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Practicas 1er cuatri procesos biológicos...

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Manuales de Prácticas de Ciencias de la Salud

Identificación del Manual de Prácticas Nombre de la Asignatura Clave Seriación Cuatrimestre Total sesiones en aula Total sesiones en laboratorio Carrera

Tipo de laboratorio Número de horas de cada sesión Aprobado por Versión de manual

Procesos biológicos TCS001 Ninguna Primero 24 4 Materia de Tronco Común para las licenciaturas de Enfermería, Fisioterapia y Nutrición Ciencias básicas 2 Corporativo Ciencias de la Salud Ciclo 20-1

Nombre del Alumno: Grupo: Carrera: Fecha y firma de revisión inicial:

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PRÁCTICA 1 MICROSCOPÍA Y LA CÉLULA

CONTENIDO 1. Organización general de los seres vivos. 1.1. Niveles de organización 1.2. Teoría celular 1.3. Organización estructural de la célula 1.3.1.Célula procariota. 1.3.2.Célula eucariota 2. Elementos que constituyen a las células y a los seres vivos. 2.1. Membrana plasmática. 2.2. Núcleo 2.3. Citoplasma OBJETIVO DE APRENDIZAJE 

Identificar cada una de las partes del microscopio y describir su funcionamiento.



Conocer los cuidados básicos de un microscopio óptico de campo claro.



Adquirir la destreza para enfocar adecuadamente el microscopio con todos sus aumentos.



Reconocer las estructuras básicas que existen en todas las células de tal forma que el alumno sea capaz de distinguir entre una célula eucariota y procariota.



Desarrollar algunas técnicas básicas de preparación de muestras para observación microscópica.



Reconocer diferentes formas, tamaños y estructuras celulares.

EQUIPO NECESARIO Cada equipo requiere: -

1 microscopio

MATERIALES PARA LA PRÁCTICA

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6 portaobjetos 6 cubreobjetos 1 hisopo 1 mechero bunsen con manguera 1 bisturí o navaja 1 gotero 1 frasco gotero con solución de azul de metileno 5 ml de Etanol-éter para limpieza de objetivos Pinza de disección Puente de tinción Papel seda para limpieza de objetivos Aceite de inmersión Kit para tinción de Gram (cristal violeta, lugol, alcohol-cetona, safranina)

Material provisto por el alumno -

20 ml de agua estancada 1 yakult o yogurt natural 1 cebolla Encendedor Marcador indeleble punto fino

PROCEDIMIENTO DE LA PRÁCTICA El profesor:  Iniciará la preparación y montaje de la clase y expondrá los objetivos de la clase.  Dara una introducción de la microscopía, con la definición de conceptos generales.  El profesor explicará las partes y función del microscopio  El profesor explicará los cuidados que deben tenerse durante el manejo del microscopio  Con base en el esquema, cada alumno procederá a identificar cada una de las partes del microscopio señaladas con las líneas.  El profesor realizará de manera demostrativa la elaboración de un frotis así como la tinción del mismo.  Durante el desarrollo de la práctica el docente será un facilitador del conocimiento, realizará retroalimentación con los alumnos e incentivará el cuestionamiento por parte de ellos.  MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO Para manejar el microscopio de una manera correcta debe seguir ciertas recomendaciones: 1. Antes de empezar a trabajar verifique que el objetivo a utilizar sea el de menor aumento y la platina completamente abajo. 2. Conecte el microscopio y enciéndalo. 3. Coloque la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas y ubique la muestra en el haz de luz que sale a través de la platina.

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4. Subir la platina, con la ayuda del tornillo macrométrico, hasta que la muestra esté lo más cerca del lente objetivo. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular. 5. Regule la apertura de los lentes oculares según la apertura de sus ojos, para su mayor comodidad. 6. Mirando a través de los oculares regule la cantidad de luz y defina la imagen con la ayuda del tornillo micrométrico. La imagen debe quedar nítida. 7. Gire el revolver para seguir pasando a los otros lentes. No necesita bajar la platina en ningún momento si es que consiguió un buen enfoque al inicio. Si al cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior. 8. Una vez finalizada la observación se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revólver. En este momento ya se puede retirar la preparación de la platina. 9. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de observación. 10. Cubrir el microscopio. a. ENFOQUE CON EL OBJETIVO DE INMERSIÓN Nota: Antes de poner el aceite debe haberse enfocado en un lente de menor aumento.

1. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino. 2. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre la muestra enfocada. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo se debería regresar al de menor aumento. 3. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión. 4. Enfocar cuidadosamente con el tornillo micrométrico. 5. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se limpia el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial. b. RECOMENDACIONES GENERALES 1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda. 2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. 3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de óptica. 4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio. 5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pañuelos especiales para óptica, pasando el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol sin embargo no debe de abusarse de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción. 6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico, platina, revolver y condensador).

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7.

8. 9. 10. 11.

El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño humedecido en xilol. Cuando traslade el microscopio hágalo siempre con las dos manos. Tome el brazo con una mano y coloque la otra debajo de la base para sostenerlo. Manténgalo en posición vertical. Colóquelo sobre una superficie plana y sólida, por lo menos a 10 cm del borde de la mesa. Antes de comenzar a usarlo revise el estado del microscopio (De acuerdo a las instrucciones del profesor).

12. Con base en el siguiente esquema, cada alumno procederá a identificar las diferentes partes del microscopio señaladas con las flechas.

 Parte 1 Con la preparación de agua estancada a) Verificar que el portaobjetos esté limpio. b) Agitar el recipiente que contiene la muestra de agua estancada. c) Con la ayuda de un gotero depositar una gota de agua estancada sobre un portaobjetos y colocar sobre esta un cubreobjetos. d) Realizar la observación siguiendo los pasos descritos utilizando los objetivos de 10 y 40 X. e) Realizar un dibujo de lo observado en el microscopio.

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 Parte 2 a) Con la ayuda de un hisopo realizar un raspado suave en la parte interna de la mejilla de algún compañero. b) Colocar la muestra proveniente del raspado sobre un portaobjetos limpio. c) Colocar sobre la muestra una gota de azul de metileno y colocar el cubreobjetos evitando la formación de burbujas de aire. d) Realizar la observación de la preparación siguiendo los pasos descritos en la parte 1 utilizando los objetivos de 10 y 40X. e) Realizar un dibujo de lo observado en el microscopio.

 Parte 3 Célula procariota a) Verificar que el portaobjetos esté limpio. b) Marcar en el extremo izquierdo del portaobjeto, para saber con qué muestra está trabajando. c) Con la ayuda de un gotero colocar una gota del cultivo bacteriano (yakult o yogurt) en el centro del portaobjetos y distribuirlo de tal manera que se forme una película delgada (frotis). d) Dejar secar al aire el frotis realizado en el punto anterior. e) Encender el mechero. f) Pasar el portaobjetos entre 4 y 6 veces por la llama para fijar las células al vidrio sujetándolo con una pinza de disección. g) Dejar enfriar el frotis y cubrir completamente con cristal violeta y dejar actuar el colorante durante un 1 min. h) Transcurrido el tiempo eliminar el exceso de colorante enjuagando la preparación con agua de la llave. i) Cubrir el frotis con lugol y dejar actuar durante 1 min. j) Transcurrido el tiempo eliminar el exceso enjuagando la preparación con agua de la llave. k) Decolorar el frotis adicionando alcohol-acetona de 15 segundos aproximadamente. l) Transcurrido el tiempo enjuagar la preparación con agua de la llave. m) Cubrir completamente el frotis con safranina y dejar actuar durante 1 min. n) Transcurrido el tiempo eliminar el exceso de colorante enjuagando la preparación con agua de la llave. o) Dejar secar al aire el frotis. p) Una vez seco el frotis colocar sobre él un cubreobjetos. q) Enfocar el frotis con el objetivo de 10X, una vez que se ha enfocado adicionar sobre el cubreobjetos una gota de aceite de inmersión y cambiar el objetivo por el de 100X, siguiendo los pasos descritos en la parte 1. r) Realizar los dibujos correspondientes de lo que se observa en el microscopio.

