Practica Preparación de agares PDF

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE LOJA ÀREA DE LA SALUD HUMANA CARRERA DE LABORATORIO CLINICO NOMBRES Y APELLIDOS

Jordan Alexander Sánchez Pineda Micología

ASIGNATURA DOCENTE: TÌTULO DE LA PRÀCTICA

FECHA:

Lcda. Iliana Delgado

MÓDULO /CICLO NRO. DE PRÁCTICA NRO. DE GRUPO

7 5 1

Preparación de medios de cultivo para hongos: sabouraud y chromo agar. 10 de Febrero del 2021

NOTA

OBJETIVOS:



Preparar los medios de cultivo para hongos: Saboraud y Cromo agar.



Usar el autoclave, balanza adecuadamente

FUNDAMENTO TEORICO DE LA PRÁCTICA A EJECUTAR:

El medio de cultivo es aquel que contiene agua y una serie de nutrientes, necesarios para su metabolismo de microorganismos como bacterias y hongos (Tortora, 2009). El Agar Sabouraud Dextrose es un medio no selectivo para el cultivo y mantenimiento de hongos patógenos y no patógenos, en especial dermatofitos. Se logra selectividad mediante la adición de cloranfenicol. CHROMagar Candida es un medio selectivo para el aislamiento e identificación presuntiva de levaduras y mohos filamentosos y diferenciación de Candida albicans, Candida tropicalis y Candida krusei. Debido a las diferencias en morfología y color de las colonias de levaduras, este medio facilita la detección de mezclas de cepas de levaduras en la muestra analizada. También puede ser usado como un medio selectivo para el aislamiento de otras levaduras o mohos filamentosos en lugar de Agar Sabouraud Dextrosa. Las peptonas especialmente seleccionadas son los nutrientes en el medio. La mezcla cromogénica consiste en sustratos artificiales (cromógenos), los cuales colorean los diferentes compuestos producidos por la degradación con las diferentes enzimas específicas (Carroll, Morse, Mietzner, & Miller, 2016).

MATERIALES / REACTIVOS / EQUIPOS

Materiales

Reactivos

Equipos

Lápiz graso

Medios de cultivo

Balanza.

Guantes

deshidratados.

Autoclave

Mascarilla

Sabouraud y

Cabina de

Vaso de presipitación

Chromoagar

bioseguridad

Caja Petri

Agua destilada

Refrigeradora

Varillas de vidrio

Cocineta

Espátulas Papel fieltro o períodico Matraz Erlenmeyer Papel aluminio Fundas plásticas Cinta maskin Gasa

TÉCNICAS Y PROCEDIMIENTOS PARA EJECUTAR LA PRÁCTICA:

Agar Saboraud 1. Para la realización de los medios de cultivo, se debe tomar en cuenta las instrucciones que contienen en el tarro, composición química y como se lo debe preparar.

En este caso las indicaciones nos señalaron agregar 65.0 gramos en 1000ml de agua destilada, pero para ahorrar volúmenes innecesarios, sometimos esta preparación a la mitad, utilizando solo 32,5 gramos de polvo de agar en 500ml de agua destilada. 2. Luego Se calienta el preparado, el medio que contiene el agente solidificante (agar-agar) en la cocineta agitando de vez en cuando, para asegurar una completa disolución. 3. Una vez disuelto el medio se debe esterilizar para evitar el crecimiento de contaminantes, se utilizará la autoclave (1210C) durante 15-20 minutos, a 15 libras de presión. 4. Quitamos la tapa, tomando en cuenta que la válvula este abierta. Se lubrica la tapa del autoclave con aceite de inmersión o vaselina, y se espera hasta que el autoclave entre al estado de ebullición para tapar el autoclave y se le ajusta la tapa a la olla, de tal manera evitamos accidentes. 5. Se tapa el medio con un papel y una liga. Se coloca el medio dentro del autoclave y colocamos la tapa a tal punto de nivelarla y quede uniforme. Tapamos la válvula. 6. Cuando el autoclave, ese hasta 15 libras de presión, se debe liberar hasta 3 min. 7. Colocar las cajas Petri estériles en una mesa nivelada. 8. Dispensamos el agar en las cajas Petri. 9. Tapamos y dejar en reposo para que solidifique. Finalmente las llevamos a refrigerar. 10. Se puede sembrar diferentes hongos contaminates como levaduriformes y hongos filamentosos. RECURSOS DIDÀCTICOS APLICADOS:

Esta práctica se la llevo de manera presencial, con las debidas precauciones, implementos de bioseguridad, insumos de laboratorio, etc.

RESULTADOS DEL APRENDIZAJE:

Imagen 1. Indicaciones para preparación del Agar

Imagen 2. Preparación y calentamiento del Agar

Imagen 3. Preparado del Agar en el autoclave

Imagen 4. Agregación del agar en cajas petri

Imagen 5. Resultado final de un agar en la caja petri

CONCLUSIONES



Se llegó a la conclusión de que los medios de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los microorganismos y dependerá de la especie que se quiera cultivar, debido que existe microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de laboratorio normales y microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre necesarios para su metabolismo.



