Title | spectrophotométrie - corrigé L2 BOPE |
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Course | Biochimie |
Institution | Université de Brest |
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Poste de spectrophotométrie - corrigé
Déterminer une concentration par spectrophotométrie A 1 mL DO
S1 er
1
1 mL S2
2ème 1 mL 3ème
S3 1 mL
4ème
S4
DO Spectrophotomètre
1000 λ(nm)
300 Spectre d'absorption
5ème 1 mL
S5
Trouver λ max (S2) = x ; 600 nm < x < 700 nm , car S2 est bleue. B
Bleu de méthylène Ci = 30 mg.L-1
Deux tableaux d'étalonnage : un avec V f = 5mL , l'autre avec V f = 3 mL .
0
1
2
3
4
5
30
30
30
30
30
0
6
12
18
24
30
V i (mL )
0
1
2
3
4
5
V solv ( mL)
5
4
3
2
1
0
V f (mL )
5
5
5
5
5
5
Tubes
0
1
2
3
4
5
30
30
30
30
30
Tubes
Ci ( mg.L−1 ) Cf (mg.L
−1
Ci ( mg.L
−1
)
)
Cf (mg.L−1 )
0
6
12
18
24
30
V i (mL )
0
0,6
1,2
1,8
2,4
3
V solv ( mL)
3
2,4
1,8
1,2
0,6
0
V f ( mL)
3
3
3
3
3
3
Préparation de la gamme étalon. Diluer les solutions de la gamme en fonctions des Cf du tableau.
C Mesurer DO (λ max ) des six tubes de la gamme étalon correspondant à V f = 3 mL . 1 mL 0
1 mL
1
0
1 mL
DO1 DO2
2
1 mL
DO3 DO
3
DO4
1 mL 4
DO5
1 mL 5
Gamme
Solutions
Tubes
0
1
2
3
4
5
B1
B2
DO (λ max)
0
0,227
0,388
0,581
0,775
0,980
0,533
Moyenne
[C] (mg.L−1 )
0
6
12
18
24
30
16,4
89,67
Tableau de dilution de B2 :
D = 1/X
X =2
X =5
X = 10
X = 20
V B2
( mL)
1,5
0,6
0,3
0,15
V solv
(mL )
1,5
2,4
2,7
2,85
0,236
0,208
Vf
( mL)
DO
(λmax )
3 1,060 (Hors gamme)
0,451
DO (λmax )
[C] (mg.L-1 ) Droite étalon...