Espermatologia forense y sus procedimientos de análisis en laboratorios PDF

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Summary

investigación de diferentes fuentes, del cual se obtuvo los mas relevante de cada tema, así como los procedimientos para determinar la presencia de los diferentes fluidos corporales....

Description

Definición: 

Semen proviene del latín semen, seminis (semilla). La vida empieza con una semilla.

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El semen o el esperma es una sustancia color blanca compuesto por animoácidos, azúcares, sales, iones, y otros compuestos orgánicos e inorgánicos. Cuya elaboración participan la vesícula seminal, la glándula de cowper y los testículos.

Origen del semen: 

Los espermatozoides son el principal componente celular del semen. Proceden de los túbulos seminíferos del testículo y con diferencia al resto de células del organismo, presentan una sola copia de ADN (haploidismo). Su característica consiste en cabeza y cola.

El semen es sin lugar a duda el mayor de los componentes de una escena de crimen sexual, por lo que es de vital importancia 

Semen empieza a producirse durante la pubertad de los hombres entre los diez y quince años de edad.

El líquido seminal puede ser analizado en casos de probable ataque al pudor (violación).

Toma de muestras para análisis:

Buscar manchas visibles e invisibles. Se aprecian por el color blanco semitransparente y de aspecto grumoso: cuando son frescas el color es ligeramente amarillo y textura endurecida.

Para lugares absorbentes como las telas, manteles, alfombras, etc. Se recorta la mancha y se guarda en una bolsa de papel.

RECOLECCIÓN DE MUESTRAS INDICIOS DE POSIBLE VIOLACIÓN.

Las manchas de semen pueden encontrarse también en toallas, papel sanitario, pañuelos desechables o de algodón, pisos, asientos de auto o inodoros y en el cuerpo de la víctima.

Para manchas secas en lugares no transportables o no absorbentes como metal y cristal se recomiendo utilizar un hisopo estéril mojado con agua destilada o solo. Fis. Se puede raspar la mancha con una navaja o bisturí sobre un papel blanco limpio.

Rastros de Condones: 

En las agresiones sexuales, los delincuentes están usando cada vez más condones durante sus ataques y llevando consigo la evidencia para evitar cualquier posibilidad de identificación. Aunque los condones pueden eliminar el descubrimiento de líquidos necesarios para los perfiles de ADN, pruebas todavía pueden estar presentes como resultado de su uso. Los fabricantes producen condones utilizando una variedad de materiales fuera de lo natural y sintético. Como cada fabricante tiene su propia formula, esto puede ayudar al investigador.

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Después de que las muestras de residuos de condón son obtenidas por el personal médico, las trazas individualizadas pueden proporcionar evidencia de penetración necesaria para establecer el corpus delicti de la violación. Esto también se puede utilizar para identificar una marca específica de condón, que puede ayudar a vincular a un sospechoso a la escena si marcas similares se encuentra en su vehículo por ejemplo o residencia.

Semen líquido encontrado en preservativos se atan para que no se derrame su contenido y se introduce en un frasco plástico.

El líquido seminal puede ser analizada con técnicas como la: 

Luminiscencia inducida por luz UV.

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Búsqueda de espermatozoides en manchas por microscopía.

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Presencia de la Fosfatasa ácida.

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Presencia de la Proteína p30 (PSA).

LUZ DE WOOD- LUMINOL

Presencia de pruebas de semen: 

La evidencia de semen mayormente consiste de hisopos o aspiradores de un orificio corporal, manchas en telas o manchas en superficies no absorbentes en investigaciones de violaciones sexuales. Las manchas de semen en superficies no absorbentes son de color blanco a amarillentos y pueden ser difícil de observar. A medida que estas manchas pasen tiempo, tienden a cambiar a color marrón.

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El semen puede esta presente en otros tipos de casos, pero en la mayoría que se encuentra estos tipos de evidencia son en violaciones.

