Practica 14 Osmosis Y Resistencia Osmotica Eritrocitaria PDF

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Practica 14 Osmosis Y Resistencia Osmotica Eritrocitaria - BIOQUÍMICA PRÁCTICA SEMANA 14...

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- ÓSMOSIS Y RESISTENCIA OSMÓTICA ERITROCITARIA -INTRODUCCION: Las membranas celulares son semipermeables y es donde ocurre los procesos osmóticos, debido a los niveles de concentración de solutos o electrolitos disueltos en el agua de los líquidos biológicos. Las células, en estado normal deben encontrarse en un medio isotónico, esto es que la concentración de solutos está en equilibrio electroquímico en ambos lados de la membrana celular. Cuando las células se colocan en un medio hipertónico, en donde la concentración de solutos extracelular es mayor, se producirá un flujo de agua desde la célula hacia el exterior hasta que se igualen las concentraciones a ambos lados de la membrana. Si las células se colocan en un medio hipotónico, es decir menos concentrado en soluto fuera que dentro de la célula, se provocará un flujo de agua desde el medio exterior hacia el interior de la célula, lo cual aumenta su volumen. La prueba de resistencia osmótica eritrocitaria (ROE) proporciona una indicación de la razón volumen/superficie de los eritrocitos y refleja su capacidad para incorporar una cierta cantidad de agua antes de lisarse. La habilidad de los glóbulos rojos normales para resistir la hipotonicidad proviene de su forma bicóncava, lo cual permite que la célula aumente su volumen hasta un 70% antes de que la membrana se estire; una vez superado este límite ocurre la lisis. La prueba de ROE ha sido ampliamente usada en el diagnóstico de esferocitosis hereditaria (EH). La finalidad de la presente práctica, es evidenciar la ósmosis y las anomalías del proceso osmótico a través de la prueba de resistencia osmótica eritrocitaria (ROE). PROCEDIMIENTO: EXPERIMENTO 1. OBSERVACIÓN DEL FENÓMENO DE ÓSMOSIS 1) Extraer 5 ml. de sangre venosa del pliegue del codo y colocarlo en un tubo vacutainer con EDTA. 2) Hacer un sistema de 3 tubos de ensayo y agregarles lo siguiente: COMPONENTE Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Solución de NaCl al 15% 3 ml Solución de NaCl al 0,9% 3 ml Solución de NaCl al 0,45% 3 ml Sangre periférica 2 gotas 2 gotas 2 gotas 3) Mezclar suavemente cada uno de los 3 tubos 4) Colocar una gota del tubo 1 sobre una lámina portaobjetos limpia y cubrir con una laminilla portaobjetos 5) Inmediatamente, llevar al microscopio a 40X. 6) Observar e interpretar. RESULTADOS: ERITROCITOS EN MEDIO HIPERTONICO (Solución de NaCl al 15%)

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ERITROCITOS EN MEDIO ISOTONICO (Solución de NaCl al 0,9%)

ERITROCITOS EN MEDIO HIPOTONICO (Solución de NaCl al 0,45%)

EXPERIMENTO 2. RESISTENCIA OSMÓTICA ERITROCITARIA 1) Hacer un sistema de 11 tubos de ensayo y agregarles lo siguiente: Tubo1 Solución de NaCl al 0,9% 3.0ml Agua destilada 0.0ml Sangre periférica 5 gotas

Tubo2 2.7ml 0.3ml 5 gotas

Tubo3 2.4ml 0.6ml 5 gotas

Tubo4 Tubo5 Tubo6 Tubo7 2.1ml 1.8ml 1.5ml 1.2ml 0.9ml 1.2ml 1.5ml 1.8ml 5 gotas 5 gotas 5 gotas 5 gotas

2) Mezclar suavemente cada uno de los 11 tubos 3) Dejar en reposo por 10 minutos y centrifugar a 2000 rpm por 3 minutos. 4) Observar e interpretar.

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Tubo8 0.9ml 2.1ml 5 gotas

Tubo9 0.6ml 2.4ml 5 gotas

Tubo10 0.3ml 2.7ml 5 gotas

Tubo11 0.0ml 3.0ml 5 gotas

5) RESULTADOS:

11

10

9

8

7

5

6

4

3

2

CUESTIONARIO: 1) ¿Qué es un proceso osmótico celular? 2) ¿Cómo se define a la presión osmótica y la importancia bioquímica? 3) ¿Determine las diferentes concentraciones de NaCl en cada uno de los tubos? 4) ¿Cuál es el fundamento de la Resistencia Osmótica Eritrocitaria – ROE? 5) ¿Explique la compartimentalización del agua en las estructuras celulares? REFERENCIAS: 1) Murray R. Harper Bioquímica Ilustrada. 31° edición, México 2019. 2) Lodish H, Darnell J. Biología Celular y Molecular. 7° edición. Buenos Aires: Edit Médica Panamericana; 2016. 3) UCV. Protocolo de seguridad en laboratorios. Trujillo 2018.

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