Laporan Media Pertumbuhan Mikroba, Teknik Aseptis dan Sterilisasi PDF

Preview

Summary

LAPORAN PRAKTIKUM MIKRBIOLOGI UMUM ( MEDIA PERTUMBUHAN MIKROBA, TEKNIK ASEPTIS DAN STERILISASI) Oleh : Nama : MITHA FARIHATUL WARDANIA NIM : 19620007 Kelas / Kelompok : BIOLOGI A Tanggal Praktikum : 16 SEPTEMBER 2020 LABORATORIUM MIKROBIOLOGI JURUSAN BIOLOGI FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI UNIVERSITAS ...

Description

LAPORAN PRAKTIKUM MIKRBIOLOGI UMUM

( MEDIA PERTUMBUHAN MIKROBA, TEKNIK ASEPTIS DAN STERILISASI)

Oleh :

Nama

: MITHA FARIHATUL WARDANIA

NIM

: 19620007

Kelas / Kelompok

: BIOLOGI A

Tanggal Praktikum

: 16 SEPTEMBER 2020

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI JURUSAN BIOLOGI FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI UNIVERSITAS ISLAM NEGERI MAULANA MALIK IBRAHIM MALANG 2020 1

BAB I PENDAHULUAN

1.1 LATAR BELAKANG Mikrobiologi adalah salah satu cabang dari disiplin ilmu biologi yang mengkaji tentang makhluk hidup (organisme) berukuran sangat kecil. Objek kajian yang biasanya dipelajari adalah semua makhluk hidup yang hanya bisa dilihat dengan mikroskop yang mencakup berbagai macam mikroba mulai dari aspek biologi,ekologi, sistematika dan mikrobiologi lingkungan (Madigan, 2006). Di Indonesia mikroorganisme sudah diperkenalkan dan ternyata sangat erat kaitannya dengan kehidupan manusia. Beberapa diantaranya dapat menyebabkan patogen bagi manusia, seperti berasal dari penggunaan bahan tambahan pada makanan. Namun di sisi lain juga bermanfaat bagi manusia misalnya terlibat dalam pembuatan keju. Hal ini sesuai dengan Q.S An-Nahl ayat 8 yang berbunyi : “dan (Dia telah menciptakan) kuda, baghal, dan keledai, agar kamu menungganginya dan (menjadikannya) perhiasan. Dan Allah menciptakan apa yang tidak kamu ketahui.” (QS. An-Nahl: 8) Pada ayat tersebut dijelaskan, terutama pada arti “Dan Allah menciptakan apa yang tidak kamu ketahui” menunjukkan bahwa Allah SWT telah menciptakan adanya berbagai bentuk kehidupan yang manusia sendiri pun sebelumnya tidak mengetahui. Sehingga seiring berkembangnya zaman dan teknologi, akhirnya manusia menciptakan alat yang bernama mikroskop yang dapat memudahkan manusia melihat makhluk mikroorganisme serta mengungkap ayat Al-Qur’an tentang keberadaan adanya kehidupan tersebut. Dalam mengembangbiakkan mikrooganisme, suatu mikroba dapat ditumbuhkan dan dikembangkan pada suatu substrat, maka diperlukan yang namanya medium. Sedangkan medium itu sendiri sebelum digunakan harus dalam keadaan steril. Artinya tidak ditumbuhi oleh mikroba lain yang tidak diharapkan agar mikroba dapat tumbuh dan berkembangbiak dengan baik di dalam medium. Media merupakan suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi yang digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme baik dalam mengkultur bakteri, jamur, dan mikroorganisme lain. Sedangkan unsur yang harus terkandung didalam medium diantaranya

adalah

tekanan

osmosis,

derajat,

(Hadietomo, 2010).