Ejemplo de hisopos de algodón que se utiliza para manchas sospechosas de semen o sangre. Hisopos de algodón:

Luz altravioleta 

Investigadores utilizando luz ultravioleta o luces de alta intensidad para descubrir manchas de semen

Detención de manchas de semen: 

La fosfatasa acida, realizado como mapa, es la técnica que consiste en colocar un papel de filtro grande y humedecido sobre el área

sospechosa de tener una mancha de semen, aplicar presión al papel filtrante y luego esparcir en el papel sustancias químicas que detectan el ácido prostático enzima fosfatasa en el semen. 

Esta técnica detectara manchas de semen muy dilucidas debido a la muy alta concentración de esta enzima en la secreción postrada. Un resultado negativo con la técnica de mapa es evidencia de ausencia de semen en el sustrato sospechoso. Si las manchas de semen están en el sustrato, la técnica describirá cada una de las manchas y proporcionara un mapa de las áreas que necesitan más pruebas. Pruebas de fosfatasa ácida:

Ejemplo de la prueba de fosfatasa ácida en forma de mapa.

PRUEBA DE ORIENTACION FOSFATASA ACIDA PROSTATICA: Identificación de semen en manchas sospechosas: 

La identificación del semen en las manchas sospechosas se logra mediante la identificación de espermatozoide en la mancha o de la proteína p-30. La identificación de los espermatozoides implica hacer un extracto de la mancha, se coloca una gota del extracto en una diapositiva del microscopio, y se mancha el portaobjetos con manchas biológicas que mancharán los componentes del esperma de una manera característica.

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El analista procede a identificar los espermatozoides bajo un microscopio de alta potencia, sobre la base del tamaño, la forma y la tinción, característica de los espermatozoides. Si se descubre que la mancha carece de espermatozoides, el analista someterá el extracto de mancha a electroforesis utilizando

un antisuero que reacciona

exclusivamente con la proteína p-30, en la mancha se considera una

cierta identificación del semen, ya que la proteína p-30 se encuentra solo en la próstata o sus secreciones.

Proteína p30 Prueba que determina si hay presencia de semen o algún otro ADN probado.

Pruebas o marcadores genéticos de semen: 

una vez que el semen ha sido identificado en una mancha, el analista de laboratorio intentará identificar marcadores genéticos en el semen que distinguirán los marcadores genéticos del semen de la víctima de la agresión sexual y de otras posibles fuentes.

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Hay una variedad de marcadores genéticos presentes en el semen que se pueden identificar en la mancha. Además de los marcadores genéticos de la enzima proteína, el análisis de ADN puede tener éxito en la mancha del semen (si hay espermatozoides), brindando datos de identificación adicionales sobre la fuente del semen.

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PRUEBA DE P30 (Determinación de proteína p30 en la identificación de semen)

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Por: QFB Concepción González Contreras

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CYC Tepic, Nayarit

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En 1971, Hara y otros describieron una enzima proteínica en el fluido seminal llamada gammaseminoproteina. En 1978, Sensabaugh y otros, caracterizaron la proteína en detalle, fundamentando que su peso molecular corresponde a 30,000 Dalton, y fue llamada p30. En 1980, el primer ensayo inmunométrico fue desarrollado y, Graves y Sensabaugh, demostraron que el p30 es un marcador forense confiable para la identificación de semen. El rango del p30 es de 200,000 a 5,500,000 de ng/ml de semen. La sensibilidad de la prueba que abarca p30 es de 4 ng/ml por lo que el fluido seminal diluido tiene una proporción de 1 en 1,000,000, siendo perceptible también.

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La prueba p30 está diseñada para la detección cualitativa de la proteína p30 en la identificación de semen. El p30 es un marcador aceptado para la detección de liquido seminal en casos criminales incluyendo individuos vasectomizados o azoospérmicos.

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Las muestras y evidencias en las que se determina la presencia de líquido seminal humano son: hisopados genitales, para genitales y extra genitales, así también, manchas sospechosas en prendas de vestir, preservativos y otros soportes.

