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MANUAL DE PRÁCTICAS DE LOS LABORATORIOS DE ALIMENTOS

MP-DAMR-LBR/R01

DIRECTORIO UJAT DR. JOSÉ MANUEL PIÑA GUTIERREZ Rector DRA. DORA MARÍA FRÍAS MÁRQUEZ Secretaria de Servicios Académicos M.A. RUBICEL CRUZ ROMERO Secretario de Servicios Administrativos

DIRECTORIO DAMR M.T.E. SANDRA AGUILAR HERNÁNDEZ Directora M.A. ALEJANDRO ALPUCHE PALMA Coordinador Administrativo L.I.A. MIGUEL ALEJO ALEJO Coordinador de Docencia

COMISIÓN RESPONSABLE DE LA ELABORACIÓN DEL MANUAL DE PRÁCTICAS PARA LABORATORIOS DE ALIMENTOS: BROMATOLOGÍA

M.C. FANNY PERALTA GONZÁLEZ M.C. EMILIO JESUS MALDONADO ENRÍQUEZ M.C. MARTHA ISABEL CENTENO ZUÑIGA

INDICE PRESENTACIÓN ........................................................................................................ 2 OBJETIVO................................................................................................................... 4 NORMAS DE SEGURIDAD E HIGIENE EN EL LABORATORIO ............................... 5 MEDIDAS EN CASO DE ACCIDENTE ....................................................................... 8 PRACTICA 1. DETERMINACION DE PROTEINAS TOTALES POR EL METODO KJELDAHL ................................................................................................................ 10 PRACTICA 2. DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO DE HUMEDAD DE LOS ALIMENTOS.............................................................................................................. 15 PRÁCTICA 3. DETERMINACIÓN DEL PORCENTAJE DE CENIZAS EN ALIMENTOS.............................................................................................................. 18 PRÁCTICA 4. DETERMINACIÓN DE EXTRACTO ETEREO POR EL METODO SOXHLET.................................................................................................................. 22 PRACTICA 5. DETERMINACION DE FIBRA BRUTA Y EXTRACTO NO NITROGENADO........................................................................................................ 24 PRÁCTICA 6. ANALISIS DE LECHE ........................................................................ 29 PRÁCTICA 6.1. DENSIDAD (D) ................................................................................................... 32 PRÁCTICA 6.2. CENIZAS ............................................................................................................. 33 PRÁCTICA 6.3. EXTRACTO SECO O SÓLIDOS TOTALES (ES) ......................................... 34 PRÁCTICA 6.4. MATERIA GRASA (MÉTODO DE GERBER) ................................................ 35 PRÁCTICA 6.5. EXTRACTO SECO NO GRASO (ESD) .......................................................... 37 PRÁCTICA 6.6. ACIDEZ ................................................................................................................ 37 PRACTICA 6.7. VALORACIÓN DE CLORUROS (MÉTODO CUANTITATIVO) ................... 38 PRACTICA 6.8. ENSAYO DEL AZUL DE METILENO (PRUEBA DE LA REDUCTASA) ... 39 PRACTICA 6.9. PRUEBA DE LA FOSFATASA (CUALITATIVO) ........................................... 41 PRACTICA 6.10. PRUEBA DE ALCOHOL (CUALITATIVO) ................................................... 42 PRACTICA 6.11. PRESENCIA DE ALMIDÓN Y HARINAS (CUALITATIVO) ....................... 42 PRACTICA 6.12. PRESENCIA DE AZÚCAR (CUALITATIVO) ............................................... 43

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PRACTICA 6.13. IDENTIFICACIÓN DE HIPOCLORITOS, CLORAMINAS, DIÓXIDO DE CLORO (CUALITATIVO) ................................................................................................................ 43 PRACTICA 6.14. IDENTIFICACIÓN DE NEUTRALIZANTES EN LECHE (CUALITATIVO) ............................................................................................................................................................ 44 PRACTICA 6.15. PRESENCIA DE PERÓXIDO DE HIDROGENO EN LECHES (CUALITATIVO) ............................................................................................................................... 44 PRACTICA 6.16. PRUEBA DE LA PERÓXIDASA (CUALITATIVO)....................................... 45 PRACTICA 6.17. PROTEÍNA (MÉTODO DEL FORMOL) ........................................................ 46

