Ferramentas da Biologia Celular PDF

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Resumo sobre Ferramentas da Biologia Celular...

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Ferramentas da Biologia Celular  Todas as ciências experimentais dependem de métodos de laboratório para seu estudo  Conhecer as ferramentas da biologia celular é essencial para conhecer a situação atual de conhecimento e as perspectivas futuras para esta ciência  Devido ao pequeno tamanho, O estudo das células depende de microscópios: Tamanho relativo de algumas estruturas biológicas Microscopia óptica 1. 1665: Inglês Robert Hooke Cunhou o termo "célula" Observou células da cortiça 2. 1670: Anthony van Leeuwenhoek Primeiras observação dos microrganismos - esperma, hemácias 3. 1838: Matthias Schleiden e Theodor Schwann Teoria celular  Microscopia óptica Tamanho das células: 1 a 100 μm  Com o maior aumento de um microscópio (1000 X) é possível visualizar A célula, o núcleo, mitocôndrias e cloroplastos Resolução É a capacidade de distinguir objetos separados por pequenas distâncias A resolução é mais importante do que a ampliação Escala de tamanho dos seres vivos Microscopia óptica

 Limite de resolução (LR) teórico do microscópio óptico: ~0,2 μm = 200 nm  Dois pontos separados por menos que 0,2 μm são vistos como um único ponto Mas se a distância entre eles for maior do que 200 nm, eles serão vistos como pontos distintos  O LR é dependente de dois fatores 1. Do comprimento de onda (λ) da luz visível 2. Da

abertura

numérica

(AN)

das

lentes

objetivas

do

microscópio Obs: AN = tamanho do cone de luz que entra nas lentes do microscópio após passa pelo espécime a ser observado Comprimento de onda (λ) Onda Porque se utiliza comprimento de onda igual a 0,5 μm no cálculo do limite de resolução do microscópio óptico? Microscopia óptica Abertura numérica  A abertura numérica é calculada pela seguinte formula: AN = n sen , onde: - n = índice de refração da substância preenchendo o espaço entre a lamínula e a lente objetiva (ar ou óleo de imersão). - n do ar = 1,0 - n do óleo de imersão = 1,4  = metade do ângulo de abertura da lente objetiva  Angulo formado entre o eixo óptico da lente objetiva e o raio de luz mais externo utilizado na formação da imagem

 Maior valor de  é 90°. sen 90 = 1, portando a AN máxima é 1,4 AN = 1,4 x 1 Abertura numérica  Limite de resolução do microscópio óptico  O Limite de Resolução do olho humano = 100 μm Tipos de microscópios

 Microscopia de campo claro ou campo brilhante  Microscopia de contraste de fase  Microscopia de fluorescência  Microscopia confocal  Microscopia eletrônica  Microscopia óptica  Microscopia óptica  Fase das ondas  Microscopia óptica Microscopia óptica  Microscopia eletrônica Desenvolvida na década de 1930  Poder de resolução muito maior, pois utiliza elétrons e não a luz λ dos elétrons é muito menor do que da luz  λ dos elétrons = 0,004 nm (100.000 X menor) LR teórico é de 0,002 nm  Na prática o LR é de 0,2 nm

 LR para amostras biológicas é 1-2 nm, cerca de 100 X maior do que do microscópio óptico  Microscópio eletrônico de varredura Microscópio eletrônico de varredura Como funciona o MEV - Microscopia eletrônica de varredura

 Fracionamento subcelular  A microscopia sozinha não é suficiente para os estudo das células  A obtenção de partes das células pode ser feita pela técnica de

fracionamento

subcelular,

conseguido

através

da

centrifugação diferencial  Fracionamento subcelular  Cultivo de células animais in vitro  Permite estudar o crescimento celular e a diferenciação Manipular geneticamente as células  Estudo da estrutura e função dos genes  Cultivo de células animais  Crescem aderidas a superfície do frasco  Células embrionarias e de tumor são as mais utilizadas  Cultivo de células animais in vitro  Células embrionárias não diferenciadas Obtidas de embriões  Mantêm a propriedade de se diferenciar em todos os tipo de células de um adulto  Usam meios de cultivo complexos: Sais, glicose, aminoácidos, vitaminas,

soro

polipeptídicos)

(fonte

de

fatores

de

crescimento

 Cultivo de células animais in vitro  Culturas primárias  Crescem até cobrir a superfície com uma monocamada de células  A remoção da maioria das células permite a obtenção de culturas secundárias Pode se obter até 50-100 cultivos de fibroblastos humanos  Cultivo de células animais in vitro  Culturas permanentes ou linhagem imortal  Culturas de células embrionárias e de tumor podem ser cultivadas indefinidamente in vitro Tempo de geração de ~20 h...