2

keasaman

(pH),

dan

temperature

Dalam bidang penelitian mikroorganisme ini, tentunya menggunakan teknik atau caracara khusus untuk mempelajarinya. Salah satu kegiatan yang berkaitan dengan praktikum mikrobiologi adalah sterilisasi. Sterilisasi dalam mikrobiologi adalah suatu proses untuk mematikan semua mikroorgansime yang terdapat pada atau didalam suatu benda. Kegiatan mensterilkan alat harus dilakukan dengan benar sehingga hasil yang diperoleh dapat maksimal. Sterilisasi ada tiga macam yaitu Sterilisasi secara mekanik dengan saringan yang berpori sangat kecil, sterilisasi secara fisik dengan pemanasan dan penyinaran, dan sterilisasi secara kimiawi biasanya menggunakan senyawa desinfektan/alcohol (Dwidjoseputro, 2005) Praktikum ini diharapkan dapat melatih para praktikan untuk memiliki keterampilan dasar bekerja di laboratorium mikrobiologi. Dan juga untuk mengenal lebih jauh tentang penyiapan medium untuk suatu mikroba. Mulai dari menggunakan media padat, cair maupun semi padat. Serta melakukan pengenalan terhadap prinsip kerja alat-alat laboratorium yang sangat penting dilakukan untuk keselamatan dan keberhasilan saat melakukan penelitian maupun praktikum di laboratorium.

1.2 RUMUSAN MASALAH Rumusan masalah pada praktikum ini adalah sebagai berikut : 1. Bagaimana cara pembuatan media ? 2. Apa saja macam-macam teknik sterilisasi ? 3. Bagaimana prinsip kerja autoklaf sebagai alat untuk sterilisasi ?

1.3 TUJUAN Tujuan dari praktikum ini adalah sebagai berikut : 1. Untuk mengetahui cara pembuatan media 2. Untuk mengetahui macam-macam teknik sterilisasi 3. Untuk mengetahui prinsip kerja autoklaf sebagai alat untuk sterilisasi

1.4 MANFAAT Manfaat dari praktikum ini adalah sebagai berikut : 1. Agar praktikan dapat mengetahui cara pembuatan media 2. Agar praktikan dapat mengetahui macam-macam teknik sterilisasi 3. Agar praktikan dapat mengetahui prinsip kerja autoklaf sebagai alat untuk sterilisasi 3

BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Media 2.1.1 Pengertian Media Media merupakan suatu substrat (bahan) yang terdiri atas berbagai macam nutrisi yang digunakan dalam mengkultur mikroorganisme yang tumbuh dengan baik sesuaikan dengan lingkungan hidupnya..Suatu media dapat dikatakan menumbuhkan mikroorganisme dengan baik apabila memenuhi syarat diantaranya kelembapan yang cukup, pH yang sesuai, kadar oksigen baik, media steril dan media harus mengandung unsur nutrisi yang dibutuhkan mikroorganisme untuk pertumbuhan, diantaranya seperti berasal dari unsur non logam (sulfur,fosfor) dan unsur logam (Ca, Zn, Na, K, Cu, Mn, Mg, dan Fe) (Dwidjoseputro, 2005). Menurut Jutono dalam Oktavia (2017) dalam literaturnya dijelaskan bahwa media adalah suatu bahan yang terdiri atas komponen zat makanan (nutrisi) yang berfungsi sebagai tempat tumbuhnya mikroba. Dimana dalam pertumbuhannya memerlukan adanya unsur logam maupun unnsur non logam. Seperti yang disebutkan pada Thohari (2019) bahwa mikroorganisme dalam pertumbuhannya membutuhkan unsur logam seperti natrium, kalium, kalsium, magnesium, mangan, besi, seng, tembaga, fosfor, cobalt, hidrogen, oksigen dan sulfur. Sedangkan menurut Laleye et al., (2007) dalam literaturnya dijelaskan bahwa media pertumbuhan bakteri juga memerlukan sumber karbon yang digunakan sebagai energi. 2.1.2 Macam-Macam Media Media berdasarkan sifat terbagi menjadi 3 yaitu media padat, media semi padat semi cair, media cair. Media berdasarkan susunannya terdiri atas media sintesis, semi sintesis, dan media non sintesis. Sedangkan erdasarkan tujuan yaitu media selektif atau penghambat dan media diperkaya. Jenis Media yang sering digunakan, yaitu Nutrient Agar, Nutrient Broth (NB), PDA (Potato Dextrose Agar), Salmonella Shigella (SS) Agar, Eosin Methylene Blue Agar(EMBA) (Rakhmawati , 2012) Media NA (nutrient agar) merupakan media yang berbentuk serbuk berwarna putih kekuningan dan apabila setelah digunakan akan berbentuk padat karena terdapat kandungan agar sebagai pemadatnya. Komposisi yang terpenting dalam media ini adalah karbohidrat dan protein yang terdapat pada ekstrak daging dan pepton sesuai dengan kebutuhan sebagian besarbakteri. (Thohari,2019). Nutrient Broth (NB) adalah 4

