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BIOLOGIA CELULARUNIVERSIDAD PRIVADA ANTENOR ORREGOFACULTAD DE MEDICINA HUMANAESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANAINFORME DE PRÁCTICA: RECONOCIMIETO DE PROTEÍNAS Y ENZIMAS.Alumno: Asesor(a):NRC:Trujillo – Perú 2021BIOLOGIA CELULARINFORME DE PRÁCTICARECONOCIMIENTO DE PROTEÍNAS Y ENZIMAS.I. INTRODUCC...

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BIOLOGIA CELULAR

UNIVERSIDAD PRIVADA ANTENOR ORREGO FACULTAD DE MEDICINA HUMANA ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

INFORME DE PRÁCTICA: RECONOCIMIETO DE PROTEÍNAS Y ENZIMAS.

Alumno: Asesor(a):

NRC:

Trujillo – Perú 2021

1

Práctica Semana 2: proteínas y enzimas .

BIOLOGIA CELULAR

INFORME DE PRÁCTICA RECONOCIMIENTO DE PROTEÍNAS Y ENZIMAS. I.

INTRODUCCIÓN:

Las proteínas son biomoléculas poliméricas, conformadas por aminoácidos, unidos por enlaces peptídicos. Estas se encuentran en los alimentos de origen animal. Asimismo, posee cuatro niveles de estructura: 1. Primaria: es una estructura básica, solo se presentan en enlaces peptídicos y es de forma lineal. 2. Secundaria: se refiere a las regularidades en las conformaciones locales, mantenidas por puentes de hidrógeno, entre los hidrógenos de amida y los oxígenos de carbonilo en la columna vertebral del péptido. Estas pueden tener forma de alfa hélices y beta lamina.

3. Terciaria: Puede llegar a formase de manera tridimensional. Igualmente, pueden formar puentes salinos y sulfuros.

4. Cuaternario: es la unión de 2 o más cadenas poli peptídicas en una multisubunidad, o proteína oligomérica u oligómera (distintas o idénticas) En el presente informe se darán a conocer las diferentes reacciones con los distintos reactivos expuestos en clase. Estos nos ayudarán a diferenciar las proteínas. Por ejemplo: Biuret, Lugol, Ácido nítrico, Acetato de plomo, Hidróxido de sodio y Fehling. Asimismo, descubriremos las diferentes tinciones de proteínas que se pueden encontrar en las células, tanto bacterianas como; humanas. Esto se hará gracias al colorante: Azul de metileno.

OBJETIVOS

II.

OBJETIVOS GENERALES: -

Reconocer las proteínas y su actividad enzimática.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS: -

2

Observar los distintos colores que se encontraron en cada tubo de ensayo, al realizar la desnaturalización proteica. Diferenciar cada factor que poseen las reacciones enzimáticas. Identificar la importancia sobre saber la temperatura óptima de las enzimas.

Práctica Semana 2: proteínas y enzimas.

BIOLOGIA CELULAR MATERIAL Y MÉTODOS

III.

Materiales Tubos de ensayo Albúmina comercial Pipeta Pasteur Pinza para tubos Vaso de precipitado Agua Triptófano Glicina Caseína Gradilla Alcohol etílico Ácido clorhídrico Almidón Amilasa salival Lactosa Tiptosa Cloruro de sodio Buffer pH 4 Buffer pH 7 Buffer pH 10 Microscopio Portaobjetos Cultivos

Reactivos Rx Biuret Ácido nítrico Acetato de plomo Hidróxido de sodio Rx Fehling Rx Lugol Azul de metileno

RESULTADOS:

IV.

3

Práctica Semana 2: proteínas y enzimas .

Equipos Plancha de calentamiento Termostato

BIOLOGIA CELULAR

Represente la estructura química de una proteína al reaccionar con Biuret: Reacción con Biuret Muestra

1. Glicina y agua

Presencia de proteínas (no/sí)

NO

2. Triptófano y agua NO

‐

‐

Rx. de Biuret (+/‐)

3. Albumina

4. Caseína

SÍ

SÍ

+

+

Represente el tubo

4

Práctica Semana 2: proteínas y enzimas.

5. Agua (muestra control) NO

‐

BIOLOGIA CELULAR Explique qué sucede al calentar a 50°C el tubo n° 3 y 4 ¿Qué coloración presenta al reaccionar con el ácido nítrico? 