PRÁCTICA 7. ANALISIS DE JUGOS DE FRUTA ..................................................... 48 PRÁCTICA 7.1. SÓLIDOS TOTALES.......................................................................................... 49 PRÁCTICA 7.2. SÓLIDOS SOLUBLES ....................................................................................... 49 PRÁCTICA 7.3. ACIDEZ TITULABLE.......................................................................................... 50 PRÁCTICA 7.4. ENSAYO CUALITATIVO PARA COLORANTES ARTIFICIALES .............. 51 PRÁCTICA 7.5. pH .......................................................................................................................... 52 PRÁCTICA 7.6. AZUCARES REDUCTORES ............................................................................ 52

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PRESENTACIÓN La División Académica Multidisciplinaria de los Ríos (DAMR) cuenta con una instalación especializada para atender la necesidad del Programa Educativo (PE) de la carrera de Ingeniería en Alimentos referente a la realización de prácticas de laboratorio y tecnologías de alimentos. Esta instalación cuenta, con cuatro laboratorios para análisis en alimentos (bromatología, instrumental, microbiología, sensorial) y tres talleres (cárnicos, frutas y hortalizas, lácteos). La realización de prácticas de laboratorio dentro del anterior PE, juega un papel primordial en la formación de recursos humanos capaces de aplicar metodologías convenientes para el análisis, evaluación, transformación y conservación de productos y subproductos alimenticios. Por tal motivo se han elaborado 7 manuales de prácticas (Cuadro 1), uno para cada laboratorio y taller, los cuales incluyen una serie de metodologías acordes al equipamiento con el que cuenta dicha División, además de una compilación de prácticas realizadas por los profesores que imparten las diferentes materias que involucran horas prácticas en su plan de estudio. Cada manual hace referencia a las medidas de seguridad e higiene ya sea en el laboratorio (BPL) o en el taller (BPM) y las medidas en caso de accidente. La estructuración de las prácticas contiene: objetivo; introducción; materiales, reactivos y equipos; procedimiento; resultados; cuestionamientos; bibliografía. En particular, el presente manual (MP-DAMR-LBR/R01) apoya a las asignaturas de química analítica, química orgánica, química inorgánica, análisis químico de los alimentos, bioquímica, análisis instrumental, fundamentos de nutrición, operaciones de separación, inocuidad de alimentos, y aseguramiento de la calidad.

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Cuadro 1. Relación de Manuales de Prácticas para Laboratorios y Talleres de Alimentos LABORATORIO/ TALLER

CLAVE

Bromatología

MP-DAMR-LBR/R01

Instrumental

MP-DAMR-LIN/R01

Microbiología

MP-DAMR-LMI/R01

Sensorial

MP-DAMR-LSE/R01

Cárnicos

MP-DAMR-TCA/R01

Frutas y Hortalizas

MP-DAMR-TFH/R01

Lácteos

MP-DAMR-TLA/R01

NOMBRE DEL MANUAL Manual de Prácticas para Laboratorios de Alimentos: Bromatología Manual de Prácticas para Laboratorios de Alimentos: Instrumental Manual de Prácticas para Laboratorios de Alimentos: Microbiología Manual de Prácticas para Laboratorios de Alimentos: Sensorial Manual de Prácticas para Talleres de Alimentos: Cárnicos Manual de Prácticas para Talleres de Alimentos: Frutas y Hortalizas Manual de Prácticas para Talleres de Alimentos: Lácteos

UNIVERSIDAD JUÁREZ AUTÓNOMA DE TABASCO

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OBJETIVO Contribuir a la formación de recursos humanos capaces de aplicar metodologías convenientes para el análisis, evaluación, transformación y conservación de productos y subproductos alimenticios, así como apoyar en los proyectos de investigación y proyectos productivos afines al área.

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NORMAS DE SEGURIDAD E HIGIENE EN EL LABORATORIO Estimado usuario, te recomendamos que antes de iniciar con tus actividades dentro de los laboratorios y talleres conozcas el “Lineamiento Interno para el Uso y Mantenimiento de los Laboratorios y Talleres del Programa Educativo de Ingeniería en Alimentos” el cuál te guiará sobre las actitudes, responsabilidades y procedimientos que deberás seguir antes, durante y al finalizar tus actividades en el laboratorio. De igual forma te sugerimos tomes en cuenta las precauciones o medidas generales que te presentamos a continuación con objeto de que adquieras una actitud de prudencia frente a riesgos que puedan presentarse en el laboratorio: A)

Organización del laboratorio, debe ser adecuada para mantener un buen nivel preventivo.