medium yang berbentuk cair dengan bahan dasar adalah ekstrak beef dan peptone. Perbedaan konsentris antara Nutrient Agar dengan Nutrient Broth yaitu nutrient agar berbentuk padat dan Nutrient Broth berbentuk cair (Munandar, 2016). Sedangkan PDA (Potato Dextrose Agar) adalah media yang umum untuk pertumbuhan jamur dilaboratorium karena memilki pH yang rendah (pH 4,5 sampai 5,6) sehingga menghambatpertumbuhan bakteri yang membutuhkan lingkungan yang netral dengan pH 7,0 dan suhu optimum untuk pertumbuhan antara 25-30°C (Cappucino, 2014) Menurut Rahmawari (2012), bahwa macam-macam media pertumbuhan mokroorganisme sangat beraneka macam. Media dapat dibuat secara alami maupun membeli

dalam

bentuk

kemasan

yang

sudah

jadi.

Medium

pertumbuhan

mikroorganisme memiliki tiga pembagian yang dapat dibedaka. Adapun macam-macam media dapat dibedakan berdasarkan komposisi atau susunan bahannya meliputi media alami, media sintetis dan semi sintetis. Dan berdasarkan bentuknya meliputi media cair, media padat dan media semi padat. Menurut Pelgzar (2000), klasifikasi medium berdasarkan fungsinya digolongkan menjadi 7 golongan, yaitu: 1.

Medium umum, media yang ditambahkan bahan-bahan yang bertujuan menstimulasi pertumbuhan mikroba secara umum. Contoh Nutrient Agar (NA), Potato Dextrose Agar (PDA

2.

Medium khusus, merupakan medium untuk menentukan tipe pertumbuhan mikroba dan kemampuannya untuk mengadakan perubahan-perubahan kimia tertentu misalnya, medium tetes tebu untuk Saccharomyces cerevisiae.

3.

Media diperkaya (enrichment media), media yang ditambahkan bahan-bahan tertentu untuk menstimulasi pertumbuhan mikroba yang diinginkan. Hal ini dilakukan untuk menstimulasi pertumbuhan mikroba yang jumlahnya sedikit dalam suatu campuran berbagai mikroba, contoh Chocolate media dan YeastExtract-poptasium Nitrat Agar.

4.

Media selektif, merupakan media yang ditambahkan bahan-bahan tertentu yang akan menghambat pertumbuhan mikroba yang tidak diinginkan yang ada dalam suatu spesimen. Inhibitor yang digunakan berupa antibiotik, garam dan bahan-bahan kimia lainnya.

5.

Media diferensial, merupakan media yang ditambahkan bahan-bahan kimia atau

reagensia

tertentu

yang

5

menyebabkan

mikroba

yang

tumbuh

memperlihatkan perubahan-perubahan spesifik sehingga dapat dibedakan dengan jenis lainnya. 6.

Medium penguji (assay medium), yaitu medium dengan susunan tertentu yang digunakan untuk pengujian senyawa-senyawa tertentu dengan bantuan bakteri misalnya medium untuk menguji vitamin-vitamin, antibiotika dan lain-lain.

7.

Medium perhitungan jumlah mikroba yaitu medium spesifik yang digunakan untuk menghitung jumlah mikroba dalam suatu bahan, misalnya medium untuk menghitung jumlah bakteri E.coli air sumur.

