Practica 3 Micronucleos PDF

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UNIVERSIDAD DE SONORADivisión de Ciencias Biológicas y de la SaludMateria:Lab. GenéticaPráctica 3:IDENTIFICACIÓN DE MICRONÚCLEOS EN CÉLULASEXPUESTAS A FACTORES GENOTÓXICOSHermosillo, Sonora. A 20 de febrero del 2021OBJETIVO GENERALIdentificar y cuantificar micronúcleos en células epiteliales de la m...

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UNIVERSIDAD DE SONORA División de Ciencias Biológicas y de la Salud

Materia: Lab. Genética

Práctica 3: IDENTIFICACIÓN DE MICRONÚCLEOS EN CÉLULAS EXPUESTAS A FACTORES GENOTÓXICOS

Hermosillo, Sonora. A 20 de febrero del 2021

OBJETIVO GENERAL Identificar y cuantificar micronúcleos en células epiteliales de la mejilla mediante técnicas de tinción básicas.

ANTECEDENTES Los micronúcleos constituyen un biomarcador de efecto genotóxico ya que éstos son cuerpos extranucleares que se formaron durante la mitosis en la transición de metafase–anafase y pueden ser cromosomas completos rezagados por daño al huso mitótico, o bien fragmentos de cromosomas sin centrómero; en cualquiera de los casos, no lograron incorporarse a ninguno de los núcleo de las células hijas. Los micronúcleos se pueden diferenciar unos de otros por su tamaño o la presencia del centrómero o cinetocoro. Estos eventos pueden ocurrir espontáneamente; sin embargo, dichos fenómenos se incrementan en presencia de ciertas condiciones endógenas o exógenas. La presencia de micronúcleos puede emplearse como indicador del efecto de agentes mutágenos, genotóxicos o teratógenos, principalmente micronucleogénicos. El conteo de los micronúcleos es llevado a cabo fácilmente en cualquier tejido que se divida, como en el epitelio de mucosa bucal. Específicamente, los micronúcleos observados en células exfoliadas de tejido epitelial se forman en las células de la capa basal que es donde se lleva a cabo la división celular; éstas migran a la superficie en el transcurso de cinco a 14 días, de tal suerte que el monitoreo de poblaciones mediante la observación de este tejido puede reflejar el daño ocurrido durante este tiempo. Si bien es cierto que es posible aplicar la prueba de micronúcleos en cualquier tejido que se divida, en teoría todos los epitelios son candidatos de tejidos potencialmente utilizables; sin embargo, las características del epitelio de la mucosa oral favorecen su utilización en pruebas para evaluar genotóxicos y citotóxicos, debido a que es de fácil acceso, pero además la mucosa oral es el punto de contacto con muchos agentes potencialmente peligrosos. De hecho, la mucosa oral representa una barrera protectora para potenciales carcinógenos que, al ser metabolizados, generarían múltiples metabolitos reactivos; este tejido protege al resto del organismo de que estos compuestos penetren a otros órganos; sin embargo, al estar expuesta a estos agentes, la mucosa es susceptible de sufrir daño. Por otra parte, es importante considerar que aproximadamente el 60% del total de la superficie de revestimiento oral es epitelio no queratinizado, lo que favorece la absorción de colorantes y facilita a la vez la observación e identificación de características morfológicas del núcleo y la membrana celular.

MATERIALES Y REACTIVOS 1. 2. 3. 4.

Abatelenguas Portaobjetos Cubreobjetos Gotero

1. 2. 3. 4. 5. 6.

Solución salina Etanol Escarlata de Biebrich Alcohol Xilol Agua

7. Colorante verde

PROCEDIMIENTO 1.- Enjuagarse la boca con agua, en repetidas ocasiones. 2.- Humedecer un abatelenguas con agua y raspar cuidadosamente la parte interna de la mejilla. Eliminar el primer raspado y repetir la operación. 3.-Hacer un frotis del segundo raspado (Colocar una gota pequeña de solución salina sobre el portaobjetos y sobre esta disolver y extender el contenido del raspado). 4.-Fijar el frotis en etanol al 70 % por 2 minutos, escurrir exceso. 5.- Teñir con Escarlata de Biebrich durante 2 minutos. 6. - Lavar por 30 segundos en alcohol 50%. 7.- Teñir por 15-20 minutos a 20- 25°C en verde rápido. 8.-Lavar en etanol a 70% por 30 segundos, posteriormente lavar en etanol absoluto por 1 minuto y en etanol absoluto por 2 minutos más. 9.- Deshidratar y mantener en Xilol durante 1 minuto. 10. Observar con cubreobjetos enfocando desde 4X hasta 100X. Deberá realizar una búsqueda sistemática (izquierda a derecha, arriba hacia abajo), abarcando 100 campos de visualización y contabilizando en cada campo el número de células teñidas y la presencia o no de micronúcleos en cada una. Deberá reportar el % de células con micronúcleos. Nota 1: La tinción se monta en la campana de extracción. Nota 2: Los abatelenguas se colocan en un contenedor con agua y cloro al 5% durante 15 minutos antes de descartarlos a la basura común.

RESULTADOS

Con el enfoque de 4X hasta 100X se pudieron identificar bien los micronúcleos y observamos la gran cantidad que hay en las muestras de la mucosa bucal.

DISCUSIÓN Al ver en microscopio se pudo observar las células como estas se van aumentando, en la observación del aumento de 4x apenas se puede alcanzar a observar las células pero muy poco se alcanzan a distinguir, después se realizó el aumento 10x se puede observar con mejor calidad las células, lo cual ya se puede distinguir el núcleo y al hacer el cambio a 100x se alcanza a observar cada célula y se ve claramente la membrana, el citoplasma, el núcleo, en las células que se tiñeron de verde y en la célula teñida con escarlatas se distingue la membran, el citoplasma y el micronúcleo.

CONCLUSIONES Comprendimos al observar varias imágenes al microscopio la obtención visual de micronúcleo la cual se logro distinguirlo en un a célula normal, al igual que logramos relacionar los agentes genotóxicos con la formación de estas nucleares anormales de la celulosa y pudimos verlos con cualquier tipo de tensión, la cual se pueden distinguir el micronúcleos.

BIBLIOGRAFÍA ●

Olivia Torres-Bugarín, María Guadalupe Zavala-Cerna, Nicole MacrizRomero, Aurelio Flores-García, María Luisa Ramos-Ibarra. (Enero-Abril 2013 ). Procedimientos básicos de la prueba de micronúcleos y

anormalidades nucleares en células exfoliadas de mucosa oral. El Residente, Volumen 8, p. 4-11. }

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Diccionario Enciclopédico Vox 1. ©2009LarousseEditorial, S. L. (s.f.). micronúcleo. The Free Dictionary. com. https://es.thefreedictionary.com/micron%C3%BAcleo...