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UNIVERSIDAD CRISTOBAL COLON LICENCIATURA EN MÉDICO CIRUJANO

FACULTAD DE MEDICINA

ENSAYO COLONIAS BACTERIANAS PRESENT A

DOCENTE

ASIGNATURA MICROBIOLOGÍA

MÉ MÉDICO DICO CIRUJAN CIRUJANO O MICRO MICROBIOLOG BIOLOG BIOLOGÍA ÍA

INTRODUCCION Un cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las condiciones físicas, químicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma controlada. En general, podemos distinguir cultivos líquidos y sólidos en función de las características del medio y cultivos discontinuos y continuos en función de la disponibilidad de nutrientes en el medio. Los medios de cultivo se dividen por su finalidad en: medios de enriquecimiento que tratan de aumentar el número de bacterias existente, si consideramos que se encuentran en cantidad muy escasa, a la vez que inhiben la flora de asociación acompañante. Los medios selectivos son aquellos que poseen algún componente que permite o no le crecimiento de una especie bacteriana, carácter de importancias para su identificación, y los diferenciales, aquellos que las diversas especies que hay que sembrar su crecimiento se da de forma distinta, por lo que suelen llevar indicadores (sustancias que varían su coloración según el pH del medio) u otros índices de reacciones químicas definidas. Ambos medios selectivos o diferenciales pueden ser líquidos o sólidos.

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DESARROLLO La colonia bacteriana no se extiende en forma indefinida sobre la superficie del medio de cultivo, sino que representa un borde, el cual por su forma es característico para ciertas especies de bacterias. Cuando tienes un cultivo en agar (caja petri) siempre es relevante anotar la morfología colonial (colonias aisladas) de la cepa bacteriana para facilitar la identificación, los siguientes datos te serán de utilidad: Generalmente se reporta la morfología colonial tal como uno la percibe, por ejemplo si se ves que las colonias bacterianas son como puntitos, pues reportan que son puntiformes, si son lisas pues reportan que son lisas. Si observas que están como moco, pues reportan que están mucosas, si su color es amarillento pues reportan que son de color am arillento, y así sucesivamente., también puedes agregar características que consideres importante para identificarlas, por ejemplo el olor., Aun así checa las siguientes imágenes para orientarte. Las bacterias aisladas y bien definidas se desarrollan a partir de una célula bacteriana individual por lo que puede considerarse que todas las bacterias en la colonia son idénticas desde el punto de vista genético. Las características de la morfología colonial bacteriana que nos ayudan a seleccionar e identificar a estos microorganismos son: Tamaño en mm Color Forma: puntiforme, circular, filamentosa, ameboide, alargada o fusiforme. Elevación: plana, elevada, convexa, pulvinada y umbonada. Borde o margen: entero, ondulado, lobulado, filamentosa, enrollado o festoneado. Superficie: lisa o rugosa. Aspecto: húmeda o seca. Transmisión de la luz: traslucida, opaca o transparente. Reflexión de la luz: brillante o mate. Consistencia: butirosa o blanda, dura o friable.

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AGRUPACIONES COLONIAS.

MACROSCÓPICAS:

Estas agrupaciones son visualizadas a simple vista y corresponden al crecimiento en un punto de una única línea celular hasta formar una colonia (todas las células que componen la colonia provienen de una única célula). El cultivo se realiza en un medio de cultivo sólido para formar colonias que serán distintas y características para cada tipo bacteriano; el medio sólido impide el posible movimiento de los individuos de la colonia y favorece su agrupamiento. Para obtener colonias bacterianas nunca se empleará directamente un medio de cultivo líquido. Estas colonias presentan una morfología macroscópica fácilmente reconocible y variable en función de: Las características del medio de cultivo sólido donde se ha desarrollado la bacteria constituyen un criterio de gran importancia a la hora de hacer una valoración taxonómica de la misma. El tipo de bacteria problema: Las bacterias de mayor movilidad presentan mayor tendencia a dar colonias extendidas y planas frente a las que no presentan esta característica. Es importante considerar que un mismo tipo de bacteria puede dar lugar a distintos tipos de colonias dependiendo del medio de cultivo sólido empleado, e igualmente, distintos tipos bacterianos pueden crecer formando colonias similares. De cualquier forma la verificación de las diferentes formas, tamaños y aspectos de las colonias va a servir como: Un dato más en la tipificación de la bacteria problema. Una medida de control para una siembra correcta. Lo ideal es que las colonias se encuentren más separadas que juntas y que en el proceso de la siembra no haya habido contaminación. Y verificación de que el medio de cultivo no está contaminado Los medios sólidos en los que se verifican las colonias pueden ser en placa o en tubo con agar inclinado, y siempre, sembrándolo por el sistema de estrías. EN PLACA, SEMBRÁNDOLO POR ESTRÍAS. El tamaño, forma y aspecto de las colonias obtenidas por esta técnica suele ser bastante constante para cada género y especie bacteriana, hecho que se puede utilizar como característica diferencial. Para ello debemos considerar los siguientes aspectos de las colonias: tamaño, forma, superficie, consistencia, transparencia y coloración y presencia o no de halos de transparencia. 4

