Micrótomo y laboratorio PDF

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Es la materia de una de las últimas prácticas en la que nos puso un video y teníamos que coger apuntes...

Description

Micrótomo: se utiliza para realizar cortes de tejido endurecido previamente (con parafina por ejemplo). La sección sale arrugada cuando la cortas, para que quede lisa se mete en agua destilada templada y después de pone en el portaobjetos y cuando lo hemos teñido se le pone por encima el cubreobjetos. Micrótomo en frío (criostato): los tejidos pueden endurecerse por parafina, pero también pueden congelarse para que se quede duro, antes de hacerlo se suele usar una sustancia con sacarosa para fijar. Luego se mete al congelador como los filetes. La parafina tiene “recetas” diferentes concentraciones o protocolos. Los cerebros se meten en moldes de parafina (se pueden meter más de un cerebro en el mismo bloque dependiendo del tamaño del molde) El bloque de parafina sirve de soporte para poder cortar los cerebros en el micrótomo. SIEMPRE en los laboratorios donde vamos a trabajar hay soluciones que tienen que tener un ph concreto para no estropear el tejido o buscar una reacción en concreto. Para eso utilizamos el phtimetro y corregimos con soluciones espécificas para bajarlo o subirlo. Por muy perfecto que se haya realizado el procedimiento siempre tenemos que comprobar el ph El agua se destila con un destilador para no contaminar las muestras (en laboratorios avanzados también se desionifica para evitar todo tipo de interferencia) Actualmente podemos buscar los procesos en bases de datos pero antiguamente había que ir a la biblioteca y copiar el ejemplar a mano para tenerlo en el laboratorio y poder usarlo más fácilmente. Existen máquinas que miden la cantidad exacta de líquido que tienes que darle a los animales en un experimento (bomba de infusión) Tinción metabólica (citocrómo): podemos ver la actividad neuronal de manera indirecta porque tiñe una sustancia que la neurona produce según su uso. Densitometría: no podemos contar las neuronas, pero con esta máquina podemos medir la intensidad de los colores de la tinción (a más color, más neuronas). El programa te permite discriminar por áreas y así poder medir solo los núcleos que te interesan Algunas sustancias del laboratorio son tóxicas por lo que no podemos tirarlas directamente y hay que degradarlas mediante un proceso que crea una sustancia que cualquier cosa que metes lo degrada (con más o menos tiempo) Frascos lavador: tienen agua destilada dentro y suele haber muchos en los laboratorios. Una vez teñido el tejido se puede conservar durante muchísimos años pero pierde calidad si se tiñe después de un tiempo y no se puede usar en investigaciones (se puede seguir utilizando para prácticas o TFG). Tinción citoquímica: se realiza por secciones, con un rotulador se rodea la sección de tejido que hay que teñir para que no se desparrame la gota. Se pone un cronómetro y se deja pasar x tiempo, se tira la gota y se pone otra. Se tarda mucho por lo que no podemos hacer más de 12 o 16 porta al día. Los cristales se marcan con un punzón de diamante con el número del animal y a veces el número de la sección. Algunos portas tienen una sección un poco opaca y rugosa donde sí se puede usar con lápiz pero no son habituales porque son más caras y “hay que ahorrar”

Hay dos opciones: que el laboratorio esté cerca de un bioterio o que la universidad habilite una zona donde almacenan a los animales. Los bioterios tienen acceso restringido y se necesitan niveles de acreditación, hay diferentes niveles regulados a nivel europeo: La menor es la de los limpiadores, después las personas en prácticas que te permite realizar ciertos procesos (anestesia, inyecciones subcutáneas, conocer al animal, cómo cogerlo), otros que pueden proponer los estudios y los realizan, y por último los expertos en bienestar animal (veterinarios y cosas por el estilo) LAS TRES ERRES: reemplazar (no usar animales si se puede usar células in vitro), refinar (que el proceso sea lo menos molesto posible para el animal. Que tenga buena temperatura, buena comida, saber cogerlo) y reducir (saber ajustar la cantidad de anímales mínimos posibles para que los resultados sean fiables) Mientras que no se estén sometiendo a un experimento individual o en periodo de recuperación de un proceso las ratas suelen convivir en sociedad en jaulas de tres o cuatro espécimenes del mismo sexo. Cajas de actímetros: miden los niveles de actividad de los animales que están dentro. Podemos preparar dentro con serrín o meter su propio nido(jaula) dentro y mide con fotocélulas y un programa de registro el movimiento del animal. Una vez que metemos el animal en la caja se abre la compuerta de acceso a la zona oscura y se cierra cuando el animal entra (SIEMPRE ENTRA LA PRIMERA VEZ) y entonces se da una descarga. Se saca al animal y se le mete al día siguiente, si entra en la habitación oscura después del calambrazo del día anterior es que no lo recuerda Cajas de aislamiento: se meten dentro las cajas de evitación activa/pasiva para que los ruidos, luces u olores no interfieran en el experimento. En lugar del laberinto de cruz se puede usar el laberinto en ZERO que tiene el mismo paradigma y uso (mide los niveles de ansiedad) Laberinto en T (piscina en forma de t) Mide la memoria y la información espacial Laberinto de agua de Morris: Piscina de metro y medio de diámetro, con paneles de pistas en las pareces de alrededor (enrejados de colores muy discriminados) que ayudan a la orientación del animal Microscopía electrónica, se corta en Amstrongs para ver partes de células muy muy caro “cinco millones de las antiguas pesetas”...