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ESTUDIO DE LA REACCIÓN DE HILL EN EXTRACTOS DE ESPINACAS FISIOLOGÍA VEGETAL

Laura Huet Moyano UNIVERDIDAD DE CÓRDOBA, GRUPO 3

FUNDAMENTOS La fotosíntesis es un proceso en el cual se emplea la energía de la luz para generar energía química en forma de NADPH, este se emplea para convertir el CO2 del aire en carbohidratos liberándose oxígeno. Los aceptadores naturales de electrones son la ferredoxina y el NADP. En esta práctica, realizaremos la reacción de Hill para detectar el transporte de electrones; una suspensión de cloroplastos aislados puede desprender O 2 si están en contacto con la luz y si se le aporta un compuesto oxidados que se capaz de aceptar electrones (emplearemos DPIP). En nuestra práctica también emplearemos DCMU; un inhibidor de esta reacción, por lp tanto, en su presencia, se bloquea el transporte de electrones.

MÉTODOS 1- En un mortero añadir 0,5g de hojas de espinacas, machacamos en el mortero y vamos añadiendo primero 2ml de tampón de extracción y seguimos machacando y después terminamos de añadir los 3ml que nos falta de tampón de extracción y tiene homogéneo.

2- Tomamos 1ml del extracto preparado antes, y lo pasamos a un vial, lo centrifugamos durante 5min a 500g.

3- Pasar el contenido del sobrenadante a un nuevo vial. Preparamos la 4 mezcla. El tubo 3 tiene que estar tapado con papel de aluminio.

Tubo

Tampón (ml)

DPIP (ml)

DCMU (ml)

Extractos (ml)

1 2 3 4

3 2,8 2,8 1,8

1 1 1 1

1

0,2 0,2 0,2

4- Medimos su abs a 600nm, después lo colocamos en el foco de la luz hasta que el tubo dos cambie de color y medimos de nuevo la abs a 600

5- Por ultimo tomamos 0,2ml del extracto y añadimos 1,3ml de acetona y centrifugamos durante 1min. Utilizamos 1,5ml de acetona para el blanco y medimos la abs a 675nm. Utilizamos la siguiente formula; Clorofila (mg/ml)= (abs 675nm/35)*7,5

RESULTADOS Y CONCLUSIONES Tubo 1 2 3 4

At0 1,435 1,462 1,452 1,449

At0x-At01 0 0,027 0,017 0,014

Atf 1,444 1,446 1,451 1,444

Atfx-Atf1 0 0,002 0,007 0

IncA 0 -0,025 -0,01 -0,014

IncA/t 0 -0,0025 -0,001 -0,0014

(IncA/t)*20 0 -0,05 -0,02 -0,028

((IncA/t)*20)/Chl 0 -0,520 -0,208 -0,291

Clorofila (mg/ml)= (abs 675nm/35)*7,5 Clorofila (mg/ml)= (abs 0,450nm/35)*7,5=0,096 Chl Los valores de absorbancia obtenido después de exponer nuestros tubos a la luz (absorbancia final) son menores que los de la absorbancia inicial que son los tubos antes de exponerlo a la luz.  Tubo1: observamos que la absorbancia inicial y final son muy similares, esto se debe a que el tubo no contiene extracto por lo que no tiene cloroplasto, no se produce la reacción. Tubo2: Cuando lo exponemos a la luz, transcurrido 10min no se observa un  cambio de color, por lo que no hay transporte de electrones y ni tampoco desprendimientos de O2 .  Tubo3: No se observa cambio de color ya que nuestro tubo se encontraba tapado con papel de aluminio, no le daba la luz por lo que no se produce transporte de electrones. En los tubos 2 y 3 se observa una diferencia de absorbancia entre la absorbancia inicial y la final, ya que el tubo 2 se expone a la luz mientras que el tubo 3 no.  Tubo4: En este tubo añadimos el DCMU que impide el transporte de electrones ya que se trata de un herbicida, y por lo tanto inhibe la reacción. Por lo que no se observa un cambio de color cuando lo exponemos a luz, lo que la absorbancia inicial y la final son similares, puesto que no se produce reacción....