Práctica diagnóstico de Protozoos PDF

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Diagnóstico de laboratorio para protozoarios...

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Práctica: Diagnóstico de Protozoos Intestinales

Febrero 2020

PRÁCTICAS DE PARASITOLOGÍA 1. DIAGNÓSTICO DE PROTOZOOS INTESTINALES OBJETIVOS 1. Explicar los procedimientos de obtención y manejo de materia fecal para realizar estudios microscópicos 2. Analizar y describir los procedimientos frecuentemente usados en el diagnóstico de Entamoebosis, Giardiosis, Balantidiosis y Cryptosporidiosis. 3. Explicar el procedimiento para conservar materia fecal con solución de formaldehído. 4. Realizar el examen coproparasitoscópico directo en fresco. 5. Identificar las estructuras diagnósticas de Entamoeba histolytica, Giardia lamblia, Balantidium coli y Cryptosporidium en materia fecal de preparaciones frescas y fijas. INTRODUCCIÓN La recolección y el manejo adecuado de materia fecal son indispensables para la identificación correcta de los parásitos en el laboratorio. Dependiendo de la materia fecal se elige el procedimiento para la búsqueda de trofozoitos, quistes, ooquistes, huevos ó larvas. Si las heces son blandas, diarreicas y líquidas deben examinarse dentro de las primeras dos horas de haber sido recolectadas; si esto no es posible se adiciona una solución conservadora como el formol al 10 %. Una de las protozoosis intestinales con las que se enfrenta el médico con cierta frecuencia es la entamoebosis; es relativamente fácil la identificación de los trofozoítos y quistes de agente causal en la materia fecal. Los trofozoitos miden de 10 a 65 μm de diámetro. En su citoplasma se puede diferenciar el ectoplasma hialino, así como un endoplasma granuloso con aspecto de vidrio molido. Su núcleo localizado hacia el centro muestra un endosoma central con gránulos de cromatina pequeños adosados a la membrana nuclear. Los quistes miden de 5 a 20 μm, cuando son maduros se observan cuatro núcleos con cariosoma central y cromatina fina periférica. Giardia lamblia es un enteropatógeno que se localiza usualmente en las criptas de la mucosa del duodeno y la porción inicial del yeyuno. En el caso de evacuaciones líquidas ó pastosas el examen indicado será directo microscópico en fresco para realizar la búsqueda de trofozoítos, con su característica forma piriforme y su disco suctor en el tercio anterior, cuatro núcleos y cuatro pares de flagelos. Si las heces son formadas se emplearán métodos de concentración por flotación para buscar quistes. Éstos presentan una forma ovoidal con dos a cuatro núcleos. La Balantidiasis es una protozoosis cuyas manifestaciones clínicas son muy similares a las que se presentan en la entamoebosis, shigelosis y otras, por lo que debe recurrirse a exámenes de laboratorio para demostrar el agente etiológico como el CPS para buscar trofozoitos grandes (58-120 μm) de forma ovoidal rodeados de cilios. En su citoplasma es posible observar vacuolas alimenticias, así como un macronúcleo en forma de riñón. Los quistes son de forma esférica y miden de 40-65 μm y se encuentran rodeados por una pared quística gruesa transparente en el interior de la cual se observa al macronúcleo y una hilera de cilios. Cryptosporidium se localiza en el intestino delgado, para reconocer los ooquistes, se recurre a la tinción Kinyoun, se observan estructuras redondeadas de 5 μm de diámetro con una pared quística no refringente que se tiñen de un color rojo brillante. Ocasionalmente es posible ver delineados en su interior cuatro esporozoitos. MATERIAL 1. Un frasco de heces que contengan quistes de E. histolytica, G. duodenalis 2. Cultivo de ciliados 3. Pipetas Pasteur y bulbos de caucho 4. Portaobjetos de 26x76 mm 5. Cubreobjetos de 22x22mm 6. Aplicadores de madera 7. Frasco gotero con lugol parasitológico 8. Preparaciones fijas de heces con trofozoitos y/ó quistes de E. histolytica, Giardia lamblia y Cryptosporidium MÉTODO 1. Realizar un examen directo en fresco a partir del cultivo de ciliados y observar la movilidad de los organismos con los objetivos de 10x y 40x. 2. Realizar un examen coproparasitoscópico en fresco. a) Colocar una gota de solución de cloruro de sodio a 0.85% sobre el extremo de un portabjetos y en el otro extremo colocar una gota de lugol parasitológico. b) Tomar con un aplicador aproximadamente 2 mg de la materia fecal y mezclarla con la gota de solución salina por un lado y tomar otros 2 mg de heces y mezclar con el lugol. c) Hacer una suspensión uniforme y retirar los detritus macroscópicos. d) Colocar el cubreobjetos e) Efectuar la observación microscópica con los objetivos 10 y 40X. f) Describir las estructuras parasitarias que identifica.