2.2 STERILISASI 2.2.1 Pengertian Sterilisasi Secara umum sterilisasi merupakan proses pemusnahan kehidupan khususnya mikroba dalam suatu wadah ataupun peralatan laboratorium. Sedangkan sterilisasi dalam Mikrobiologi adalah suatu proses untuk mematikan semua mikroorgansime yang terdapat pada atau didalam suatu benda. Ada tiga cara yang biasanya digunakan dalam sterilisasi yaitu penggunaan panas, penggunaan bahan kimia, dan penyaringan (filtrasi). Apabila panas digunakan bersama-sama dengan uap air maka disebut sterilisasi basah, bila tanpa kelembaban maka disebut sterilisasi kering (Dwidjoseputro, 2005). Menurut Suriawiria (2005) sterilisasi merupakan suatu proses untuk mematikan semua organisme yang teradapat pada suatu benda. Sterilisasi yang paling umum dilakukan dapat berupa: sterilisasi secara fisik (pemanasan, penggunaan sinar gelombang pendek yang dapat dilakukan selama senyawa kimia yang akan disterilkan tidak akan berubah atau terurai akibat temperatur atau tekanan tinggi). Sterilisasi secara makanik, digunakan untuk beberapa bahan yang akibat pemanasan tinggi atau tekanan tinggi akan mengalami perubahan, misalnya adalah dengan saringan/filter. Sitem kerja filter, seperti pada saringan adalah melakukan seleksi terhadap pertikel-partikel yang lewat (dalam hal ini adalah mikroba). 2.2.2 Macam-Macam Sterilisasi Menurut Tille (2017) Sterilisasi didefinisikan sebagai upaya untuk membunuh mikroorganisme termasuk dalam bentuk spora.Sterilisasi dapat dilakukan baik dengan metode fisika maupun kimia. Sterilisasi dengan metode fisika dapat dilakukan dengan tiga cara yaitu pemanasan, radiasi dan filtrasi. Pada proses pemanasan ada dua macam pemanasan kering dan pemanasan basah. Pemanasan kering berupa pemijaran, pembakaran, hot air oven dan incinerator. Pemijaran merupakan Metode ini dengan 6

memanaskan alat biasanya berupa ose di atas api bunsen sampai ujung ose memijar sedangkan Metode ini dengan memanaskan alat biasanya berupa ose di atas api bunsen sampai ujung ose memijar. Hot air oven digunakan dengan memanaskan alat biasanya berupa ose di atas api bunsen sampai ujung ose memijar. Pemanasan basah

merupakan pemanasan dengan tekanan tinggi, contohnya

adalah dengan menggunakan autoklaf. Sterilisasi dengan metode ini dapat digunakan untuk sterilisasi biohazard (bakteri limbah hasil praktikum) dan alat-alat yang tahan terhadap

panas.

Pemanasan

basah

dapat

menggunakan

Autoklaf.

Sterilisasi

menggunakan autoklaf manual tidak dapat ditinggal dalam waktu lama. Dan ada juga Autoklafdigital/otomatis.. Jika digunakan untuk sterilisasi media, suhu ini sesuai karena untuk emmbuat media diperlukan suhu 50-700 C (Tille, 2017). Sterilisasi kimia, biasanya sterilisasi secara kimiawi menggunakan senyawa desinfektan antara lain alkohol. Proses sterilisasi antiseptik kimia ini biasanya dilakukan dengan cara langsung memberikan pada alat atau media yang akan disterilisasi. Sterilisasi secara mekanik (filtrasi) menggunakan suatu saringan yang berpori sangat kecil (0.22 mikron atau 0.45 mikron) sehingga mikroba tertahan pada saringan tersebut. Proses ini ditujukan untuk sterilisasi bahan yang peka panas, misalnya larutan serum, enzim, toksin kuman, ekstrak sel dan lain-lain. (Fauzi, 2013) Metode sterilisasi yang umum digunakan secara rutin di laboratorium mikrobologi adalah yang menggunakan panas. Sterilisasi panas kering dapat diterapkan pada apa saja yang tidak merusak, menyala, hangus, dan menguap pada suhu setinggi itu. Bahan-bahan yang biasa disterilkan dengan cara ini seperti pipet, tabung reaksi, cawan, botol sampel, dan bahan-bahan yang tidak tembus uap (Curtis et al, 1999). Sedangkan Menurut literature lain Sterilisasi basah biasanya dilakukan di dalam autoklaf atau sterilisator uap yang mudah diangkat (portable) dengan mengguanakn uap air jenuh bertekanan pada suhu 121oC selama 15 menit.Ada beberapa hal yang perlu diperhatikan dalam melakukan sterilisasi basah yaitu: a.

