Practica 1 Determinacion-DE- Proteinas-EN-LA- Clara-DE- Huevo PDF

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Universidad de Guayaquil Facultad de Ciencias Carrera: y Farmacia de de Laboratorio Asignatura Laboratorio de Bioquimica I Nilda Mgs. Nombre de 1. Mario Pizarro 2. Anthony Betancourt 3. Galo 4. Yolanda Torres Semestre: IV de la Grupo: 1D Fecha de entrega: Titulo: DE TOTALES EN LA CLARA DE HUEVO POR ...

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Universidad de Guayaquil Facultad de Ciencias Químicas Carrera: Química y Farmacia Guía de Prácticas de Laboratorio Asignatura

Laboratorio de Bioquimica I

Profesor/a:

Nilda Cedeño Albán Mgs.

Nombre de Alumno/s: 1. Mario Pizarro 2. Anthony Betancourt 3. Galo Solórzano 4. Yolanda Torres Semestre: IV

Número de la práctica #1

Grupo: 1D

Fecha de entrega: 13/07/2017

Titulo: DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS TOTALES EN LA CLARA DE HUEVO POR MÉTODO DE BIURET

MARCO TEÓRICO PROTEINAS: Las proteínas son biomoléculas formadas básicamente por carbono, hidrógeno, oxígeno y nitrógeno. Pueden además contener azufre y en algunos tipos de proteínas, fósforo, hierro, magnesio y cobre entre otros elementos. Pueden considerarse polímeros de unas pequeñas moléculas que reciben el nombre de aminoácidos y serían, por tanto, los monómeros unidad. Los aminoácidos están unidos mediante enlaces peptídicos. La unión de un bajo número de aminoácidos da lugar a un péptido; si el número de aminoácidos que forma la molécula no es mayor de 10, se denomina oligopéptido, si es superior a 10 se llama polipéptido y si el número es superior a 50 aminoácidos se habla ya de proteína. Por tanto, las proteínas son cadenas de aminoácidos que se pliegan adquiriendo una estructura tridimensional que les permite llevar a cabo miles de funciones. Las proteínas están codificadas en el material genético de cada organismo, donde se especifica su secuencia de aminoácidos, y luego son sintetizadas por los ribosomas. Las proteínas desempeñan un papel fundamental en los seres vivos y son las biomoléculas más versátiles y más diversas. Realizan una enorme cantidad de funciones diferentes, entre ellas funciones estructurales, enzimáticas, transportadora Las unidades básicas de las proteínas son los aminoácidos compuesto que contiene un grupo amino –NH 2 y un grupo acido-COOH, enlazados en mismo carbono alfa y aun radical R variable en sus estructura. Las proteínas suponen aproximadamente la mitad del peso de los tejidos del organismo, y están presentes en todas las células del cuerpo, además de participar en prácticamente todos los procesos biológicos que se producen. Por tanto, las proteínas son cadenas de aminoácidos que se pliegan adquiriendo una estructura tridimensional que les permite llevar a cabo miles de funciones. Las proteínas están codificadas en el material genético de cada organismo, donde se especifica su secuencia de aminoácidos, y luego son sintetizadas por los ribosomas.

EL HUEVO Y LAS PROTEINAS:

El huevo es un alimento de origen animal que proporciona la mejor proteína de todos los alimentos ya que contiene todos los aminoácidos esenciales en las proporciones exactas que necesita el organismo para el crecimiento óptimo y el mantenimiento del tejido magro, metabólicamente activo. Los huevos además de proteínas, proporcionan lípidos, hidratos de carbono, vitaminas y minerales siendo un alimento muy completo que no debe faltar en una dieta equilibrada. Además, en cuanto a las calorías del huevo, un huevo crudo aporta solamente 70 calorías, una cantidad similar a una pieza de fruta. La principal proteína de la clara de huevo es la ovoalbúmina, un tipo de albúmina que constituye entre el 60% y el 65% del peso de la clara de huevo. Además de tener el mejor perfil proteico que se puede encontrar en un alimento, la clara contiene vitaminas y minerales y aporta aproximadamente 17 calorías. Además de la ovoalbúmina, la clara de huevo tiene otras proteínas como la ovomucina (2%), responsable de cuajar el huevo pochado o frito, la con albúmina (14%) y el ovomucoide (2%). La yema del huevo contiene entre 4 y 4,5 gramos de grasa por unidad, en su mayoría se trata de grasas monoinsaturadas, beneficiosas para el organismo. Tan sólo unos 1,5 gramos de las grasas de la yema de huevo son insaturadas.