Se muestra un precipitado de color amarillo. Reacción Xantoproteica 1. Glicina 2.Triptófano 3. Albúmina 4.Caseína 5. Agua (muestra control)

Muestra

Rx. de ácido nítrico (+/‐)

‐

+

‐

+

Represente el tubo

Identificación de aminoácidos azufrados:

Muestra

Aminoácidos azufrados Albúmina

Rx acetato de plomo e hidróxido de sodio

Represente el tubo

5

Práctica Semana 2: proteínas y enzimas .

+

‐

BIOLOGIA CELULAR

Demostración de desnaturalización proteica

Muestra Soluble/ insoluble

Desnaturalización proteica 1. albúmina a 2. albúmina + ácido 3. albúmina + 70°C clorhídrico alcohol etílico Insoluble Soluble Soluble

Represente el tubo

pH de las proteínas Muestra Rx Limón y vinagre

Caseína + limón

Albúmina + vinagre

+

+

Represente el tubo

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Práctica Semana 2: proteínas y enzimas.

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Hidrólisis del almidón Muestra

1.almidón

Rx de Fehling (+/‐)

2. almidón

3. Almidón + saliva

4. almidón + saliva

+

-

Rx de Lugol (+/‐)

-

+

Represente el tubo

Represente la estructura química de la acción de amilasa salival, efecto de ph y temperatura. Muestra T°/ pH

Actividad Enzimática de la Amilasa salival Efecto de la temperatura Efecto de pH 0°C 37 ° C 92° C 4 7

10

Represente el tubo

Rx. Con Lugol

7

+

+

-

Práctica Semana 2: proteínas y enzimas .

-

+

-

BIOLOGIA CELULAR

Muestra

Actividad Enzimática de la Amilasa salival Especificidad enzimática Almidón

Triptosa

Latosa

Represente el tubo

Rx. Con Lugol Rx con Biuret

+ + +

Rx con Fehling

Tinción de proteínas y modelo celular del tejido epitelial

Observación: Bacterias Coloración: azul de metileno Muestra: Levadura Aumento: 1000X

na 2: proteínas y enzimas.

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Observación: microorganismos o células microbianas. Coloración: s/c Muestra: Bacterias en fresco Aumento: 1000X

Observación: microorganismos o células microbianas. Coloración: azul de metileno Muestra: Bacterias Aumento: 1000X

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Práctica Semana 2: proteínas y enzimas .

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Observación: células epiteliales humanas Coloración: azul de metileno Muestra: células epiteliales Aumento: 1000X

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Práctica Semana 2: proteínas y enzimas.

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VI. DISCUSIÓN O EXPLICACIÓN DE LOS EVENTOS: 1. ¿Qué sucedió con la albúmina y caseína al reaccionar con Biuret?, ¿Por qué presentan esa coloración? Al obtener la caseína y la albúmina y por consiguiente aplicarles el reactivo de Biuret, se puede observar una solución de color violeta debido a que el reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa y alcalina, NaOH. Los cuales se unen con los pares de electrones no compartidos del nitrógeno formando un complejo de coordinación de cuatro enlaces peptídicos de dos cadenas proteicas próximas. Por lo que, la intensidad del color depende de la concentración proteica de la caseína y albúmina. 2. ¿Por qué la glicina, triptófano y agua (muestra control) no cambian al contacto con el reactivo de Biuret? Al aplicar el reactivo de Biuret a la glicina, triptófano y agua, se observa que estos cambian a un color celeste o blanco. Esto se debe a que el reactivo solo actúa frente a enlaces peptídicos con nueve o más aminoácidos y debido a que ninguna muestra logra cumplir dicho requisito, nos da un resultado negativo. 3. ¿Cuáles son los compuestos de la prueba de Biuret? Está compuesto por hidróxido de potasio, sulfato cúprico y tartrato de sodio y potasio. 4. Explica por qué el tubo de ensayo n° 3 y 4, de la Rx xantroproteica, posee un color amarillento: Se dio dicha coloración por que se formó compuestos nitrogenados procedentes de la nitrificación de los grupos bencénicos. Por lo que, al neutralizar la solución, se forma de una coloración amarilla o naranja. La cual, nos da a entender que la reacción salió positiva.