Sterilisasi bergantung pada uap, karena itu udara harus dikosongkan terlebih dahulu

b.

Semua bagian bahan yang disterilkan harus terkena uap

c.

Bahan-bahan yang berpori atau berbentuk cair harus permeable terhadap uap

d.

Suhu yang sebagaimana yang terukur oleh thermometer harus 121oC sampai 15 menit (Sriwulandari 2005) 7

BAB III METODE PRAKTIKUM 3.1 Waktu dan Tempat Praktikum Mikrobiologi dengan judul “Media Pertumbuhan Mikroba, Teknik Aseptis dan Sterilisasi” dilakukan pada hari Senin, 16 November 2020. Praktikum dilakukan pada pukul 18.00 sampai 19.00 WIB, bertempat di rumah masing-masing mahasiswa secara online melalui media whatsapp grup. 3.2 Alat dan Bahan 3.2.1 Alat Adapun alat-alat yang digunakan pada praktikum ini yaitu timbangan analitik yang berfungsi untuk mengukur berat suatu zat atau bahan kimia dalam jumlah sangat kecil, gelas ukur (100 ml) sebagai alat untuk mengukur volume larutan, labu erlenmeyer (500 ml dan 1000 ml) untuk mencampur, mengukur dan menyimpan cairan, tabung reaksi berfungsi sebagai tempat media pertumbuhan atau penampungan cairan lainnya seperti pelarut dalam pengenceran, spatula alat yang digunakan untuk mengambil bahan kimia padat maupun serbuk pada saat akan di timbang, autoklaf alat yang berfungsi untuk sterilisasi dalam teknik sterilisasi secara fisika dengan prinsip arus uap dan tekanan, botol semprot sebagai tempat untuk menyimpan cairan kimia, cawan petri berfungsi sebagai tempat pembiakan mikroorganisme, glove (sarung tangan) berfungsi untuk melindungi tangan dari kontaminasi bahan kimia berbahaya, hotplate berfungsi untuk mengaduk dan memanaskan larutan satu dengan larutan lain yang bertujuan untuk membuat suatu larutan homogeny dan magnetic stirrer bar berfungsi untuk mengaduk larutan pada media yang memudahkan jntuk homogenisasi. 3.2.2 Bahan Adapun bahan-bahan yang digunakan pada praktikum ini diantaranya aquades sebagai bahan pelarut atau pencampur dari bahan-bahan kimia, kapas sebagai bahan untuk penutup tabung reaksi, kain kasa sebagai bahan penutup tabung reaksi untuk menghindarkan kontaminasi, kertas tissue berguna membersihkan sisa-sisa alkohol serta cairan kimia untuk sterilisasi, kertas HVS untuk membungkus cawan petri, plastik tahan panas berfungsi untuk membungkus alat dan bahan yang akan dimasukkan ke autoklaf, alumunium foil untuk menutup labu erlenmeyer yang berisi larutan, alkohol 70% sebagai cairan antiseptik (membunuh atau menghambat pertumbuhan mikroorganisme), NA instan digunakan untuk pertumbuhan dari mikroorganisme mikroorganisme heterotrof serta dibuat dari ekstrak beef, pepton, dan agar. PDA instan sebagai salah satu 8

media yang baik digunakan untuk membiakkan suatu mikroorganisme, seperti cendawan/fungi, bakteri, maupun sel mahluk hidup.