MÉ MÉDICO DICO CIRUJAN CIRUJANO O MICRO MICROBIOLOG BIOLOG BIOLOGÍA ÍA TAMAÑO DE LAS COLONIAS. TAMAÑO PEQUEÑO: colonias puntiformes con aproximadamente 0,5 mm de diámetro o inferiores. TAMAÑO MEDIANO: de 1 a 2 mm de diámetro. TAMAÑO GRANDE: de 4 a 6 mm de diámetro. Tamaño muy grande: colonias extendidas en forma de velo invadiendo toda la superficie del medio de cultivo. FORMA DE LA COLONIA. Atiende a la forma, elevación y borde de la colonia. Según la forma se dividen en puntiforme, circular, rizoide, filamentosa, irregular y fusiforme. Según la elevación: plana, convexa (semiconvexa), cóncava (semicóncava), umbiculada, acuminada, planoconvexa, papilada, en meseta, semiesférica, umbeliforme, elevada, etc Según los bordes: entero, lobulado, rizoide, filamentoso, ondulado, aserrado, espiculado, redondeado, etc. SUPERFICIE DE LA COLONIA. Corresponde al aspecto de la colonia. Pueden ser lisas, rugosas, planas, acuminadas, umbilicadas, mucosas, secas, etc. Es muy importante la diferenciación entre colonias lisas y rugosas, donde las segundas suelen presentar cápsulas u otros componentes superficiales que proporcionan un aspecto más compacto o rugoso, relacionando este tipo de bacterias con una mayor virulencia, la cual se pierde cuando la bacteria sufre un cambio de rugosa a lisa (no obstante existen bastante excepciones en este hecho). CONSISTENCIA DE LA COLONIA. Las colonias pueden ser duras, viscosas, mucosas, secas, muy secas, cremosas, etc. En general, al mayor parte de las bacterias forman colonias de consistencia más o menos cremosa, aunque existen muchas excepciones y también, con poca frecuencia, pueden tener consistencia mucosa como la de la mayor parte de las levaduras. TRANSPARENCIA Y COLORACIÓN. En general es frecuente algún tipo de color en las colonias; esto puede ser debido a la elaboración de algún tipo de pigmento, a la formación de alguna sustancia por parte de la bacteria o por la utilización de algún sustrato del medio que acidifique o alcalinice a éste de forma que, ante la presencia de indicadores de 5

MÉ MÉDICO DICO CIRUJAN CIRUJANO O MICRO MICROBIOLOG BIOLOG BIOLOGÍA ÍA pH que están en el medio, cambia de color, hecho que nos ayuda a conocer la utilización de ese sustrato por parte de la bacteria (tipificación bioquímica). La transparencia puede ser completa, en cuyo caso, se habla de colonias translúcidas, semitransparentes o completamente opacas, dependiendo del tipo bacteriano o del medio de cultivo utilizado. PRESENCIA O AUSENCIA DE HALOS DE TRANSPARENCIA. Es muy frecuente la presencia de distintos sustratos en el medio de cultivo que influyen de forma decisiva en el aspecto de la colonia, uno de ellos es la presencia o no de halos de transparencia en torno a la colonia. EN TUBO, CON AGAR INCLINADO, SEMBRÁNDOLO POR ESTRÍAS. Cuando se siembra una muestra en tubo con medio de cultivo sólido las colonias que aparecen en dicho medio presentan las mismas características que en placa, pero su visualización es mucho más dificultosa porque se dispone de menor superficie y su crecimiento en colonias en dicho medio es distinto.

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MORFOLOGÍA COLONIAL

MORFOLOGÍA COLONIAL BACTERIANA SUPERFICIE.

MORFOLOGÍA COLONIAL BACTERIANA FORMA.

MORFOLOGÍA COLONIAL BACTERIANA BORDE.

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STREPTOCOCCUS SPP. Streptococcus-betahemolisis medio de cultivo agar sangre.

KL EBS IELLA S PP. , E N AGAR M AC CO NKEY . Colonias grandes planoconvexa, mucoides, brillantes, forma irregular, también se observan redondeadas, bordes ondulados, lactosa positivo (consume el carbohidrato lactosa lo cual acidifica el medio y el indicador rojo de fenol cambia rojo-rosado, por ello las colonias se ven de ese color).