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Fundamento

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La proteína p30 presente, reaccionara con el anticuerpo humano monoclonal movible anti-p30 y se forma un complejo movible antígeno-anticuerpo. Este complejo de antígeno-anticuerpo migra a través de la tarjeta absorbente del test hacia el área marcada como “T”. En esta área el anticuerpo anti-proteína p30 humana es inmovilizado. Este anticuerpo inmovilizado captura el complejo antígeno-anticuerpo y se forma un complejo tipo sándwich anticuerpo-antígeno-anticuerpo. Este conjugado otorga una coloración rosa (línea) en la zona marcada como “T”.

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Material y Equipo

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Kit para prueba inmunocromatográfica de p30

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Hoja para bisturí

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Reactivos

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Solución buffer para colocar la muestra

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Método

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En un microtubo colocar 750 µL de buffer de extracción La extracción de muestras de hisopos (corte longitudinal) o manchas (corte aprox. 3mm ó 5mm)

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Agitar en un dispositivo Vortex por 5 segundos.

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Colocar en refrigeración por dos horas (2-8°C). Este procedimiento recupera aproximadamente el 99% de p30 extraída del hisopo.

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Dejar a temperatura ambiente de 3 a 5 minutos.

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Centrifugue la muestra 3 minutos a 3.600 rpm después del paso de extracción.

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Remover el dispositivo y el gotero del paquete sellado.

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Adicionar 300 µL (6-7gotas con el gotero) de la muestra al pocillo “S” del dispositivo.

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Leer los resultados a los 10 minutos.

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Resultado: Positivo si se presenta la coloración rosa en la banda marcada con “T” y “C” y negativo si solo se presenta coloración en la banda marcada como “C”.

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Los resultados positivos se pueden observar después de un minuto dependiendo de la concentración de p30.

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Para resultados negativos se deben esperar 10 minutos.

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Interpretación de resultados

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POSITIVO: Si existen dos líneas rosadas, una en el área “T” de la prueba y en el área control “C”, el resultado es positivo e indica que los niveles de p30 están sobre 4 ng/mL.

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NEGATIVO: Si existe solo una línea rosada en el área de control “C” el test es negativo.

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Esto puede indicar que:

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a) P30 no está presente sobre 4 ng/ml.

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b) Presencia de efecto prozona.

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Que podría dar un resultado falso negativo debido a la presencia de altas concentraciones de p30 en la muestra, como por ejemplo líquido seminal no diluido. En este caso la muestra de ser ensayada nuevamente usando una dilución 10 a 10.000.

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INVALIDO: Si no existe línea rosada visible en el área de control “C” el test no es

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concluyente. Repetir el test y examinar el procedimiento cuidadosamente.

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Limitaciones

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1) Los casetes inmucromatográficos para determinación de proteína P30 es solo para detección in vitro de semen. No para uso diagnóstico.

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2) El test debe ser desarrollado en estricto acuerdo con estas instrucciones para tener resultados seguros y reproducibles.

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3) Si se sospecha un elevado nivel de p30 y el resultado obtenido es negativo el test debe ser repetido con una muestra fresca.

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4) Resultados positivos se podrían obtener con muestras de orina masculina las cuales han reportado un valor de p30 260ng/mL. El antígeno especifico de la vesícula seminal debe no estar presente en la prueba con orina.

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5) Una muestra apropiada debe ser usada puesto que p30 es detectable en el tracto vaginal solo en un máximo de 2 días.

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Especificidad

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A. La hemoglobina (10gr/l) bilirrubina (100mg/l) y muestras lipémicas (5 g/l) no interfieren con los resultados de la prueba.

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B. Concentraciones altas de proteína tales como fosfatasa ácida prostática (1000ng/ml) albumina (20g/l) HCG (900UI/ml) transferrina (5g/l) y prolactina (1mg/l) no interfieren con los resultados de la prueba.

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C. Se pueden obtener resultados positivos en hombres vasectomizados y en muestras de orina pos eyaculación en adultos.

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