Protocolo Frotis tinción Giemsa PDF

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PRÁCTICA 2: OBTENCIÓN DE UN FROTIS SANGUÍNEO Y TINCIÓN DE GIEMSA Materiales para el Frotis Sanguíneo - 2 portaobjetos. - Gasas estériles o algodón - Lanceta. - Alcohol etílico (de 70º) - Guantes Obtención de un frotis sanguíneo: 1. Obtención de la muestra (sangre capilar): Con la lanceta realizar una punción en la yema del dedo índice o corazón previamente desinfectado con alcohol de 70º. 2. Depositar una gota en el extremo de un portaobjetos y colocarlo encima de la mesa. 3. Proceder a tapar el dedo pinchado y desechar la lanceta en un contenedor de residuos. 4. Realizar la extensión de la muestra. Colocar el segundo portaobjetos por delante de la muestra (que se encuentra en el primer portaobjetos colocado encima de la mesa), con una inclinación de 45º respecto al que contiene la muestra. Primero se procederá a un deslizamiento hacia el extremo donde se encuentra la gota de sangre. De esta forma se consigue que por capilaridad, la sangre ocupe todo el borde del segundo portaobjetos. Seguidamente se procederá a la extensión en sentido contrario de forma rápida y uniforme.

5. Dejar secar al aire. 6. Etiquetar el portaobjetos. Si el frotis está bien realizado deberemos observar tres partes: la cabeza, el cuerpo y la cola (forma de pluma). Es en el cuerpo donde realizaremos la observación y el estudio.

Una vez que la extensión de sangre se ha secado al aire procedemos a la tinción. Materiales: 1. Frotis sanguíneo 2. Guantes 3. Alcohol metílico absoluto 4. Colorante Giemsa 5. Tampón PBS 6. Pipeta Pasteur 7. Cubeta 8. Frasco lavador 9. Agua destilada 10. Tubo de ensayo 11. Un cubreobjetos

Tinción con GIEMSA:

1. Fijar el frotis con metanol absoluto durante 3 minutos. 2. Preparar una solución 1:9 con Giemsa y tampón PBS (1ml de colorante Giemsa y 9 ml de tampón PBS).

3. Llenar el porta con la solución anterior durante 10 minutos. 4. Lavar con agua destilada 5. Dejar secar 6. Aplicar el cubreobjetos sobre la preparación. 7. Observar al microscopio

¿Cómo vemos las células con esta tinción? A) Citoplasma: rosa B) Núcleos: azul C) Eritrocitos: rojo

Observación al Microscopio: 1. Con débil aumento explorar la preparación para localizar la zona en la que el frotis es más perfecto. Los lugares más aptos son aquellos en los que la extensión de los glóbulos se ha conseguido en una sola capa, están bien teñidos

y no se han producido precipitados de los colorantes. Cuando se observe una zona apta, pasar a aumentos más fuertes.

2. En el campo del microscopio, se verán con un dominio predominante los glóbulos rojos, hematíes o eritrocitos , teñidos en color rojo. No tienen núcleo y son más delgados por el centro que por los bordes. Los glóbulos blancos o leucocitos se identifican fácilmente por la presencia de núcleo. Hay varias clases de glóbulos blancos: o los linfocitos algo mayores que los glóbulos rojos, con un núcleo muy voluminoso que ocupa casi todo el glóbulo, aparece fuertemente teñido en color violeta oscuro. o los monocitos son los leucocitos mayores, poco frecuentes normalmente, hay que desplazarse por la preparación para encontrar alguno. Tienen un núcleo muy grande y redondeado que aparece teñido en color violeta.(Es bueno que recuerdes su función que es la de fagocitosis). o los polinucleares presentan el núcleo como fragmentado o con aspecto arrosariado. o los eosinófilos, con granulaciones abundantes de color rojizo y el núcleo teñido de color azul marino. Estos glóbulos aumentan su número en caso de parasitosis o procesos alérgicos. o los basófilos presentan un núcleo teñido de rojo y las granulaciones del citoplasma de color muy oscuro. Las plaquetas aparecen como pequeños fragmentos teñidas de color violeta. Estas células intervienen en el proceso de coagulación sanguínea. 3. El número promedio de glóbulos rojos en el hombre es de 5.000.000 por mm 3 de sangre. La cifra media de glóbulos blancos es de 7.000 a 8.000 por mm 3. Hay por tanto un glóbulo blanco por cada 600 ó 700 glóbulos rojos. Por lo tanto para ver todos los tipos de glóbulos blancos debes buscarlos en distintos campos de la preparación. El número de plaquetas es de unas 250.000 por mm3....