Técnicas de Dilución y Vertido en placa PDF

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Comentario de la Técnica de Dilución y Vertido en PlacaEn el estudio de los microorganismos, se han diseñado diversos métodos que permiten cultivarlos bajo condiciones artificiales y experimentales con la finalidad de manejar un solo tipo de microorganismo.La técnica más común para el manejo de micr...

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Comentario de la Técnica de Dilución y Vertido en Placa En el estudio de los microorganismos, se han diseñado diversos métodos que permiten cultivarlos bajo condiciones artificiales y experimentales con la finalidad de manejar un solo tipo de microorganismo. La técnica más común para el manejo de microorganismos consiste en transferir una muestra microbiológica de un ambiente determinado a un medio de cultivo, para obtener un medio de cultivo axénico o mixto. Se deben tomar en cuenta el aspecto nutricional, las condiciones ambientales de su hábitat natural, por lo que en el medio de cultivo se debe ajustar el pH, concentración de sales y durante la incubación condiciones como: temperatura, aireación y luminosidad. El uso de este tipo de procedimientos ha permitido propagar a los microorganismos en cultivos mixtos, así como su aislamiento y la obtención de cultivos puros, facilitando su estudio y caracterización. La forma de sembrarlos y cultivarlos depende del tipo de microorganismo y propósito específico del estudio. Cuando éste contiene una sola especie de microorganismo, se denomina cultivo puro o axénico, cuando contiene más de una especie de microorganismos se denomina cultivo mixto. Un cultivo axénico consiste en una sola especie microbiana, proveniente de una sola célula se obtiene artificialmente en el laboratorio. Para obtener este tipo de cultivo se han de tomar precauciones especiales, estos microorganismos no deseados o contaminantes deben ser eliminados de un cultivo para que éste pueda ser axénico. El segundo paso para obtener un cultivo axénico es inocular una sola célula de un microorganismo en un medio sólido o líquido, esterilizado previamente. De esta manera, aislamos un solo microorganismo del resto y se podrá multiplicar en condiciones favorables. Vertido en placa Consiste en tomar un mililitro de muestra diluida de una cepa de microorganismos contenida en un tubo de ensaye la cual se verterá en una placa Petri utilizando como medida de esterilización acercar la boca del tubo de ensaye al mechero antes y después de tomar la muestra. Posteriormente se agregará el correspondiente tipo de agar a utilizar, se deben realizar movimientos circulares primeramente a la izquierda y después a la derecha y también movimiento horizontales y verticales con la finalidad de homogeneizar la muestra con el agar. Cuando el agar se ha solidificado se le da la vuelta y se ordena en estivas para para la incubación de la bacteria. Recuento de microorganismos

El recuento en placa, se emplean diluciones de una muestra concentrada para que cada colonia formada provenga de un solo microorganismo, se utiliza principalmente para la cuantificación de bacterias y levaduras. Para realizar un correcto conteo de colonias se necesita un numero determinado de colonias, este número probabilístico es de 25 y 250 unidades formadoras de colonias, si hay duplicados se debe calcular el promedio. El numero total de colonias debe ser multiplicado por el inverso de la dilución y por la cantidad de muestra usada, el numero resultante debe ser redondeado a dos cifras significativas y se expresa en forma exponencial cuando el tercer digito es 4 o menor se omite. Si tenemos una placa con un crecimiento extendido se cuenta como una sola colonia y se realiza el conteo, si tenemos placas en el rango de colonias con diluciones consecutivas se aplica el factor dilución a cada una de las diluciones obteniendo las UFC, PARA REALIZAR un promedio entre ellas, las placas que no se encuentran en el rango de 25 a 250 colonias, se utiliza la cantidad de colonias presentes y se multiplica por el factor de dilución y obtener un valor estimado. Cuando las colonias presentes en las placas sobrepasen el rango estimado de colonias por placa, se realiza un conteo por secciones, si es un cuarto de la sección total de la placa, se cuenta la cantidad estimada de colonias y se multiplica por cuatro, muestras si se cuenta la mitad, se realiza el conteo y se multiplica por dos. Para realizar el recuento de unidades formadoras de colonias se utiliza un contador de colonias. Las temperaturas para incubar son para coliformes y bacterias mesófilas aerobias de 35 ºC mientras que en hongos y levaduras se utiliza una temperatura de 25ºC. Este método no asegura la presencia de un cultivo axénico hasta que se repita el proceso, las dos técnicas de siembra por dilución presentan la capacidad de obtener un mayor número de colonias aisladas por lo tanto se elige este método cuando se ha de seleccionar una cepa a partir de una mezcla con varios tipos de microorganismos....