FUNDAMENTO

El reactivo de Biuret se pretende utilizar para la determinación o identificación de proteínas, péptidos que presenten enlaces peptídicos (2 o más) en una muestra. El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida. Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto con tartrato de sodio y potasio (KNaC4H4O6·4H2O). El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. El hidróxido de potasio no participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar. La reacción debe su nombre al biuret, una molécula formada a partir de dos de urea (H2N-CO-NH-CONH2), que es la más sencilla que da positiva esta reacción la presencia de proteínas en una mezcla se puede determinar mediante la reacción del Biuret. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina (de NaOH o KOH). La reacción se basa en la formación de un compuesto de color violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos presentando un máximo de absorción a 540 nm.

La producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos, ya que se debe a la presencia del enlace peptídico (- CO- NH -) que se destruye al liberarse los aminoácidos. Cuando una proteína se pone en contacto con un álcali concentrado, se forma una sustancia compleja denominada Biuret. Debido a dicha reacción fue que observamos que al agregar el reactivo de sulfato de cobre más solución de proteína precipitó una coloración violeta. Quedando en el fondo del tubo una

tonalidad azul cielo reacción positiva. Precipitando a una coloración amarilla la reacción nos torna negativa al no haber presencia de proteínas. “Da positiva esta reacción en todos los compuestos que tengan dos o más enlaces peptídicos consecutivos en sus moléculas”

OBJETIVO GENERAL.

1. Determinar las proteínas totales de la clara de huevo por medio del método de biuret y la curva de calibración OBJETIVOS ESPECIFICOS

1. Determinar por medio de los cálculos correspondientes la concentración estándar para cada tubo 2. Calcular el factor de dilución y factor de calibración MATERIALES.  Pipetas de 1 ml, 5 ml, 10 ml  Pipeta volumetrica  Gradilla  Tubos de ensayo  Reactivo de biuret  Solución salina  Clara de huevo  B.S.A

PROCEDIMIENTO

Tubos 1 2 3 4 5 6 7 RESULTADOS: Estándar (B.S.A) 5.5g ∕dl 100ul

5.5g

20

X

X= 1.1g 100ul

5.5

Muestra:

Solución

B.S.A ul

clara de

salina (0.19%)

R. biuret

20 50 100 150 200 -------

huevo ----------100 ---

0.98 0.95 0.90 0.85 0.80 0.90 1.0

3 3 3 3 3 3 3

50

X

X= 2.75g 100ul

5.5

100

X

X= 5.5g

100ul

5.5

150

X X= 8.25g 100ul

5.5

200 X= 11.0g

X

TUBOS Tubo1 Tubo2 Tubo3 Tubo4 Tubo5 Total Tubo6 Tubo7



Factor de dilución ═ 100÷35═2,85mL



Factor de calibración: Fc= Σ

ABSORVANCIA 0.132 0.244 0.451 0.555 0.746 2.128 0.349 0

28,6 Σconc Est ═ ═ 13,44 g/dL 2,128 ΣAbs Est

Fc×Abs×dil═ g∕dl 13, 44×0,349×2.85═16,64 g∕dL

CONCLUSIÓN  En esta práctica por medio del método de biuret determinamos la presencia de proteínas 

Analizamos la absorvancia dadas en el espectrofotómetro a cada uno de los tubos



Determínanos mediante los cálculos el factor de dilución, factor de calibración y las concentraciones d estándares de la muestra.



Finalmente con las absorbancias dadas vs concentración estándar graficamos en la curva estándar

APRENDIZAJE Aprendimos a cuantificar las proteínas presentes en la ovoalbúmina mediante el método de biuret y la curva de estandarización. Anexos

BIBLIOGRAFÍA  http://www.uv.es/tunon/pdf_doc/proteinas_09.pdf  http://alimentosproteinas.com/huevo  http://bioquimicamarzo-julio.blogspot.com/2014/07/reaccion-de-biuret.html...