Patch- Clamp PDF

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Análisis de técnica Patch- clamp...

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ORTIZ FRAYRE ANDREA Patch Clamp Technique

Empieza tirando de un tubo de vidrio borosilicato en Micropipetas utilizando un extractor de la pipeta. A continuación, pule con fuego la punta para obtener la resistencia y diámetro apropiado. Después de pulir, llene la micropipeta con una solución iónica y golpea suavemente para desalojar las burbujas de aire. Luego deslice la micropipeta sobre el electrodo unido a un soporte. Una vez conectado, utilice una jeringa para aplicar presión positiva a la pipeta, que impide la entrada de otras soluciones a la punta. Ahora, coloque su células o tejido de interés en la platina del microscopio y mueva la micropipeta hacia una célula. Con el amplificador que genera pulsos de voltaje de prueba, registre la resistencia, que aumentará una vez que la punta esté en contacto con la célula. Para formar el sello gigaohm, suavemente cambia de presión positiva a negativa con la jeringa. La formación del sello dará lugar a un rápido incremento en la resistencia a más de 1 giga ohm. 5 principales configuraciones: 1. Célula unida: La micropipeta se sella a la membrana de una célula intacta. 2. Célula completa: La membrana dentro de la micropiopeta se rompe para accesar al interior de la célula. 3. Parche perforado: Agentes como antibióticos se agregan a la micropipeta para hacer pequeños agujeros en la membrana, proporcionando acceso al citosol. 4. Parche dentro-fuera: La micropipeta forma un sello, luego se jala rápidamente arrancando una parte de la membrana y expone el interior de la célula a las soluciones colocadas en el baño.

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5. Parche de salida: La micropipeta se retira suavemente para formar un sello convexo en la membrana, por lo que la cara extracelular del canal queda expuesta a tratamientos experimentales. Conceptos

1. Canales iónicos. La corriente-voltaje o IV curva muestra las dependencias de voltaje de corriente que fluye a través de un ion del canal y proporciona una idea de a que voltajes el canal está abierto o cerrado. 2. Activación neuronal. Abrazadera de la célula entera se utiliza para estimular el disparo de una neurona motora, mientras que las grabaciones son tomadas simultáneamente de la fibra del músculo que controla. 3. Membrana celular. Movimiento de iones a través de canales en membrana celular. 4. Flujo de iones. Resultado del movimiento de iones a través de canales en la membrana plasmática. 5. Diferencia de voltaje. Desequilibrio produce una diferencia de voltaje o potencial de membrana, interior es más negativo que el exterior6. Potencial de membrana. Energía eléctrica almacenada como voltaje, por las pequeñas baterías que son células. 7. Gradiente. Canales iónicos ayudan a mantener el gradiente por controlar el movimiento de iones a través de la membrana celular, que son las corrientes eléctricas. 8. Impulso. El impulso nervioso es un impulso eléctrico. 9. Diana farmacológica. Debido a que están expuestos al ambiente extracelular y un impacto significativo en la función celular. 10.Estímulos. Se observan relaciones claras entre la excitación neuronal y actividad muscular. 11. Patch-Clamp. Propiedades biofísicas de los canales iónicos que controlan la activación neuronal, afecta el flujo de iones a través de la membrana y permiten estudio intrincado de estos canales 12.Giga-ohm. La resistencia del sello está en la gama gigaohm. Para formar el sello, suavemente cambia de positivo a presión negativa con la jeringa. 13. Amplificador. Regula cuanta corriente debe añadirse mediante el electrodo de plata para mantener el voltaje constante. 14.Configuración de células. Una configuración de conjunto de células es cuando se rompe la membrana. Comentario Me agrada mucho este tipo de actividades, enriquecen y nos exponen ejemplos claros de aplicaciones a cerca de los temas vistos en clase, la calidad es excelente y con información clara y completa.

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Personalmente este tipo de actividades me mantienen muy atenta a la clase, hace que sea más dinámica y distinta a muchas clases que tomo actualmente, las cuales se pueden tornar tediosas al solo estar frente a la computadora anotando información. Agradezco mucho que Sarai nos proporcione esta información, así como las actividades que planea clase con clase.

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