Colonias rosas, mucoides, bordes irregulares, convexas. Medio de cultivo Mac Conkey

Colonias de Klebsella pneumoniae en medio agar Mac Conkey.

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MÉ MÉDICO DICO CIRUJAN CIRUJANO O MICRO MICROBIOLOG BIOLOG BIOLOGÍA ÍA Colonias de Klebsiella pneumoniae en medio agar Mac Conkey.

STAPHYLOCOCCUS SPP. Colonias medianas, convexas, de color blanco, forma circular, bordes redondeados. Staphylococcus aureus en agar sangre.

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BACILLUS SPP. Colonias medianas, convexas, blanquecinas como cera, forma fusiforme y circular, bordes redondeados. Colonias de Bacillus sp en agar nutritivo

Colonias Grandes, planas, blanquecinas, forma irregular, bordes lobulados, dan la apariencia de estar secas, también se observa una protuberancia en el centro de las colonias lo cual les da una apariencia de huevo estrellado. Colonias de Bacillus sp en agar nutritivo.

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ESCHERICHIA COLI. Las colonias de esta bacteria varían según el medio de cultivo donde crezcan, en este caso el medio de cultivo es Agar Eosina Azul de Metlileno abreviado EMB, podemos observar en la imagen que las colonias tienen en demasía una coloración verde-metalico, lo cual es característico de E. coli, aunque hay otras bacterias que logran producir este color es muy tenue y escaso. Se logran ver colonias aisladas, son colonias medianas, circulares, convexas, moradas, contorno verde -metalico, bordes redondeados.

Color verde metálico en las colonias característico de Escherichia coli en medio de cultivo. EMB

Escherichia coli en agar Mac Conkey. Se logran ver colonias aisladas, son colonias medianas, circulares, convexas, bordes redondeados, lactosa positivas lo que les da coloración rosada.

Color verde metálico en las colonias característico de Escherichia coli en medio de cultivo. EMB

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SERRATIA MARCENSENS. Colonias medianas, brillantes, convexas de color rojo intenso, forma circular, bordes redondeados o irregulares, acuminada y/o con protuberancia en el centro. Cultivo de Serratia marcescens , se observa el color rojo obscuro intenso característico de est a bacteria. Medio de cultivo BHI

Cultivo de Serratia marcescens, se observa el color rojo intenso que es característico de esta bacteria

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PROTEUS MIRABILIS. El genero Proteus es bien conocido por su amplia motilidad, esta se puede evidenciar en medios nutritivos como agar sangre, agar nutritivo, agar BHI, entre otros. Se forman una especie de ola alrededor de las colonias bacterianas y esta se desplaza de forma radial, a este fenómeno se le llam a efecto de swarming el cual es característico de Proteus sp .Colonias medianas, convexas, blanquecinas o translucidas, forma circular, bordes redondeados hay precencia de swarming . Proteus mirabilis en agar BHI con un efecto de swarming tenue

Proteus mirabilis en agar BHI se puede observar claramente el efecto de swarming.

Proteus vulgaris en agar sangre se observa claramente el efecto de swarming, lo qu e evidencia la gran motilidad de la bacteria. . 13

MÉ MÉDICO DICO CIRUJAN CIRUJANO O MICRO MICROBIOLOG BIOLOG BIOLOGÍA ÍA METODOS Y HERRAMIENTAS Cultivo y aislamiento de bacterias: En la naturaleza las bacterias están distribuidas, haciendo parte de los diferentes ecosistemas y como todos los demás Seres vivos existentes en la naturaleza estos también necesitan de nutrientes y condiciones adecuadas para su desarrollo y crecimiento. Tales como pH, tem peratura, humedad y fuentes nutricionales, entre otros factores. Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es la observar de su crecimiento en sustancias alim enticias artificiales preparadas en el laboratorio para el cultivo de estos microorganismos. El material alim enticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo el cual cuenta con los factores nutricionales necesarios para el crecimiento de estos. El aislamiento de bacterias a partir de muestras de laborat orio se r ealizan, en la mayoría de los casos, mediante la producción de colonias aisladas en cultivos sólidos, semi- sólidos y líquidos , esta consistencia se obtiene por la adición de un polisacárido denominado agar- agar extraído de algas marinas del genero gellidium, la concentración de este depende del tipo de m edio; si es un medio solido la concentración será entre 1,5% a 2%, en el semi-solido la concentración es 0,5% y si es un m edio liquido es sin agar. Los medios de cultivo simples se preparan con agua, extracto de carne, peptona extracto de levadura, sales inorgánicas y carbohidratos. Algunos medios se les adiciona sustancias como: liquido ascítico, vitaminas, antibióticos, colorantes, sales biliares, sangre y suero o glicerina, obteniendo así una serie de medios de cultivo ya sean enriquecidos, diferenciales, selectivos o de transporte, todo esto con el fin de obtener mayor información en el aislamiento de distint os microorganismos. En el aislamiento de bacterias se utilizan varias técnicas, una de las cuales es siembra por estrías en superficie que comprende distintos métodos como el método clásico y el método francés, la finalidad de estos, es obtener colonias separadas que permitan mayor observación de microorganismos. Método clásico: este método consiste en flamear el asa, con el fin de esterilizarla y no contaminar la muestra, con el asa estéril se toma la muestra del material a estudiar. Se la ex tiende de un extremo a otro formando líneas en zigzag hasta cubrir toda el área de la caja de Petri. Método francés: en este segundo método también se flam ea el asa y se toma la muestra del material a estudiar. Se coloca el inoculo en uno de los extremos de la caja de Petri con el medio de cultivo indicado, se extiende el cultivo haciendo 4 o 5 estrías paralelas, sin romper el agar. Se flamee de nuevo el asa se deja enfriar y sin tomar más muestra, haga 4 o 5 estrías paralelas formando un ángulo recto con las anteriores, este paso se repite hasta cubrir toda el área de la caja de Petri. 14

