spectrophotométrie - corrigé L2 BOPE PDF

Title spectrophotométrie - corrigé L2 BOPE
Course Biochimie
Institution Université de Brest
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Poste de spectrophotométrie - corrigé

Déterminer une concentration par spectrophotométrie A 1 mL DO

S1 er

1

1 mL S2

2ème 1 mL 3ème

S3 1 mL

4ème

S4

DO Spectrophotomètre

1000 λ(nm)

300 Spectre d'absorption

5ème 1 mL

S5

Trouver λ max (S2) = x ; 600 nm < x < 700 nm , car S2 est bleue. B

Bleu de méthylène Ci = 30 mg.L-1

Deux tableaux d'étalonnage : un avec V f = 5mL , l'autre avec V f = 3 mL .

0

1

2

3

4

5

30

30

30

30

30

0

6

12

18

24

30

V i (mL )

0

1

2

3

4

5

V solv ( mL)

5

4

3

2

1

0

V f (mL )

5

5

5

5

5

5

Tubes

0

1

2

3

4

5

30

30

30

30

30

Tubes

Ci ( mg.L−1 ) Cf (mg.L

−1

Ci ( mg.L

−1

)

)

Cf (mg.L−1 )

0

6

12

18

24

30

V i (mL )

0

0,6

1,2

1,8

2,4

3

V solv ( mL)

3

2,4

1,8

1,2

0,6

0

V f ( mL)

3

3

3

3

3

3

Préparation de la gamme étalon. Diluer les solutions de la gamme en fonctions des Cf du tableau.

C Mesurer DO (λ max ) des six tubes de la gamme étalon correspondant à V f = 3 mL . 1 mL 0

1 mL

1

0

1 mL

DO1 DO2

2

1 mL

DO3 DO

3

DO4

1 mL 4

DO5

1 mL 5

Gamme

Solutions

Tubes

0

1

2

3

4

5

B1

B2

DO (λ max)

0

0,227

0,388

0,581

0,775

0,980

0,533

Moyenne

[C] (mg.L−1 )

0

6

12

18

24

30

16,4

89,67

Tableau de dilution de B2 :

D = 1/X

X =2

X =5

X = 10

X = 20

V B2

( mL)

1,5

0,6

0,3

0,15

V solv

(mL )

1,5

2,4

2,7

2,85

0,236

0,208

Vf

( mL)

DO

(λmax )

3 1,060 (Hors gamme)

0,451

DO (λmax )

[C] (mg.L-1 ) Droite étalon...


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