TEMA 03: TÉCNICAS Y MÉTODOS HEMATOLÓGICOS PDF

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Profesores Antonio Liras y Eva González...

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TEMA 3: TÉCNICAS Y MÉTODOS HEMATOLÓGICOS OBTENCIÓN Y PROCESAMIENTO Sangre: Sangre total: O sangre entera. Se hará el hemograma: recuento total de glóbulos rojos, blancos, fórmula leucocitaria, Hb, Hm y la velocidad de sedimentación etc. Una alícuota de ese espécimen se centrifuga a 3500 rpm durante 10 min (más velocidad por tener densidades más altas y parecidas). Sobrenadante: Plasma: Se obtiene después anticoagulante.

de

una centrifugación en

un

tubo que

tiene

Suero: Sangre tal cual (se formará un coágulo). Funcionalmente ha consumido factores de coagulación que nos impediría estudiar factores de coagulación. Hemolisis: Agitación, temperatura.

Obtención de sangre: Venopunción: Materiales: El más moderno es el de “mariposa”. Los tubos de vacío se conectan a la jeringa y por vacío va saliendo la sangre.

¿Dónde se punza? Se utiliza una vía distal de retorno, de una vena más o menos superficial, que se vea lo mejor posible. La punción para extracción de sangre se realiza, por lo general, en la fosa antecubital, donde se encuentra la vena cubital mediana, que a veces es un poco difícil de ver. La vena cefálica, que se ve mejor, se utiliza, ya que es más útil, para el mantenimiento de vías que suministran medicamentos.

Ángulo de punción:

El mejor ángulo para realizar la punción es de unos 15º (Foto 1). Si nos pasamos o nos quedamos cortos (Foto 1 y 2) se producirá un hematoma. Puede ocurrir también que aparezca un bisel (Foto 4) y que la aguja se quede pegada al epitelio, o que se punce en una zona de válvula (Foto 5) y no salga la sangre; o que haya una constricción (Foto 6) que puede producirse por manipulación, por los nervios. Es por eso por lo que es importante la buena extracción de la sangre, pues si hay que sacar la aguja por alguna de las razones anteriores tendremos que buscar otra zona de punción. Punción cutánea: Se utilizan lancetas, tubos capilares de vacío. Normalmente (en adultos) se punza en el dedo, perpendicularmente a las huellas dactilares. En niños se suele punzar en el talón ya que es una zona de capilares.

Recolección y contenedores:

TÉCNICAS Y MÉTODOS BÁSICOS Hemólisis: Tras la realización de un análisis se puede producir una hemolisis (rotura de glóbulos rojos). Hay que evitar que esto ocurra. Las causas de la hemolisis son: Lentitud en la extracción de la sangre. Agitación de la sangre. Temperatura. Puede haber una cuarta causa, que sería una patología base que produzca hemolisis. La sangre no debe agitarse. Lo que se hace es invertir sucesivas veces el tubo. Están reguladas las veces que se invierte el tubo. Si la extracción se realiza rápidamente, la temperatura es la correcta y el tubo con la sangre no se agita sino que se invierte esas causas de hemolisis desaparecen. Hay que evitar que se produzca hemolisis en la muestra de sangre porque al destruirse los glóbulos rojos los vamos a infravalorar y por otra parte, si utilizamos métodos colorimétricos para medir la hemoglobina los resultados también se van a ver afectados. Recuento total de células: Para el recuento se utiliza la cámara de Neubauer. Para hacer dicho recuento hay que hacer previamente una dilución, para la cual se utiliza el Unopette, que es un conjunto de líquidos de dilución que destruye unas células u otras en función de las que queramos contar, lleva un sistema de pipeteo. Es decir, selecciona células cargándose otras (leucocitos, glóbulos rojos, plaquetas) Recuento de células = (Células contadas x factor de dilución) / superficie (mm2 X profundidad (0.1 mm)

Hemoglobina: Se mide por métodos colorimétricos (manual o automatizado). El método estándar es el de la cianmetahemoglobina. Es una reacción de oxidación: la hemoglobina en estado reducido 2+ pasa a metahemoglobina (Fe3+) oxidada. La cianmetahemoglobina produce un color a 540nm. La absorbancia de la cianmetahemoglobina a 540nm es rectamente proporcional a la concentración de Hb. Esto se rige por la Ley de Lamber Beer: la absorbancia es directamente proporcional a la concentración de hemoglobina, cuanto más color tengo más hemoglobina tengo.

Microhematocrito: Se refiere al % de hematíes. Se consigue a 10.000-15.000 rpm / 5 minutos. Con una muy alta centrifugación en una microcentrífuga.

Velocidad de sedimentación: Es una de las técnicas más antiguas de hematología. Medida de la velocidad de caída de los elementos formes por gravedad. (...