3. Observar microscópicamente las preparaciones de los cortes de tejido, con los objetivos de 10x, 40 100x. Describir la morfología de B. coli y Entamoeba histolytica. 4. Observar microscópicamente las preparaciones fijas de materia fecal, con los objetivos de 10x, 40 y 100x. Describir la morfología de Cryptosporidium y Giardia lamblia CUESTIONARIO PARA RESOLVER DURANTE LA PRÁCTICA Correlaciona las siguientes columnas anotando la letra correcta en el paréntesis correspondiente: (D) Hemaglutinación indirecta a) Examen de elección en el diagnóstico de la entamebiosis intestinal aguda (C) Examen directo en fresco b) Método de laboratorio más adecuado para confirmar el diagnóstico de absceso hepático entamoebiano (B ) Impronta c) Es de utilidad para buscar trofozoitos de E. histolytica en úlceras cutáneas d) Para la confirmación diagnóstica de una amibiasis intestinal crónica es de utilidad realizar

(A ) CPS cualitativo de concentración-flotación

2. ¿Cuál es el examen de laboratorio de elección para el diagnóstico de la Giardiosis aguda? En pacientes con evacuaciones blandas o diarreicas se indica examen directo en fresco y hay mayor probabilidad de encontrar trofozoítos. Los estudios coproparasitoscópicos (cps) cualitativos de concentración, como flotación (sulfato de zinc) o sedimentación (formol-éter), se llevan a cabo en pacientes con evacuaciones de consistencia formada o semiformada y es muy posible encontrar quistes. La sensibilidad en los cps se incrementa cuando se analizan varias muestras de diferentes días: con una muestra la sensibilidad es de 76 a 86%; con dos, de 90%, y con tres hasta de 97.6%. Según estos datos, el número mínimo de estudios cps para descartar la giardiasis es de tres. Si los resultados son negativos y el cuadro clínico es consistente con esta parasitosis, se deberá solicitar una serie de cinco estudios. 3. Anote dos productos biológicos útiles para realizar el diagnóstico de la Giardiosis Antígeno GSA-65 y proteínas como la giardina. 4. ¿En qué consiste la tinción Kinyoun, para qué microorganismo está indicada? Una modificación a la tinción de Ziehl-Neelsen, es la de Kinyoun, la cual emplea la fucsina fenicada que no requiere de calor; es una técnica rápida en frío muy utilizada en la actualidad, considerada el “estándar de oro”.

En los siguientes esquemas, escriba lo que a continuación se indica. a. Nombre del parásito b. Fase en que se encuentra c. Anote en los esquemas los nombres de las estructuras señaladas

Rizoplasma Nucleolo

Granulo basal

Pseudopodo

Cuerpo parabasal Axostilo Flagelo

Ectoplasma Endoplasma

Flagelo posterior

Cariosoma central

Giardia lamblia Trofozoito

Entamoeba histolytica Trofozoito

Peristoma Cistoma Vacuola contractil Macronucleo Micronucleo Vacuola alimenticia Citopigio

Casquete polar Micropilo Granulo polar Esporocito Cuerpo de Estieda

Pared Cuerpo ooquistico residual Esporozoito

Cuerpo esporozitico residual Nucleo del esporozoito

Balantidium coli

Eimeria

Trofozoito

Oocito esporulado...