Reporte Practica 8 Fosfolípidos PDF

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IntroducciónDebido a que los lípidos son insolubles en agua, su extracción y el posterior fraccionamiento requieren la utilización de disolventes orgánicos y algunas técnicas poco usadas en la purificación de moléculas hidrosolubles tales como las proteínas y los glúcidos. En general, las mezclas co...

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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS BIOQUÍMICA GENERAL Práctica No. 8 Separación de fosfolípidos por cromatografía en capa fina. Díaz Vega Alejandra Maribel, Tovar Ortiz Alan Bruce 4QV1

Introducción Debido a que los lípidos son insolubles en agua, su extracción y el posterior fraccionamiento requieren la utilización de disolventes orgánicos y algunas técnicas poco usadas en la purificación de moléculas hidrosolubles tales como las proteínas y los glúcidos. En general, las mezclas complejas de lipi8dos se separan por las diferencias en la polaridad o solubilidad en disolventes apolares. Los lípidos que contienen ácidos grasos en enlaces éster o amida se pueden hidrolizar tratándolos con un ácido o un álcali o con enzimas hidrolíticos específicos para analizar sus componentes. Los lípidos neutros se extraen fácilmente de los tejidos con éter etílico, cloroformo o benceno, disolventes en los que no se produce la agregación de lípidos promovida por el efecto hidrofóbico. Los lípidos de membrana se extraen mejor con disolventes orgánicos mas polares, tales como etanol o metanol que reducen las interacciones hidrofóbicas entre las moléculas de lípidos pero que también debilitan los puentes de hidrogeno y las interacciones electrostáticas que unen los lípidos de membrana a las proteínas de membrana. Una solución extractiva muy utilizada es una mezcla de cloroformo, metanol y agua, inicialmente en proporciones que sean miscibles produciendo una sola fase. Después de homogenar el tejido en este disolvente para extraer todos los lípidos, se añade más agua al extracto resultante, que se separa en dos fases, metanol/agua (fase superior) y cloroformo (fase inferior). Los lípidos permanecen en el cloroformo, y las moléculas más polares tales como proteínas y glúcidos se sitúan en la fase polar de metanol/agua.

Objetivos Extraer e identificar los fosfolípidos presentes en una muestra de yema de huevo

Aplicar la técnica de cromatografía en capa fina para la separación de los fosfolípidos de la yema de huevo.

Resultados

Fig. 1 Resultados obtenidos del revelado de las 4 placas cromatografícas

Tabla 1.- Calculo de las Rf de cada reactivo tomando el valor de 6.5 como la distancia recorrida del eluyente.

Placa

Molibdato

Yodo

Ninhidrina Bismuto

Cálculo de Rf

Distancia recorrida por el compuesto (cm) 1.3 3.5 4.8 1.3 3.2 4.2 5.7 2.5 4.8 1.2 2.8 4.9

Rf 0.2 0.53 0.73 0.2 0.49 0.64 0.87 0.38 0.73 0.18 0.43 0.75

Rf=

𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜

Rf =

𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑒𝑙𝑢𝑦𝑒𝑛𝑡𝑒

1.3 6.5

caso de la esfingomielina, puede ser por la cantidad que se colocó en las placas, este pudo ser menor lo que causó que no se observe la mancha

= 0.2

Discusión En esta práctica para la identificación de fosfolípidos, se realizaron 4 placas cromatográficas La primera prueba fue con Molibdato y este identifica fosfolípidos en general, las manchas que se observaron son de color azul. De acuerdo con los resultados de los cálculos de Rf de cada mancha revelada. Tomando de referencia el perfil de corrimiento en capa fina de fosfolípidos mostrado en clase, observamos que la mancha 1 es de lisofosfatidil colina, la mancha 2 es de fosfatidil serina/fosfatidil colina (lecitina) y la mancha 3 es de fosfatidil-etanol-amina. Para la prueba con cristales de Yodo, esta es para identificar lípidos que contienen dobles enlaces en su molécula, observamos que la mancha 1 es de lisofosfatidil colina, la mancha 2 es de fosfatidil serina/fosfatidil colina (lecitina), la mancha 3 es de fosfatidil-etanol-amina y la mancha 4 es de lípidos neutros. La prueba de ninhidrina es para revelar fosfolípidos que contienen grupos amino. Las manchas que se observaron fueron de color violeta, en la mancha 1 se observa que es de fosfatidil serina/fosfatidil colina (lecitina); y la mancha 2 es de fosfatidiletanol-amina. Para la prueba de bismuto, esta es para revelar fosfolípidos que contienen colina. Las manchas se observaron amarillas, se observa que la mancha 1 es de fosfatidil colina (lisolecitina), la mancha 2 es de fosfatidil serina/ fosfatidil colina (lecitina) y la mancha 3 es de fosfatidil-etanol- amina. El revelado de este cromatograma de acuerdo a el perfil de corrimiento en capa fina de fosfolípidos, es incorrecto, porque no debería haber ninguna mancha que indique la presencia de fosfatidiletanol.amina, este resultado puedo haber sido por la contaminación de la muestra durante el proceso de aplicación sobre la placa cromatográfica o durante el desarrollo del cromatograma. Por otro lado, la ausencia de manchas en los cromatogramas que debía haber y no hay, como el

Conclusión La extracción y separación de los lípidos de la yema de huevo por medio de una cromatografía en capa fina permite nos permitió la identificación de estos.

Pregunta extra Glicerol

Triglicerol

Ácido oleico trans

Ácido oleico cis

Bibliografía

Cromatografia en capa fina de lípidos, Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Facultad de Medicina, Universidad de Córdoba. Lehninger, Albert, Nelson, David L. Principios de Bioquímica. Séptima Edición, Ediciones Omega....