3.3 Cara Kerja 3.3.1 Media NA dan NB Manual Adapun cara pembuatan media NA dan NB manual diantaranya yaitu dicuci bersih daging sapi, dibuang bagian lemak jika masih ada. Diiris daging dengan ukuran 1 x 1 cm2, dimasukkan dalam beaker glass atau wadah dan ditambah aquades sebanyak 50 ml. Di rebus atau dimasak daging selama 25 menit atau sampai daging lunak (dijaga agar volume air tetap, jika berkurang ditambahkan akundes). Disaring rebusan daging sehingga diperoleh air kaldu, dicampurkan dengan pepton, agar dan akuades hingga volume akhir 50 mL (pada pembuatan NB, tidak perlu ditambahkan agar). Dipanaskan kembali campuran kaldu, pepton dan agar, diaduk hingga homogen dan ditunggu sampai mendidih, dinginkan pada suhu ruang. Dicek pH medium menggunakan pH meter dan atur pada pH 7. Dimasukkan medium kedalam tabung reaksi masing-masing 10 ml untuk media tegak dan 5-7 ml untuk media miring. Ditutup tabung berisi medium dengan kapas yang telah dibungkus kain kasa. 3.3.2 Media NA dan NB Instan Adapun cara pembuatan media NA dan NB instan diantaranya, yaitu ditimbang media sesuai kebutuhan (penghitungan jumlah mengacu pada takaran yang tertera pada kemasan). Dilarutkan 1.5 gram bubuk atau serbuk NA/NB instan ke dalam 50 ml akuades. Diaduk hingga serbuk larut, dipanaskan diatas penangas ditunggu hingga mendidih (larutan terlihat jernih). Didinginkan dan dituang pada cawan petri maupun tabung reaksi serta disterilisasi dengan autoklaf. 3.3.3 Media PDA Manual Adapun cara pembuatan media PDA manual diantaranya, yaitu dikupas kentang lalu bersihkan, dipotong bentuk dadu berukuran 1x1 cm2 kemudian ditimbang hingga diperoleh 20 g kentang. Dipotong kentang dimasak dalam 50 ml akuades dan dibiarkan mendidih, dijaga agar volume tetap (ditambahkan akuades jika menyusut). Disaring ekstrak kentang dan diambil filtratnya. Ditambahkan dekstrose dan agar-agar serta akuades hingga volume akhir 50 ml. diaduk hingga homogen. Dipanaskan pada api sedang sambil diaduk hingga homogen atau mendidih. Dimasukkan pada tabung reaksi masing-masing 10 ml untuk media tegak dan 5-7 ml untuk media miring. 9

Ditutup tabung berisi medium dengan kapas yang telah dibungkus kain kasa. Disterilkan dengan autoklaf. Setelah disterilkan untuk media tegak biarkan tabung dalam keadaan berdiri dan untuk media miring tabung dimiringkan dengan catatan media tidak sampai menyentuh tutup tabung. 3.3.4 Media PDA Instan Adapun cara kerja pada pembuatan media PDA instan yaitu ditimbang media sesuai kebutuhan (penghitungan jumlah mengacu pada ukuran yang tertera di kemasan 5,85 g/ L). Dilarutkan serbuk PDA instan ke dalam 50 ml akuades. Diaduk hingga serbuk larut, dipanaskan diatas penangas ditunggu hingga mendidih (larutan terlihat jernih). Didinginkan dan tuang pada cawan petri maupun tabung reaksi serta disterilisasi dengan autoklaf 3.3.5 Teknik Aseptis Meja Kerja dan Tangan Adapun cara kerja pada teknik aseptis meja kerja dan tangan diantaranya, yaitu dicuci tangan dengan menggunakan air dan dikeringkan. Disemprotkan alkohol 70% pada bagian telapak dan punggung tangan, dikeringkan. Dibersihkan meja yang akan digunakan dari barang atau alat yang tidak dipergunakan. Disemprotkan alkohol 70% pada permukaan meja kerja. Dibersihkan sisa semprotan alkohol menggunakan kertas tissue bersih dengan arah yang sama atau searah. 3.3.6 Sterilisasi Menggunakan Autoklaf Adapun cara sterilisasi menggunakan autoklaf yaitu ...