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 Parte 4 Célula eucariota a) Separar una de las capas internas de la cebolla (epidermis), desprendiendo la membrana adherida por la cara inferior cóncava de una de sus capas.

b) En un portaobjetos colocar una gota de agua destilada. c) Colocar la epidermis sobre la gota de agua colocada previamente para evitar que se enrosque. d) Eliminar el exceso de agua y cubrir la epidermis con azul de metileno. e) Dejar actuar el colorante durante 2 min. f) Transcurrido el tiempo retirar el exceso del colorante y enjuagar con agua de la llave. g) Colocar sobre la epidermis una gota de agua, colocar el cubreobjetos sobre la muestra y ubicar la preparación al menor aumento (10x) h) Observar al microscopio cambiando a 40 y 100x, dibuja lo observado (citoplasma, núcleo, pared) siguiendo los pasos descritos en la parte 1. i) Realizar los dibujos correspondientes de lo que se observa en el microscopio.

 Al finalizar la práctica resolver el cuestionario e incluirlo en el reporte 1. ¿Cuáles son las características de un Microscopio óptico, M. simple, M. compuesto, M. de fluorescencia, M. de barrido? 2. ¿Cuál es el intervalo de tamaño de las bacterias y en qué unidades se miden? 3. ¿Cuál es el tamaño mínimo de especímenes que pueden observarse con un microscopio óptico y cuál para un microscopio electrónico? 4. ¿Cómo se define el poder de resolución de un microscopio? 5.- ¿Qué material utilizó Robert Hooke y que fue lo que observó en el microscopio simple? 6.- ¿Cuáles son los dos microscopios electrónicos básicos? 7.- ¿Qué se le atribuye a Antón Van Leeuwenhoek con respecto a sus observaciones? 8- Defina los conceptos: unicelular, pluricelular y multicelular. 9.- ¿Qué función tiene el citoplasma, vacuola, pared y membrana celular, núcleo, cloroplasto? 10.- Realice un cuadro comparativo entre una célula procariota y una eucariota.

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Anexo I Las partes de un microscopio compuesto son: a) Sistema mecánico: -

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BASE: Soporta todo el peso del aparato, asegurando la estabilidad del mismo. BRAZO: Este elemento relaciona el cabezal del microscopio con el pie y sostiene la platina y el condensador. De esta parte se sostiene el microscopio cuando se lo traslada de un lugar a otro. CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular o binocular. REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos. PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación se halla sujeta al brazo y posee además una abertura para el paso de luz. Las platinas tienen dos pinzas sujetadoras, dos tornillos que permiten desplazar las placas y unas “reglillas” llamadas Escalas de Vernier, que sirven para tomar las coordenadas sobre la localización de células o estructuras de interés. TORNILLOS DE ENFOQUE: son dos, macrométrico que permite acercar la muestra hacia el lente objetivo y micrométrico, de mayor precisión que es el que define la imagen.

b) Sistema óptico: -

OCULAR: Lente que se encuentra próximo al ojo, amplifica la imagen producida por el objetivo y su aumento es de 10X. OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación su función es ampliar la imagen. En un microscopio están insertados en una pieza llamada revolver en un número de 4 generalmente. Los lentes objetivos más comunes son los de 5X, 10X, 40X y 100X. El lente de 100X se usa únicamente con aceite de inmersión por lo que es llamado lente de inmersión y los demás se llaman lentes en seco. La amplificación total o magnificación total resulta de la acción combinada del ocular y objetivo, se calcula multiplicando estos dos valores. Ej.: ocular 10X, objetivo 10X, amplificación total 100X. A medida que el poder de amplificación o la magnificación del microscopio aumentan, el espacio observado bajo el campo óptico disminuye. Lo más importante de un microscopio no es el aumento en sí mismo, sino el poder separador también llamado a veces poder de resolución. El poder de resolución es una cualidad del microscopio, y se define como la capacidad de distinguir como imágenes distintas dos cercanas. El ojo normal no puede ver separados dos puntos cuando su distancia es menor a una décima de milímetro.

c) Sistema de iluminación: -

CONDENSADOR: contiene varias lentes que concentran la luz en el objeto a estudiarse. DIAFRAGMA: Esta junto al condensador y regula la cantidad de luz que entra en el condensador. FOCO o FUENTE DE LUZ: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador, usualmente posee también un regulador de intensidad.

