Práctica 1 Microscopía PDF

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PRÁCTICA 1 MICROSCÓPÍA Propósito de la práctica Utilizar correctamente el microscopio compuesto mediante la observación de preparaciones para la diferenciación de microorganismos.

Fundamento teórico El microscopio compuesto es un instrumento de precisión que consiste en una serie de lentes diseñadas y acomodadas para proveer las máximas amplificaciones posibles del espécimen que se va a observar. El aumento total que se puede alcanzar en un microscopio compuesto depende de la combinación del ocular con el objetivo y se obtiene multiplicando el número de aumentos del ocular por el número de aumentos del objetivo. Tratar de observar a los microorganismos con un microscopio óptico sin un contraste adecuado es casi imposible, ya que como los microorganismos están compuestos sobre todo de agua, que es el medio en el que normalmente están suspendidos, es como tratar de ver un objeto blanco sobre un fondo blanco. Las tinciones que se usan en microbiología se desarrollaron para incrementar el contraste entre el espécimen y el fondo que lo rodea, ante la necesidad de poner de manifiesto la forma, tamaño y agrupación de las bacterias, así como sus estructuras. Fue Roberto Koch quien introdujo en microbiología el uso de preparaciones fijas o permanentes (frotis), al dejar secar al aire las preparaciones en fresco y sin teñir, para fijarlas químicamente y teñirlas después con colorantes derivados de la anilina. En la actualidad, la mayoría de las técnicas de tinción usan frotis fijos que consisten en colocar sobre un portaobjetos, una suspensión de bacterias que se deja secar. A la preparación así obtenida, se le pasa rápidamente sobre una flama para que el calor fije las células al portaobjetos. La acción desnaturalizante del calor deshidrata la suspensión y mata a la mayoría de las bacterias, dejándolas en posibilidad de ser teñidas posteriormente, así mismo, evita que las bacterias se desprendan del portaobjetos durante los diferentes procesos de tinción. Es importante saber que algunas bacterias pueden sobrevivir a la fijación del calor, por lo que todo frotis fijo debe considerarse potencialmente infeccioso. En el procedimiento de tinción se emplea un sólo colorante. Una vez fija la preparación, se le agrega la solución colorante y se deja actuar aproximadamente un minuto, se enjuaga con agua para quitar el exceso de colorante, se deja secar y se procede a observar al microscopio.

En las preparaciones en fresco se hace uso de los cubreobjetos y se emplean para observar protozoarios o células vivas.

Material, equipo y recursos 1) Microscopio de campo luminoso

Aceite de inmersión Cultivo de bacterias Asa bacteriológica Tela suave y papel seda Lápices de colores Portaobjetos Mechero de Bunsen

Soluciones Cristal violeta Azul de metileno Verde de malaquita Safranina Fucsina básica

Indicaciones para realizar la práctica Antes de iniciar con los procedimientos de la práctica leer el anexo. 1. Elaboración de frotis a partir de un medio sólido a. Marca en un extremo los portaobjetos limpios y desengrasados b. Con el asa bacteriológica o un gotero, coloca una pequeña gota de agua en el centro del portaobjetos. c. Con el asa estéril toma una pequeña cantidad de crecimiento y con movimientos giratorios haz una suspensión homogénea en la gota de agua, extendiéndola para formar una película delgada. Esterilice nuevamente el asa. d. Deja secar al aire el frotis. e. Fija el frotis al calor pasando la parte posterior del portaobjetos dos o tres veces por la flama del mechero, hasta alcanzar una temperatura que sea soportable en el dorso de la mano. Es importante que la laminilla no se caliente demasiado pues podrías calcinar a las bacterias modificando así sus características morfológicas y tintoriales. f. Colocar el frotis en el puente de tinción y cubrirlo con el colorante seleccionado durante un minuto. g. Lavar con chorro de agua suave, escurrir y dejar secar al aire. h. Observar al microscopio con todos los objetivos 10X, 40X y 100X

2. Elaboración de frotis a partir de medio líquido. a. Marca en un extremo los portaobjetos limpios y desengrasados. b. Sin poner agua, coloca con el asa estéril dos o tres gotas del cultivo en el centro del portaobjetos y extiéndelas para formar una película delgada y homogénea. c. Deja secar al aire los frotis. d. Fija los frotis al calor como se explicó en el caso anterior. e. Colocar el frotis en el puente de tinción y cubrirlo con el colorante seleccionado durante un minuto.

f. Lavar con chorro de agua suave, escurrir y dejar secar al aire. g. Observar al microscopio con todos los objetivos 10X, 40X y 100X. h. Realizar los dibujos correspondientes de cada una de las observaciones realizadas, indicando formas y agrupaciones.

3. Elaboración de una preparación en fresco. a. Marca en un extremo los portaobjetos limpios y desengrasados. b. Coloca con el asa estéril dos o tres gotas de agua proveniente de un charco verde en el centro del portaobjetos. c. Con mucho cuidado y procurando no dejar burbujas de aire, coloca un cubreobjetos sobre la muestra. d. Observa la preparación utilizando solamente los objetivos de seco débil (10X) y seco fuerte (40X).

Resultados que se esperan con el desarrollo El alumno aprenderá a enfocar una preparación y la observará en el microscopio compuesto.

Referencias correspondientes Collins, C.H., Lyne P.M. 1989. Métodos microbiológicos. Editorial Acribia. Zaragoza, España. Harley, J. y L. Prescott. 1993. Laboratory Exercises in Microbiology. 2nd. Edition, Wm. C. Brown, 478 págs. Márquez, O. 1977. Manual de Prácticas de Microbiología. Editora Nacional, México, D.F., 139 págs....