1. Una persona nunca debe trabajar sola en el laboratorio, especialmente fuera de horas habituales y en actividades con riesgo. 2. Cuando se requiera realizar una actividad con riesgo se debe informar incluso a las personas que no intervengan en las mismas. 3. Siempre que se manipulen productos tóxicos o inflamables, se trabajará en la campana de extracción de humos verificando su correcto funcionamiento. 4. No se debe eliminar por el desagüe, aunque sea en pequeñas cantidades, productos tales como: los que reaccionan violentamente con el agua, sean tóxicos, pestilentes, lacrimógenos, no biodegradables y cancerígenos. B)

Hábitos personales del trabajador, se refiere al comportamiento desarrollado durante el trabajo.

1. Mantener en todo momento las batas y vestidos abrochados. 2. No abandonar objetos personales en mesas de trabajo. 3. No comer ni beber en los laboratorios. 4. No guardar alimentos ni bebidas en el refrigerador del laboratorio. UNIVERSIDAD JUÁREZ AUTÓNOMA DE TABASCO

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5. No fumar en los laboratorios. 6. Las batas no deben llevarse a lugares de uso común: bibliotecas, cafeterías, comedores, baño, etc. 7. Se recomienda usar gafas de seguridad cuando se manipulen productos químicos o líquidos en ebullición. 8. No utilizar lentes de contacto en el laboratorio. 9. No se aconseja guardar la ropa de calle en el laboratorio. 10. Lavarse las manos antes de abandonar el laboratorio, al quitarse los guantes protectores y siempre que se haya estado en contacto con material irritante, cáustico, tóxico o infeccioso. C)

Hábitos adquiridos durante el trabajo en el laboratorio.

1. No se debe manipular un producto químico sin conocer sus características físicoquímicas y toxicológicas. 2. Antes de utilizar un reactivo, se debe asegurar que sea el correcto. 3. Se deberán conocer como mínimo las frases R y S de los productos, incluidos en la etiqueta del envase. 4. Exigir las fichas de datos de seguridad. 5. No llenar los tubos de ensayo más de dos o tres cm. 6. Calentar los tubos de ensayo de lado y utilizando pinzas. 7. Nunca dirigir la boca del recipiente en el cual se está efectuando una reacción, hacia los compañeros. 8. Al vaciar un líquido hacerlo por el lado contrario de la etiqueta o rótulo. 9. No llevar tubos de ensayo ni productos en los bolsillos de las batas. 10. Utilizar en todo momento gradillas y soportes. 11. Transportar los productos en bandejas o recipientes para evitar derrames en caso de roturas. 12. No tocar con las manos ni probar los productos químicos. 13. No trabajar separado de la mesa. 14. No efectuar pipeteos con la boca. BROMATOLOGÍA

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15. Se debe asegurar el enfriamiento de los materiales antes de aplicar directamente las manos para tomarlos. 16. Al terminar el trabajo, se debe asegurar la desconexión de aparatos, agua, gases, etc. 17. Los mecheros no deben dejarse encendidos sin vigilancia. 18. Al finalizar una tarea u operación, se deben recoger materiales, reactivos, equipos, etc., evitando acumulaciones innecesarias. 19. No se deben calentar solventes volátiles (éteres, benceno, etanol, etc.) con mechero de gas. Hacerlo en un baño de agua caliente o en parrilla eléctrica. 20. Muchos de los reactivos que se manipulan son tóxicos, se debe evitar el contacto con la piel, ojos y mucosa, evitar inhalarlos o pipetearlos directamente si son líquidos. 21. Nunca se debe agregar agua a un ácido concentrado, diluir el ácido adicionándolo lentamente al agua con agitación constante; las bases deben ser diluidas de forma análoga.

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MEDIDAS EN CASO DE ACCIDENTE Las intoxicaciones pueden ser producidas al respirar gases, vapores, polvos o aerosoles tóxicos; al entrar la piel en contacto con estas sustancias; y al ser ingeridas. De esta manera, los productos químicos que resultan un peligro agudo de intoxicación se caracterizan en la etiqueta del recipiente por las siguientes indicaciones de riesgo: 1. Tóxico por inhalación. 2. Tóxico por contacto con la piel. 3. Tóxico por ingestión. 4. Muy tóxico por inhalación. 5. Muy tóxico por contacto con la piel. 6. Muy tóxico por ingestión. 7. Peligroso por efectos irreversibles muy graves. 8. Riesgos de efectos muy graves para la salud en caso de exposición prolongada. Además, en la etiqueta de los recipientes que contienen productos químicos, se especifica el procedimiento de emergencia y primeros auxilios. En caso de intoxicación con algún producto químico se deberá seguir las recomendaciones del fabricante. Cuando la medida a tomar en caso de intoxicación oral consista en provocar el vómito, se sugiere ingerir una solución tibia de sal común (3 a 4 cucharadas de sal común en un vaso de agua) y tocar la pared interior de la garganta (con el dedo en la boca). No se debe provocar el vómito si el intoxicado ha perdido el conocimiento o si la intoxicación fue provocada por solventes, ácidos o bases. Intoxicación con hidróxido de sodio (NaOH). Si se ingiere, no se debe provocar el vómito; si la persona está consiente, se debe ingerir agua en abundancia. Después se recomienda tomar vinagre diluido, jugo de frutas o claras de huevo batidas con agua. Si se inhala, se debe llevar a la persona al aire fresco; si no respira, se le debe administrar respiración artificial. En caso de contacto con la piel, lavar de inmediato la zona afectada con agua en abundancia por lo menos durante 15 minutos, quitando al BROMATOLOGÍA