Se permitió realizar la preparación de medio de cultivo de Saboraud, medio utilizado para el aislamiento, identificación y conservación de hongos patógenos y saprófitos, además permite cultivar mohos y levaduras, asociado a infecciones cutáneas como pelos, piel y uñas; mientras que los medios de cultivo de Cromo agar, es un medio selectivo para el aislamiento e

identificación presuntiva de levaduras y mohos filamentosos y diferenciación de Candida albicans, Candida tropicalis y Candida krusei, contiene sustratos cromógenos que permiten diferenciar la morfología y color de las colonias de levaduras, facilitando la detección de mezclas de cepas de levaduras en la muestra analizada. 

Se pudo concluir que las habilidad técnicas del operador contribuye bastante con la calidad de la preparación de agares, ya que un buen resultado que es en este caso el medio de cultivo, será de excelente calidad si cumplimos todas las recomendaciones, medidas preventivas, habilidades adquiridas, experiencias, etc. RECOMENDACIONES



Revisar la fecha de caducidad del agar liofilizado



Colocar el frasco del agar en un lugar freso para evitar el deterioro del agar



Mantener una buena limpieza en todos los espacios y equipos del laboratorio, para evitar el crecimiento de hongos en espacios no deseados que pueden contaminar muestras, cultivos y materiales que se ocupan en el trabajo.



Si el agua destilada fue preparada con el destilador propio del laboratorio, se recomienda estar pendientes con el mantenimiento.



Se debe lubricar la tapa de la autoclave con vaselina o aceite, de manera que nos permita facilitar la extracción de la tapa para retirar el agar.



Antes de pesar el agar liofilizado, se deberá hacer control de calidad a la balanza para evitar una mala preparación de los medios



Evitar el sobrecalentamiento del medio de cultivo por riesgo de oscurecimiento, acidificación y disminución de las propiedades gelificantes del agar. PREGUNTAS Y RESPUESTAS:

1. ¿A qué especie de cándida corresponde cada color presentado en chromo agar?

Las colonias de C. albicans presentan un color de verde claro a mediano, las colonias de C. tropicalis, de azul verdoso a azul metálico y las colonias de C. krusei, rosado claro con borde blancuzco, las colonias de C.glabrata con color rosado y otras especies de Cándida tendrán un color Marfil a violeta (Restrepo & Cardona, 2018) 2. ¿Qué precauciones hay que tener en la preparación de chromo agar? De acuerdo con (Carroll, Morse, Mietzner, & Miller, 2016) 

Revisar si agar liofilizado no se haya caducado.



Esterilizar todo el material a utilizar



Hacer el control de calidad al equipo de autoclave para evitar arruinar el trabajo.



Si se observa humedad excesiva, invertir la parte inferior sobre una tapa desplazada y permitir secar al aire para evitar la estanqueidad entre las partes superior e inferior de la placa durante la incubación.



Colocar las cantidades necesarias de agua destilada y agar para evitar un agar muy diluido o muy concentrado.



Proteger de la luz durante el secado.



No utilizar las placas si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración, deshidratación, grietas o cualquier otro signo de deterioro.



Después de su uso, las placas preparadas, los recipientes de muestras y otros materiales contaminados deben esterilizarse en autoclave antes de ser desechados.



Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura de 2 a 8 °C, en su envase original hasta justo antes de su uso.



Evitar la congelación y el sobrecalentamiento; y no abrir hasta que vayan a utilizarse.



Permitir que el medio se caliente a temperatura ambiente antes de la inoculación. .

3. ¿Por qué no se puede autoclavar el chromo agar? Hay que tener mucho cuidado ya que para este tipo de cultivos lo más recomendable es no utilizar el autoclave debido a la presión y el sobrecalentamiento que ocupa, pudiendo desintegrar o degradar los cromógenos utilizados en los medios, lo cual no nos permitirá diferenciar las diferentes especies de cándida (Carroll, Morse, Mietzner, & Miller, 2016).

BIBIOGRAFÌA

Arenas, R. (2014). Micología Médica Ilustrada (Quinta Edición) (p 390-396). México: Mc Graw Hill Education. Bonifaz, A. (2012). Micología Médica Basica (Cuarta Edición) (p 94-102). México: Editorial Mc Graw Hill. Carroll, K., Morse, S., Mietzner, T., & Miller, S. (2016). Microbiología Médica (Vigesima Séptima Edición). Editorial Mc Graw Hill Education. Restrepo, N. M., & Cardona, N. (2018). Métodos de diagnóstico en micología. Revista CES Medicina 32 (1). doi:10.21615/cesmedicina.32.1.5

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