La unidad básica de longitud que se utiliza con el microscopio de luz es el micrómetro o micra (µm). 1 mm = 1000 µm 1 µm = 1000 nm (nanómetro) 1µm = 10,000A° (Angstroms)

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Anexo II I.

Células epiteliales de la boca

Célula epitelial de la boca sin teñir

Célula epitelial de la boca teñida con azul de metileno

Imagen tomada de inakiresa.wordpress.com/2007/11/ Imagen b tomada de www.papquick.com/es_galeria.html

II.

Ejemplos de protozoarios que pueden observarse en agua estancada.

Vorticella

Diatomeas

Paramecio

Imagen tomada de http://plantphys.info/organismal/lechtml/images/vorticella.jpg

III.

Ejemplos de formas y agrupaciones bacterianas que pueden observarse al microscopio

Imagen tomada de http://www.dialogica.com.ar/medline/2007/09/la-era-de-las-bacterias.html

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IV.

Células epiteliales de cebolla teñidas con azul de metileno

Núcleo

Membrana celular Citoplasma Imagen tomada de https://practicasdehematologiaycitologia.wordpress.com/2014/11/02/practica-2/

Vacuola

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

    

Fortoul, Teresa. (2013). Histología y biología celular. McGraw-Hill. Baynes, John W; Dominiczak, Marek H.. (2015). Bioquímica médica. Elsevier. Herrera, Emilio; Ramos, María Del Pilar, et. al.. (2014). Bioquímica básica. Elsevier. http://www.biologia.edu.ar/microscopia/microscopia1.htm http://www.linkpublishing.com/video-transport.htm

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PRÁCTICA 2 MECANISMO DE TRANSPORTE CELULAR

CONTENIDO 2. Elementos que constituyen a las células y a los seres vivos. 2.1. 2.1.1. 2.1.2. 2.1.3.

Membrana plasmática Estructura Funciones de las proteínas membranales Sistemas de transporte transmembranal

OBJETIVO DE APRENDIZAJE

   

Diferenciar los fenómenos de difusión, ósmosis, turgencia, plasmólisis y transporte activo. Demostrar la importancia que tiene la concentración de las soluciones sobre las células. Observar el comportamiento de las células vegetales y animales frente a medios acuosos con diferente concentración de soluto. Evidenciar de forma práctica la permeabilidad de la membrana.

EQUIPO NECESARIO Por cada equipo se contará con: -

1 microscopio óptico 1 balanza

MATERIALES PARA LA PRÁCTICA Por cada equipo se contará con: -

8 Portaobjetos 8 Cubreobjetos 1 Navaja o bisturí 5 Aplicadores de madera y/o palillos 1 Tripié y rejilla de asbesto o parrilla de calentamiento Mechero bunsen con manguera 2 Matraces Erlenmeyer de 250 mL

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1 pipeta graduada de 10 mL 1 Probeta de 25 o 50 mL 3 goteros

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2 ml de una solución de cloruro de sodio (NaCl) a una concentración del 3%. 2 ml de una solución de NaCl a una concentración del 0.9% 2 mL de una solución de NaCl a una concentración del 0.15% 2 mL de una solución de NaCl a una concentración del 0.075% 2 mL de una solución de NaCl a una concentración del 0.3% 75 mL de una solución de carbonato de sodio(Na2CO3) a una concentración del 0.75% 75 mL de una solución de rojo neutro a una concentración del 0.02% Torundas de algodón impregnadas con alcohol al 70% Masking tape

Material provisto por el alumno: -

1 rama de Elodea (se consigue en lugares de venta de peces, los acuarios) 10 g de levadura comercial 2 pares de guantes Marcador indeleble Encendedor

PROCEDIMIENTO DE LA PRÁCTICA El profesor:  Iniciará la preparación y montaje de ...