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MATERIALES UTILIZADOS: Caja de Petri: Recipiente creado por el bacteriólogo alemán Julius Richard Petri, el cual puede ser de plástico o cristal, de forma circular que es utilizado como recipiente de aislamiento para el crecimiento bacteriano junto con el agar nutritivo. CAJA CON LOS DISTINTOS MEDAS DE CULTIVO: ●

Caldo nutritivo.

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Semi-solido.

●

EMB/Solido.

●

Agar manitol sal/Solido.

●

Agar sangre/Solido.

●

Agar nutritivo/Solido.

Escobillón de algodón: Este es un elemento utilizado para la toma de una muestra de un fluido corporal, que luego se utilizada para su siembra en la caja de Petri con el agar sangre. Asa metálica: Elemento utilizado para la toma de muestras solidas o liquidas. Incubadora: Elemento utilizado para r egulando f actores de crecimiento viables como por ejemplo la temperatura, la humedad y la ventilación, que ayuda a promover el crecimiento de la batería o sus colonias. Mechero: Elemento utilizado como fuente para esterilizar el asa, como también en la ayuda de la fijación de una m uestra en la placa de vidr io ( portaobjetos) para luego ser observada al microscopio.

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CONCLUSIÓN Las bacterias están presentes en los diferentes ecosistemas, pero para su crecimiento requieren de condiciones óptimas las cuales les permitan vivir, donde el principio de estos métodos de aislamiento y cultivo, donde consiste en agotar la muestra sobre la superficie del medio para obtener colonias separadas y poder observar sus características, y poder conocer cada cultivo, pero para conocer cada cultivo necesitamos tener el conocimiento básico, saber lo que es un cultivo, como se realiza, que métodos existen para poder realizarla, herramientas y sobre todo con que fin lo hacemos. Este ensayo fue bastante interesante ya que hay algunas especies de bacterias patogenas muy agresivas que tienen como caracteristica formar colonias bacterianas rugosas, las que son lisas suelen ser menos patogenas. y hay que tener en cuenta que esto no es general para todas las bacterias ya que también hay otras especies que sus colonias son lisa y aun asi son extremadamente patogenas, esta correlación bacteria -morfología dependera de la cepa bacteriana y de la especie de la que estemos hablando.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS Pírez M., Mota M.; Morfología y estructura bacteriana. 2008. URL Disponible en: http://www.higiene.edu.uy/cefa/20 08/MorfologiayEstructuraBacteria na.pdf Accedido en fecha: 5 de Septiembre del 2014. Díaz G.A.; Morfología y estructura bacteriana. Centro de formación profesional. Instituto Villaverde. 20092010. URL Disponible en: http://microbitos.files.wordpress.c om/2010/06/morfologia-yestructurabacteriana.pdf Accedido en fecha: 5 de Septiembre del 2014. Madigan, M. T., J.M. Martinko y J. Parker. 2003. Brock Biología de los microorganismos. Madrid, España. 10a edición. Editorial Pearson-Prentice-Hall. Prescott, L.M. Harley, J.P. y Klein, D.A. 2004. Microbiología. Madrid, España. 5a edición. Mc Graw-Hill Interamericana. Aliaga M.E.; Morfología y estructura de las bacterias. Parte I. 2011. URL Disponible en: http://medicinaupv.files.wordpress .com/2011/04/2-3clasemorfologc3ada-y-estructura-delaa-bacterias.pdf Accedido en fecha: 5 de Septiembre del 2014. 16

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