Pruebas bioquimicas - es un mega resumen PDF

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INTRODUCCIÓN: Las pruebas bioquímicas en microbiología son un conjunto de ensayos químicos que se realizan a los microorganismos presentes en una muestra con la finalidad de identificarlos; estos microorganismos suelen ser bacterias. Hay un gran número de pruebas bioquímicas a disposición de un microbiólogo. Sin embargo, la elección de estas pruebas se basa en hallazgos preliminares, como el patrón de tinción de Gram y los caracteres de crecimiento, que permiten asignar la bacteria a una categoría particular. Las pruebas bioquímicas se basan principalmente en las propiedades metabólicas de cada tipo de bacteria. No todas las bacterias poseen las mismas propiedades, por lo cual se investiga si estas poseen alguna enzima en particular mediante la adición del sustrato y esperando a que ocurra la reacción. Comúnmente esta determinación viene dada por un cambio de color o de pH en el medio de cultivo. Con frecuencia se requieren menos de 15 pruebas bioquímicas para la identificación confiable de una bacteria hasta el nivel de especie. Realizar más pruebas bioquímicas puede aumentar la confianza en la identificación.

DESARROLLO DE CLASE: PRUEBAS

CARBOHIDRATOS OBSERVA LA LIPIDOS

AMINADOS

Pruebas Bioquímicas:

E + S ↔ ES ↔ E + P Se pueden resumir en los siguientes puntos: •Sustrato (contenido en el medio de cultivo). •Enzima o vía metabólica (secretada o en el interior del microorganismo). •Producto. •Revelador y/o indicador (aunque algunas no los emplean).

1.DEGRADACIÓN DE CARBOHIDRATOS: CALDO DE GLUCOSA: Se trata de un caldo nutritivo el cual tiene glucosa. Sin emisión de gas: Al degradar la glucosa se genera acido, y al agregar un indicador se produce cambio de color pasando de un tono rojizo a un color amarillo.

Caldo RM/VP Sustrato: Glucosa. Vías: Fermentación ácida o neutra. Producto: Acido orgánicos o acetoína. Reveladores: Solución de Rojo de Metilo, Alfa Naftol y KOH 40%.

PSEUDOMONA

Se mantiene la coloración rojiza ROJO DE FENOL

Cambia la coloración a amarillo.

E. COLI Con emisión de gas: Al degradar la glucosa en ausencia del oxígeno por medio de la fermentación se libera co2; el cual queda capturado en la campana. No hay presencia de gas. AEROBIO

SALMONELLA ROJO DE METILO Y CAMPANA E. COLI

Si hay presencia de gas en la campana. ANAEROBIO FACULTATIVO

DEGRADACIÓN CON FERMENTACIÓN: AGAR ALMIDON: El almidón es producido principalmente por plantas superiores, está compuesto de amilasa y amilopectina. Diversas enzimas amilolíticas hidrolizan almidón y sus productos.

MICRORGANISMO

Sustrato: Almidón (polímero de glucosa). Enzima: Amilasa (exoenzima). Producto: Glucosa. Revelador: Lugol. El lugol con el almidón forman un complejo color café-púrpura que desaparece cuando el almidón ha sido degradado.

COLOR INDICADOR COLOR ANTES DE DESPUÉS DE COLOCAR AGREGAR EL EL INDICADOR INDICADOR LUGOL AZUL BACILLUS SP. CREMA CLARO LUGOL BORDES SIN STAPHILOCOCCUS CREMA AUREUS. CLARO PIGMENTACIÓN

RESULTADO

NO DEGRADA ALMIDÓN DEGRADA ALMIDÓN

CALDO GLUCOSADO: En este proceso en la fermentación se obtienen dos productos: ácidos mixtos y acetoina, se verifica la presencia de acetoina con el indicador alfa naftol con el cual toma una coloración roja. Los ácidos mixtos no se pintan.

2.DEGRADACION DE AMINOACIDOS: LICUEFACCION DE GELATINA: La gelatina es una proteína que tiene la capacidad de gelificar, cuando es hidrolizada por la gelatinasa en los aminoácidos que la componen pierde su característica de gelificar. Se pueden emplear varios medios que permiten la visualización macroscópica como la gelatina adherida a carbón activado.

