debajo del menisco de sangre con el objeto de evitar la formación de burbujas. 3. Se centrifuga 30 min a 3000 r.p.m. 4. Se mide la escala de la derecha. 5. Se multiplica por 12.

Conteo de glóbulos rojos Fundamento Para el conteo de eritrocitos, se usan métodos sistemáticos que son más rápidos y precisos, y los métodos manuales. Todo método manual de recuento celular incluye 3 fases: • Dilución de la sangre. • Muestreo de la sangre diluida en un volumen. • Recuento de células en ese volumen Una suspensión celular se caracteriza por presentar un número de partículas microscópicas dispersas en un fluido.

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Habitualmente será necesario determinar tanto la densidad de las células en la suspensión como el porcentaje de éstas que son viables. Para determinar la densidad de las células se emplean diferentes técnicas, desde la relativamente simple cámara de contaje celular de la que existen numerosas variantes, entre ellas la que utiliza la cámara de Neubauer Para el conteo de eritrocitos, es necesario diluir la sangre con el líquido de Hayem, en una proporción exacta. Luego se examina en el microscopio con una cantidad pequeña colocada en la cámara de Neubauer, contando el número de elementos que se encuentran en el retículo de la cámara y mediante una operación se obtiene el número total. Procedimiento 1. Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica punción venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA. 2. Colocar el tubo de plástico y la boquilla para aspirar en la pipeta. 3. Llenar la pipeta de glóbulos rojos con sangre hasta la marca 0.5 para realizar una dilución de 1/200, y si se carga hasta 1, la dilución será 1/100. Limpiar la punta con gasa o papel absorbente. Si la sangre se pasa de la marca, se puede absorber con gasa el excedente. 4. Introducir la pipeta en el tubo o frasquito que contiene el diluyente (Hayem) y llenar de líquido de dilución hasta la marca de 101. 5. Se tapa la punta con papel parafilm y se coloca en un rotador automático o se hace rotar manualmente de 2-3 minutos. 6. Destapar la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, luego colocar una gota pequeña cerca de un extremo de la cámara para que por capilaridad se llene exactamente. Dejar 2 minutos que los eritrocitos se sedimenten.

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7. Destapar la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, luego colocar una gota pequeña cerca de un extremo de la cámara para que por capilaridad se llene exactamente. Dejar 2 minutos que los eritrocitos se sedimenten. 8. En el recuento se incluyen las células que cubren o tocan por dentro o por fuera las líneas limitantes superior e izquierda en el cuadro pequeño de recuento y no se consideran los que estén en los límites inferior y derecho.

Conteo de leucocitos Fundamento Para el conteo de leucocitos, se usan métodos sistemáticos que son más rápidos y precisos, y los métodos manuales. Todo método manual de recuento celular incluye

3

fases:

•

Dilución de la sangre.

•

Muestreo de la sangre diluida en un volumen.

•

Recuento

de

células

en

ese

volumen.

Para el recuento de leucos se cuentan los 4 cuadrados de las esquinas, que corresponden a los campos 1, 3,7 y 9. Para su dilución, se hace lo mismo que para los hematíes, pero empleando la pipeta de blancos, de modo que la solución que obtenemos es de 1/20. Se utiliza como diluyente el líquido de Turk. El líquido de Turk es hipotónico de modo que se destruyen los hematíes y así no entorpecen

en

el

recuento.

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El líquido de Turk consta de ácido acético glaciar 2ml, violeta de genciana disolución de 1% 1ml y agua destilada en cantidad suficiente para 1000ml. Deberá filtrarse a menudo para evitar levaduras y hongos. En un principio es un poco difícil distinguir los leucocitos de los restos de membranas de los hematíes hemolizados. Se debe tener en cuenta que los leucocitos son más refringentes (más brillantes) al moverlo con el microscopio que los restos de hematíes. Se debe observar la presencia de la membrana citoplasmática y de la membrana nuclear (a veces más) como líneas finas y brillantes (Ramos, 2016). Procedimiento 1. Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica punción venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA. 2. Colocar el tubo de plástico y la boquilla para aspirar en la pipeta. 3. Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica punción venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA 2. Colocar el tubo de plástico y la boquilla para aspirar en la pipeta. 4. Introducir la pipeta en el tubo o frasquito que contiene el diluyente (liquido de Turk) y absorber hasta la marca 11, no deben quedar burbujas. 5. Se tapan ambos extremos de la pipeta con papel parafilm y se coloca en un rotador automático o se hace rotar manualmente de 2-3 minutos. 6. Montar la laminilla de vidrio en la cámara para recuento. Debe estar limpia y seca. 7. Destapar la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, luego colocar una gota pequeña cerca de un extremo de la cámara para que por capilaridad se llene exactamente. 7. Dejar 3 minutos que los leucocitos se sedimenten. 8. Colocar en la platina del microscopio y enfocar la cuadricula a 10x. Y contar en los 4 cuadrados angulares. 10. En el recuento se incluyen las células que cubren o tocan por dentro o por fuera las líneas limitantes superior e izquierda en el cuadro pequeño de recuento y no se consideran los que estén en los límites inferior y derecho.

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Plaquetas Fundamento Los trombocitos o plaquetas constituyen una parte esencial del organismo hemostático del cuerpo. Son cuerpecillos hialinos incoloros que miden de 2-4 μ, de bordes irregulares, pero pueden tener forma esférica u ovalada, carecen de núcleo y son muy frágiles. Provienen de una célula gigante que mide de entre 50-100 μ de diámetro llamada megacariocito. Una de las principales funciones de las plaquetas es participar en los mecanismos de la hemostasia (Hemos=sangre, stasis=detención) adhiriéndose entre ellas y a las paredes de los vasos sanguíneos lesionados, para formar así el trombo plaquetario o tapón hemostático. El líquido diluyente puede ser una solución estéril de paminobenzoato de dietilaminoetilo (85 milimolar) y cloruro de sodio (31 milimolar). Este líquido se provee listo para usar y su conservación es indefinida en refrigerador (2 - 10° C) o puede ser también oxalato de amonio al 1%. El fundamento del método consiste en la producción de hemólisis por la utilización de un líquido hipotónico, y el mantenimiento de las plaquetas intactas y sin agrumar por la presencia de p-aminobenzoato de dietilaminoetilo (Ramos, 2016).

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