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3 ª Práctica de laboratorio...

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Eva María Sánchez Flores. Biología. ESTUDIO DE LA REACCIÓN DE HILL EN EXTRACTOS DE HOJAS DE ESPINACAS Introducción. La radiación luminosa procedente del sol es la fuente de luz mediante la que se produce el proceso fisiológico denominado fotosíntesis; determinados organismos vivos autótrofos son capaces de absorber y utilizar parte de esa energía luminosa solar. El tipo de fotosíntesis que realizan las plantas se caracteriza por la formación de oxígeno molecular como subproducto; por ello se denomina fotosíntesis oxigénica. En el proceso de la fotosíntesis se pueden distinguir dos fases: una primera de absorción y conversión de energía luminosa en energía electroquímica redox y acidobásica, y otra segunda, de asimilación de elementos químicos esenciales para la síntesis biomolecular. A nivel celular, la maquinaria fotosintética se localiza en los orgánulos subcelulares llamados cloroplastos, separados del citosol por una envoltura de doble membrana. Los cloroplastos contienen también un intrincado sistema de membranas internas. Las membranas tilacoidales contienen el aparato biomolecular necesario para llevar a cabo la primera fase fotosintética, es decir, son las membranas fotosintéticas en las que se encuentran los cuatro complejos proteínicos que funcionan hasta producir NADPH y ATP. Los tres primeros están implicados en la transferencia electrónica y protónica a través de la membrana tilacoide en contra del gradiente. Dos de estos complejos son fotosistemas: el fotosistema I cuya proteína es la P680 y el fotosistema II cuya clorofila es la P700. El tercer complejo es un sistema conector entre ambos fotosistemas, llamado complejo citocromo b6f. El cuarto complejo es la ATP sintasa.

Resultados. Reacción de Hill con DPIP como aceptor de electrones: Tubo At0 1 1,51 2 1,49 3 1,50 4 1,54

At0-At1 -0,02 -0,01 -0,03

At 1,43 1,14 1,40 1,47

At-At1 -0,29 -0,03 -0,04

Inc A 0,27 0,02 0,01

IncA/t

IncA/t/Chl

0,0108 4,32*10^-4 8*10^-4 3,3*10^-5 4*10^-4 1,6*10^-5

Concentración de clorofila: Clorofila (mg/ml)= (675 nm/35)*7,5= 144,64 mg/ml Absorbancia acetona sin extracto= 0,030 Absorbancia extracto + acetona= 0,630 t=25 min Discusión. Con estos resultados podemos decir que la clorofila absorbe mayor luz sin presencia de DIPP, es decir en el tubo control (1) y aumenta drásticamente su absorbancia en presencia de DCMU, aunque también contenga DIPP (tubo 4), ya que el DCMU es un inhibidor de la reacción de Hill y tienen por ello un efecto herbicida. Podemos observar de igual forma como hay una leve diferencia de absorbancia en el tubo (3) con respecto al (2), aunque tengan los mismos componentes y reactivos; ya que el 3 está en fase oscura envuelto por papel de aluminio. Todo esto viene dado por el transporte de electrones a través de los fotosistemas I y II, siendo la luz la que proporciona la energía para que se lleve a cabo....