Gelatina Nutritiva Sustrato: Gelatina (proteína). Enzima: Gelatinasa (Proteasa, exoenzima). Producto: Aminoácidos. Revelador: No requiere o puede emplearse el carbón activado en

BACTERIAS E.COLI

ESTADO DEL MEDIO SOLIDO

SEUDONOMA SOLIDO

DESPUÉS TRAS RESULTADO DE UN REFRIGERACION TIEMPO SOLIDO SOLIDO NO DEGRADA.GELLIQUIDO LIQUIDO SI DEGRADA.GEL+

AGAR UREA: La hidrólisis de la urea por la enzima ureasa libera dos moléculas de amoniaco que alcaliniza el medio, entonces se vira el indicador de pH, en el caso del rojo de fenol una prueba positiva es color bugambilia.

Caldo urea o agar urea de Cristensen. Sustrato: Urea. Enzima: Ureasa. Producto: Amoníaco. Indicador: Rojo de fenol.

BACTERIA

COLOR INDICADOR DEL MEDIO

COLOR DEL MEDIO

RESULTADO

PROTEUS SP E.COLI

NARANJA CLARO NARANJA CLARO

ROJO DE FENOL ROJO DE FENOL

DESPUESDEL INDICADOR GROSELLA POSITIVO NARANJA CLARO

NEGATIVO

CALDO PEPTONADO: La peptona es la degradación parcial de una proteína, al ser degradada produce grupos aminos entre ellos los azufrados y triptófanos, los primeros liberan ion sulfhídrico que reacciona con el plomo coloreándose de negro. DEGRADACIÓN DE AZUFRADOS: BACTERIAS

COLOR INDICADOR DEL CALDO

COLOR DESPUES DEL IND.

RESULTADO

E.COLI CITROBACTER

CREMA CREMA

CREMA NEGRO

NEGATIVO POSITIVO

PLOMO PLOMO

DEGRADACIÓN DE TRIPTÓFANO: El triptófano al reaccionar con el reactivo de kovacs produce indol, y este se revela con un anillo color grosella.

BACTERIAS E.COLI CITROBACT ER

COLOR NATURA L CREMA CLARO CREMA CLARO

INDICAD OR

COLORACI ON

RESULTAD OS

KOVACS

ANILLO GROSELLA CREMA CLARO

POSITIVO

KOVACS

DEGRADACION DE NITROGENO:

CALDO NITRATADO:

NEGATIVO

El nitrito reacciona con dos reactivos: ácido sulfanílico y dimetil-a-naftilamina (o a-naftilamina). La reacción de color se debe a la formación de un compuesto diazonio, p - sulfobenceno-azoα-naftilamina. Cuando la prueba resulta negativa para nitritos se utiliza la prueba del zinc para reducir químicamente los nitratos presentes a nitritos y formar con los reactivos de Griess el compuesto colorido.

Caldo nitratos Sustrato: Nitrato de sodio. Enzima: Nitrato reductasa. Producto: Nitritos. Revelador: Reactivos de Griess.

BACTERIAS

E. COLI SEUDOMONA

COLORA INDICADOR COLOR RESULTADOS NATURAL DESPUÉS DE LA REACCIÓN CREMA GRIESS NARANJA POSITIVO ROJIZO CREMA GRIESS CREMA NEGATIVO

DEGRADACIÓN DE LÍPIDOS:

AGAR LECTINA: La lecitina es un lípido y se degrada en fosfolípidos ,la prueba bioquímica es la aparición de una halo transparente que evidencia colonias.

Observaciones:  El agar lecitina está compuesto por yemas de huevo, lo que le proporciona lípidos.  Estos procesos sirven para diferenciar los microorganismos en un medio.

 Los microorganismos degradan carbono por respiración o fermentación.  El movimiento del cultivo es causado por la emisión de gas co2.  Los colorantes sirven para evidenciar el acido liberado al consumir glucosa, en el caldo glucosado.  Se puede verificar la degradación del agar gelatina poniéndolo en el refrigerador.

Conclusiones:

 La función principal de las pruebas bioquímica es la de identificar el tipo de microorganismo con el que se está tratando.



Los cambios en el color o estado nos demuestran la acción de las enzimas de los microrganismos.

 E. Coli es una bacteria anaerobia facultativa pues puede existir en ausencia de oxígeno.  El lugol pigmenta de azul el almidón y el que una muestra no se pigmente nos demuestra la degradación de este compuesto.

Sitios web: https://www.lifeder.com/pruebas-bioquimicas-microbiologia/ http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/U3b_PruebasBioquimicas_17458. PDF...