5. ¿En qué consiste la reacción de los aminoácidos azufrados? Consiste en la separación del azufre de los aminoácidos, mediante un álcali, el cual reacciona con el acetato de plomo formando así el sulfuro de plomo. Por ello, la formación del precitado es negruzco.

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Práctica Semana 2: proteínas y enzimas .

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6. ¿Cómo se dio la desnaturalización proteica en la reacción con ácido clorhídrico, alcohol etílico y temperatura? A valores muy extremos de pH, ya sea medios ácidos o básicos, la proteína puede perder su configuración tridimensional. El exceso de iones, H+ y OH– en el medio, desestabiliza las interacciones de la proteína. Este cambio de patrón iónico produce la desnaturalización. La desnaturalización térmica ocurre al aumentar la temperatura. Los aumentos de temperatura se traducen en aumento de los movimientos moleculares que afectan los puentes de hidrógeno y otros enlaces no covalentes, resultando en la pérdida de la estructura terciaria. Este incremento de T° conllevan a disminuir la velocidad de reacción, lo que pasa en el caso de la enzima. 7. ¿Por qué salió positiva la reacción del almidón más saliva? El almidón posee una mezcla de dos polisacáridos amilosa y amilopectina, ambos están formados por glucosa. Para que, el cuerpo humano aproveche la glucosa, de los alimentos que contiene almidón, es necesario degradarla previamente. Por lo que, la saliva realiza dicha función ya que, contiene una enzima llamada amilasa salival. Esta es capaz de romper el almidón y convertirlo en glucosa. Finalmente, el hidrolisis del almidón funcionó correctamente por ello, dio positivo.

8. En el último experimento, ¿por qué tiene un efecto el pH y la temperatura en la actividad enzimática? Fundamenta: Las enzimas tienen estructura primaria, secundaria y terciaria. Algunas, además, poseen estructura cuaternaria. La actividad catalítica de las enzimas es muy alta dependiente de la estructura tridimensional que tenga la cadena polipeptídica. Mayormente hay una conformación nativa, que es la que tiene la enzima en el sitio en donde se encuentra de manera natural. Por lo tanto, si cambiamos su pH o temperatura se podría disminuir su actividad. Al pH en donde la enzima presenta máxima actividad se le conoce con el nombre de pH óptimo y lo mismo para la temperatura.

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Práctica Semana 2: proteínas y enzimas.

BIOLOGIA CELULAR 9. ¿Por qué en las células epiteliales humanas se tiñen más el núcleo a diferencia de las bacterias, las cuáles se tiñen por completo? En cuanto a las células epiteliales humanas, se tiñe más la parte nuclear porque hay más proteínas almacenadas en esta. Ahí se realiza la síntesis de proteínas. Por otro lado, las bacterias tienden a teñirse por completo ya que su núcleo se encuentra en una formación alargada (abraca toda la célula) Por lo que, se pigmenta el núcleo, membrana nuclear, pared celular, membrana citoplasmática.

CONCLUSIONES:

VI.

1.

Con esta práctica nos dimos cuenta de que algunas sustancias reaccionaban a los propuestos reactivos, pero otras; no. Por ejemplo, en el Rx de Biuret, la Glicina, el triptófano, Albúmina, Caseína y el Agua no tuvieron reacción. Por el contrario, la Albúmina y Caseína; sí. Ya que este reactivo solo detecta proteínas.

2.

En el primer tubo de ensayo, se utilizó la T° la cual, dio un efecto insoluble de la albúmina y se tornó de un color blanquecino, el segundo, cambio progresivamente el color a transparente y, también, posee un precipitado donde se da a conocer el pH positivo. El último, tiene un cambio de color y una consistencia espesa.

3.

Dentro de los Factores que incluyen las reacciones enzimáticas tenemos: cambios en el pH, cambios en la temperatura, Presencia de cofactores, las concentraciones del sustrato y de los productos finales.

4.

Es importante saber cuál es la temperatura de las enzimas ya que, esa elevación incrementa la velocidad de una reacción catalizadora. Al principio la velocidad de reacción aumenta, cuando la temperatura se eleva, debido al incremento de la energía cinética de las moléculas reactantes. A esta temperatura predomina la desnaturalización con pérdida precipitada de la actividad catalítica.

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REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

VII.

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