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mismo tiempo la ropa y el calzado contaminado. Antes de volver a utilizar la ropa se recomienda lavarla. En caso de contacto con los ojos, lavar inmediatamente con abundante agua por lo menos durante 15 minutos. Intoxicación con ácido sulfúrico (H2SO4). Si se ingiere, no se debe provocar el vómito; se recomienda que la persona se enjuague la boca con agua; si la persona está consciente, debe tomar abundante agua. Si se inhala, se debe llevar a la persona al aire fresco y mantenerla en reposo; si no respira, se le debe administrar respiración artificial. En caso de contacto con los ojos, se procede a lavar inmediatamente con abundante agua por lo menos durante 15 minutos abriendo ocasionalmente los parpados. En caso de contacto con la piel, remover inmediatamente la ropa y el calzado contaminado; se debe absorber el material de la piel con papel o un trapo y lavar la zona afectada con agua corriente durante 15 minutos. Intoxicación con ácido clorhídrico (HCl). Si se ingiere, no se debe provocar el vómito; se recomienda que la persona se enjuague la boca con agua; si la persona está consciente, debe tomar agua, leche o leche de magnesia. Si se inhala, se debe llevar a la persona al aire fresco y mantenerla en reposo; si no respira se le debe administrar respiración artificial. En caso de contacto con la piel, remover inmediatamente la ropa y calzado contaminados; lavar la zona afectada con agua corriente durante 15 minutos. En caso de contacto con los ojos, se procede a lavar inmediatamente con abundante agua por lo menos durante 15 minutos abriendo ocasionalmente los parpados. Quemaduras y escaldamientos. Quitar rápidamente la ropa que está impregnada con líquidos calientes o enfriarla con agua. Introducir rápidamente en agua fría los miembros dañados o mantenerlos debajo de agua corriente, hasta atenuación de dolor. No utilizar harina, talco, pomadas, aceites, leche, etc., en el área afectada.

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PRACTICA 1. DETERMINACION DE PROTEINAS TOTALES POR EL METODO KJELDAHL

OBJETIVOS Determinar el contenido total de proteínas en una muestra alimenticia.

INTRODUCCIÓN El contenido total de proteínas en los alimentos está conformado por una mezcla compleja de proteínas. Estas existen en una combinación con carbohidratos o lípidos, que pueden ser físicos o químicos. El procedimiento de referencia Kjeldahl determina la materia nitrogenada total, que incluye tanto las no proteínas como las proteínas verdaderas (Aurand et al., 1987). En esta técnica se digieren las proteínas y otros componentes orgánicos de los alimentos en una mezcla con ácido sulfúrico en presencia de catalizadores. Durante el proceso de digestión ocurre la deshidratación y carbonización de la materia orgánica combinada con la oxidación de carbono a dióxido de carbono. El nitrógeno orgánico transformado en amoniaco, se retiene en la disolución como sulfato de amonio. La mezcla digerida se neutraliza con una base y se destila posteriormente. El destilado se recoge en una solución de ácido bórico. Los aniones del borato así formado s, se titulan con HCl (o H2SO4) estandarizado para determinar el contenido de nitrógeno del alimento.

MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS  1 Equipo digestor Kjendahl  1 Equipo destilador Kjendahl  1 Balanza analítica  1 Bureta automática BROMATOLOGÍA

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 Agua destilada  Ácido bórico al 3%  Ácido sulfúrico concentrado  Ácido clorhídrico al 0.1 N  Hidróxido de sodio al 40%  Pastillas catalíticas  Perlas de cristal  Municiones de zinc  Indicador mixto (rojo de metilo + azul de meti...